大豆主要過敏原Gly m Bd 28K基因的克隆表達、純化及多抗血清的制備
本文選題:大豆 切入點:過敏原 出處:《河南工業(yè)大學學報(自然科學版)》2015年04期 論文類型:期刊論文
【摘要】:RT-PCR克隆大豆主要過敏原Gly m Bd 28K基因,根據(jù)序列設(shè)計引物,擴增目的基因的開放閱讀框,與MBP載體連接,測序鑒定,轉(zhuǎn)化至大腸桿菌BL21(DE3)中,并用IPTG誘導表達.親和層析法純化重組蛋白,SDS-PAGE驗證蛋白的純度,免疫新西蘭大白兔,收集多抗血清,用ELISA法測效價.擴增出含Gly m Bd 28K目的基因片段,誘導并獲得高濃度和預期相符的表達產(chǎn)物,經(jīng)層析純化出Gly m Bd 28K蛋白,免疫新西蘭大白兔,獲得效價為1∶1.6×106多抗血清.
[Abstract]:RT-PCR cloned the main allergen Gly mBd28K gene, designed primers according to the sequence, amplified the open reading frame of the target gene, ligated with MBP vector, sequenced, and transformed into E. coli BL21DDE3. The recombinant protein was purified by affinity chromatography. The recombinant protein was purified by SDS-PAGE. The rabbit was immunized with polyantiserum and the titer was detected by ELISA method. The target gene fragment containing Gly mBd28K was amplified. The Gly mBd28K protein was purified by chromatography and immunized New Zealand white rabbits with the titer of 1: 1.6 脳 10 ~ 6 polyantiserum.
【作者單位】: 河南工業(yè)大學糧油食品學院;
【基金】:國家自然科學基金(31301409)
【分類號】:R392;Q943.2
【參考文獻】
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,本文編號:1587317
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