發(fā)布時間：2018-03-09 13:31

  本文選題：DNA回旋酶　切入點：結核　出處：《中國協(xié)和醫(yī)科大學》2008年碩士論文　論文類型：學位論文

【摘要】： DNA回旋酶是細菌所特有的一種拓撲異構酶,該酶由兩個A亞基和兩個B亞基聚合而成。A、B亞基分別有各自的功能區(qū),共同決定該酶的生物學功能。它能夠利用ATP的能量將共價閉合環(huán)狀DNA(cccDNA)轉變?yōu)樨摮菪鼶NA,從而維持細菌體內正常的超螺旋水平。篩選結核桿菌回旋酶抑制劑有可能獲得新型抗結核藥物。 本課題組應用細胞水平的以DNA回旋酶B亞基為靶點的抗結核藥物篩選模型,篩選得到了25個陽性菌株,本研究對這些菌株進行了再篩選,對活性穩(wěn)定的陽性菌株I03A-09005和I03A-00463進行深入研究。菌株I03A-09005的發(fā)酵液經(jīng)大孔樹脂柱層析,硅膠柱,HPLC分離得到了單一組分的活性化合物9005B,該化合物對H37Rv的MIC為64～128 ug/ml,并經(jīng)過質譜、碳譜、氫譜等進行結構確證研究,鑒定9005B為放線菌素X2。菌株I03A-00463的發(fā)酵液經(jīng)大孔樹脂柱層析,ODS柱層析,得到純度約為28.15%的陽性化合物03-0463。同時,采用分子生物學方法構建了含有結核桿菌H37Rv gyrB基因的表達質粒pET-19b/gyrB,轉化至BL21(λDE3)pLysS中,利用原核表達系統(tǒng)成功克隆表達了結核桿菌H37Rv的DNA回旋酶B亞基,為建立分子水平得以DNA回旋酶B亞基為靶點的抗結核藥物篩選模型奠定了基礎。
[Abstract]:DNA gyrase is a topoisomerase specific bacteria, the enzyme is composed of two A subunits and two B subunit polymerization of.A and B subunits respectively have their respective functional areas, jointly determine the biological function of the enzyme. It can use the energy of ATP will be covalently closed circular DNA (cccDNA) change negative supercoiled DNA, so as to maintain the normal level of supercoiling in bacteria. Screening Mycobacterium tuberculosis gyrase inhibitors may obtain new anti tuberculosis drugs.
The level of the research group using cell with DNA gyrase B subunit as a screening model for drug screening, we obtained 25 positive strains, this study conducted a re screening of these strains, in-depth study of the active and stable positive strains I03A-09005 and I03A-00463. The fermentation broth of strain I03A-09005 by macroporous resin column chromatography, silica gel column, HPLC isolated from the single component of the active compound 9005B, the compound of H37Rv MIC was 64~128 ug/ml, and after the mass spectrum of carbon, hydrogen spectrum of structure identification, identification of 9005B fermentation liquid of actinomycin X2. strain I03A-00463 by macroporous resin column chromatography, ODS column chromatography, the purity of about 28.15% positive compounds 03-0463. and plasmid pET-19b/gyrB containing H37Rv of Mycobacterium tuberculosis gyrB gene using molecular biology methods, conversion to BL21 (2 DE3) pLysS in use The prokaryotic expression system successfully cloned and expressed the DNA cyclogyrase B subunit of Mycobacterium tuberculosis H37Rv, which laid the foundation for establishing the screening model of anti tuberculosis drugs targeting at the molecular level and the DNA cyclogyrase B subunit.

【學位授予單位】：中國協(xié)和醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2008
【分類號】：R378

【參考文獻】

相關期刊論文 前8條

1 陳林娜;周立勤;李波;譚大奇;劉玲;王春香;;自制中藥制劑對耐青霉素肺炎鏈球菌的抑菌效果觀察[J];湖北中醫(yī)雜志;2006年03期

2 馬國正;蔣勇軍;俞慶森;;諾氟沙星-DNA復合物的分子動力學模擬[J];化學學報;2007年04期

3 文玉華,朱如曾,周富信,王崇愚;分子動力學模擬的主要技術[J];力學進展;2003年01期

4 潘衛(wèi)松,劉美鳳,石鉞,邢東明,杜力軍,何希輝,張宏印;血清藥理學、血清化學和中藥藥代動力學[J];世界科學技術;2002年03期

5 熊英,傅穎媛,況南珍,張文平;黃芩苷抗白念珠菌作用及機制研究[J];中國藥理學通報;2004年12期

6 王理達,果德安,何其華,胡迎慶,屠鵬飛,鄭俊華,袁蘭;3種抗真菌生藥活性成分對兩種真菌細胞遺傳物質的影響[J];藥學學報;2000年11期

7 謝小梅,張文平,付穎瑗,許楊;肉桂醛與檸檬醛抗曲霉菌作用機制的研究[J];中草藥;2004年04期

8 袁勇;周成合;劉嬙;宋春澤;;新型合成抗菌藥物研究新進展[J];中國新藥雜志;2007年05期

，

本文編號：1588739