本文選題：骨髓間充質(zhì)干細胞　切入點：原代　出處：《南京醫(yī)科大學(xué)》2009年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：目的:為了建立一種骨髓間充質(zhì)干細胞(BM-MSCs)移植促進損傷心肌組織修復(fù)的更為有效的療法,我們比較了小鼠原代BM-MSCs和第5代BM-MSCs移植在小鼠急性心肌梗死(MI)模型中的治療作用。通過體外比較小鼠原代BM-MSCs和第5代BM-MSCs的生物學(xué)特征,研究了與反復(fù)傳代相關(guān)的潛在作用機制。同時,我們通過尋找一種大量擴增原代BM-MSCs的行之有效的方法,克服通過反復(fù)傳代來擴增BM-MSCs的局限性。 方法:通過絲線永久結(jié)扎C57BL/6J雄性小鼠左冠狀動脈前降支,獲得左室前壁透壁性急性心肌梗死模型。從β半乳糖苷酶(β-gal~+)轉(zhuǎn)基因小鼠分離骨髓細胞,經(jīng)“骨髓細胞反復(fù)轉(zhuǎn)移(Pour-off)”的方法培養(yǎng)原代β-gal~+ BM-MSCs,再經(jīng)反復(fù)傳代培養(yǎng)獲取第5代β-gal~+ BM-MSCs,通過心肌內(nèi)注射移植給小鼠急性心肌梗死模型。移植6周后,對原代BM-MSCs移植組(MI+1st BM-MSCs),第5代BM-MSCs移植組(MI+5th BM-MSCs),造模組(MI)和假手術(shù)組(Sham)動物或心肌組織進行超聲心動圖,組織病理學(xué)或免疫印跡分析。同時,從β半乳糖苷酶(β-gal~+)轉(zhuǎn)基因小鼠分離骨髓細胞,經(jīng)“骨髓細胞反復(fù)轉(zhuǎn)移(Pour-off)”的方法培養(yǎng)原代β-gal~+ BM-MSCs,再經(jīng)反復(fù)傳代培養(yǎng)獲取第5代β-gal~+ BM-MSCs。在體外向心肌和血管內(nèi)皮細胞進行誘導(dǎo)分化,并通過Real-time RT-PCR檢測心肌細胞、血管內(nèi)皮細胞標記分子的基因表達水平。經(jīng)PI染色,流式細胞儀檢測原代和第5代BM-MSCs的增殖和凋亡情況。同時,通過Real-time RT-PCR檢測原代和第5代BM-MSCs的亞全能干細胞標記分子、心肌和組織定向性干細胞的標記分子和基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP3、MMP9、MT1-MMP)的基因表達水平。另外,通過二維電泳(2-D)檢測原代和第5代BM-MSCs蛋白譜的差異,并對差異蛋白進行質(zhì)譜(MS)分析。 結(jié)果:移植6周后,與第5代BM-MSCs相比,原代BM-MSCs在小鼠急性心肌梗死模型有更好的修復(fù)作用:能迅速地移入梗死心肌及其邊緣帶,逐漸在原位進行增殖,形成成熟血管和心肌細胞,促進血管形成,增加梗死區(qū)室壁厚度,改善心功能。而且,Akt,磷酸化Akt(phospho-Akt),磷酸化STAT5(phospho-STAT5)在原代BM-MSCs移植組左室前壁梗死心肌表達高于第5代BM-MSCs移植組�？侰aspase3(Pro-Caspase3)和激活型Caspase3(Activate-Caspase3)在原代BM-MSCs移植組左室前壁梗死心肌表達低于第5代BM-MSCs移植組。原代BM-MSCs在體外經(jīng)誘導(dǎo)后,成熟心肌細胞和血管內(nèi)皮細胞的標記分子表達更高,說明其具有更強的分化潛能。與第5代BM-MSCs相比,原代BM-MSCs具有較強的增殖潛能,不易發(fā)生凋亡。而且,亞全能干細胞標記分子、心肌和組織定向性干細胞的標記分子和基質(zhì)金屬蛋白酶的基因表達水平在原代BM-MSCs的表達也明顯高于第5代BM-MSCs。有趣的是,由二維電泳(2-DE)膠及雙向電泳白金版圖像分析軟件6.0分析發(fā)現(xiàn):與第5代BM-MSCs蛋白表達譜相比,原代BM-MSCs存在5倍以上差異蛋白點27個。其中,第5代BM-MSCs有24個蛋白下調(diào),3個蛋白上調(diào)。通過生物信息學(xué)分析及文獻查閱發(fā)現(xiàn):原代BM-MSCs與第5代BM-MSCs的差異蛋白主要與加強干細胞粘附、歸巢、遷移、增殖、分化能力,促血管發(fā)生,抗凋亡,御防氧化應(yīng)激,或調(diào)節(jié)炎癥和免疫反應(yīng)有關(guān),而原代BM-MSCs在以上功能方面可能明顯優(yōu)于第5代BM-MSCs。 結(jié)論:與第5代BM-MSCs相比,原代BM-MSCs具有更好的干細胞特性。對于小鼠急性心肌梗死模型而言,原代BM-MSCs移植在急性心肌梗死治療中的作用優(yōu)于第5代BM-MSCs移植。經(jīng)“骨髓細胞反復(fù)轉(zhuǎn)移”的方法培養(yǎng)的原代BM-MSCs的移植,可以作為一種新的治療策略用于急性心肌梗死后的心肌組織再生。
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【學(xué)位授予單位】：南京醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2009
【分類號】：R329

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 ;Induction of collateral artery growth and improvement of post-infarct heart function by hepatocyte growth factor gene transfer[J];Acta Pharmacologica Sinica;2006年05期

2 葛均波,張少衡;干細胞能再生梗死心肌嗎?[J];中華醫(yī)學(xué)雜志;2005年36期

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本文編號：1588095