發(fā)布時間：2018-03-09 13:31

  本文選題：DNA回旋酶　切入點(diǎn)：結(jié)核　出處：《中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué)》2008年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】： DNA回旋酶是細(xì)菌所特有的一種拓?fù)洚悩?gòu)酶,該酶由兩個A亞基和兩個B亞基聚合而成。A、B亞基分別有各自的功能區(qū),共同決定該酶的生物學(xué)功能。它能夠利用ATP的能量將共價閉合環(huán)狀DNA(cccDNA)轉(zhuǎn)變?yōu)樨?fù)超螺旋DNA,從而維持細(xì)菌體內(nèi)正常的超螺旋水平。篩選結(jié)核桿菌回旋酶抑制劑有可能獲得新型抗結(jié)核藥物。 本課題組應(yīng)用細(xì)胞水平的以DNA回旋酶B亞基為靶點(diǎn)的抗結(jié)核藥物篩選模型,篩選得到了25個陽性菌株,本研究對這些菌株進(jìn)行了再篩選,對活性穩(wěn)定的陽性菌株I03A-09005和I03A-00463進(jìn)行深入研究。菌株I03A-09005的發(fā)酵液經(jīng)大孔樹脂柱層析,硅膠柱,HPLC分離得到了單一組分的活性化合物9005B,該化合物對H37Rv的MIC為64～128 ug/ml,并經(jīng)過質(zhì)譜、碳譜、氫譜等進(jìn)行結(jié)構(gòu)確證研究,鑒定9005B為放線菌素X2。菌株I03A-00463的發(fā)酵液經(jīng)大孔樹脂柱層析,ODS柱層析,得到純度約為28.15%的陽性化合物03-0463。同時,采用分子生物學(xué)方法構(gòu)建了含有結(jié)核桿菌H37Rv gyrB基因的表達(dá)質(zhì)粒pET-19b/gyrB,轉(zhuǎn)化至BL21(λDE3)pLysS中,利用原核表達(dá)系統(tǒng)成功克隆表達(dá)了結(jié)核桿菌H37Rv的DNA回旋酶B亞基,為建立分子水平得以DNA回旋酶B亞基為靶點(diǎn)的抗結(jié)核藥物篩選模型奠定了基礎(chǔ)。
[Abstract]:DNA gyrase is a topoisomerase specific bacteria, the enzyme is composed of two A subunits and two B subunit polymerization of.A and B subunits respectively have their respective functional areas, jointly determine the biological function of the enzyme. It can use the energy of ATP will be covalently closed circular DNA (cccDNA) change negative supercoiled DNA, so as to maintain the normal level of supercoiling in bacteria. Screening Mycobacterium tuberculosis gyrase inhibitors may obtain new anti tuberculosis drugs.
The level of the research group using cell with DNA gyrase B subunit as a screening model for drug screening, we obtained 25 positive strains, this study conducted a re screening of these strains, in-depth study of the active and stable positive strains I03A-09005 and I03A-00463. The fermentation broth of strain I03A-09005 by macroporous resin column chromatography, silica gel column, HPLC isolated from the single component of the active compound 9005B, the compound of H37Rv MIC was 64~128 ug/ml, and after the mass spectrum of carbon, hydrogen spectrum of structure identification, identification of 9005B fermentation liquid of actinomycin X2. strain I03A-00463 by macroporous resin column chromatography, ODS column chromatography, the purity of about 28.15% positive compounds 03-0463. and plasmid pET-19b/gyrB containing H37Rv of Mycobacterium tuberculosis gyrB gene using molecular biology methods, conversion to BL21 (2 DE3) pLysS in use The prokaryotic expression system successfully cloned and expressed the DNA cyclogyrase B subunit of Mycobacterium tuberculosis H37Rv, which laid the foundation for establishing the screening model of anti tuberculosis drugs targeting at the molecular level and the DNA cyclogyrase B subunit.

【學(xué)位授予單位】：中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2008
【分類號】：R378

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：1588739