本文選題：磷脂　切入點(diǎn)：白血病　出處：《蘇州大學(xué)》2013年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：第一章iNKT細(xì)胞新配體過氧化物衍生磷脂的表達(dá)研究 目的：研究iNKT細(xì)胞新配體過氧化物衍生磷脂（PDLs）在哺乳動(dòng)物胸腺、脾臟、肝臟中的表達(dá)情況；探討它在人骨髓樣本中的表達(dá)與疾病的關(guān)系；比較急性髓細(xì)胞白血病患者骨髓樣本和急性淋巴瘤白血病與正常對(duì)照骨髓樣本中PDLs表達(dá)水平的差異，進(jìn)而研究其PDL與NKT功能相關(guān)的生物學(xué)功能及。 方法：(1)采用Folch法提取豬、小鼠、以及人的胸腺中的磷脂，提取小鼠肝臟和脾臟中的磷脂，以及提取正常人骨髓樣本、急性髓系白血病和急性淋巴細(xì)胞白血病病人骨髓的磷脂；(2)將提取得到的總磷脂進(jìn)行質(zhì)譜分析；(3)對(duì)所得總磷脂進(jìn)行質(zhì)譜定性分析，確定磷脂的的種類及相應(yīng)子類的結(jié)構(gòu)；(4)對(duì)胸腺、肝臟、脾臟、以及骨髓樣本中不同種類的磷脂進(jìn)行相對(duì)定量分析：把某種磷脂的相對(duì)質(zhì)譜峰度之和作為分子，把總磷脂的相對(duì)質(zhì)譜峰度之和作為分母，兩者的比值即使該種磷脂的相對(duì)表達(dá)量。(5)對(duì)上述相對(duì)定量的方法進(jìn)行方法學(xué)驗(yàn)證。 結(jié)果：(1)通過多級(jí)質(zhì)譜檢測(cè)技術(shù)對(duì)各種樣本中不同組分的磷脂進(jìn)行定性分析，發(fā)現(xiàn)在哺乳動(dòng)物的胸腺、肝臟、脾臟以及骨髓樣本中，都主要含有12種磷脂，不同種類的磷脂又根據(jù)脂肪酸鏈的長(zhǎng)度不同而又分為很多子類(2)我們發(fā)現(xiàn)iNKT的新配體PDLs在哺乳動(dòng)物的胸腺、肝臟、脾臟中都有表達(dá)(3)方法學(xué)驗(yàn)證試驗(yàn)證明我們所采用的相對(duì)定量的方法是可行的(4)我們發(fā)現(xiàn)在急性髓系白血病和急性淋巴細(xì)胞白血病中，其iNKT新配體PDLs的表達(dá)水平均高于正常人。 結(jié)論：我們采用高精度質(zhì)譜不僅可以實(shí)現(xiàn)不同磷脂的定性分析，而且還可以實(shí)現(xiàn)不同磷脂的相對(duì)表達(dá)量定量分析，通過方法學(xué)的驗(yàn)證也能夠證明我們這一方法的可行性。不僅如此，我們的實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，在與免疫系統(tǒng)密切相關(guān)的免疫組織胸腺、肝臟、脾臟中都有PDLs的表達(dá)，而且在白血病中，PDLs的表達(dá)水平均高于正常對(duì)照，這一結(jié)果為進(jìn)一步的研究iNKT在免疫系統(tǒng)中的功能作了鋪墊。 第二章類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎血清抗體糖基化的研究 目的：研究血清中抗體的糖基化與類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎（RA）發(fā)病之間的密切關(guān)系，并從酶學(xué)的角度探討造成這種變化的分子機(jī)制，進(jìn)一步用動(dòng)物實(shí)驗(yàn)來研究酶的變化對(duì)動(dòng)物生長(zhǎng)的影響，進(jìn)而用HPLC來驗(yàn)證我們的假說——RA血清中可能存在識(shí)別N-糖變化的免疫球蛋白。 方法：(1)對(duì)30個(gè)正常人和32個(gè)病人血清中的總免疫球蛋白進(jìn)行分離純化，并進(jìn)一步用protein G純化得到IgG；(2)用PNGase F酶處理免疫球蛋白，，并純化得到N糖鏈；(3)用質(zhì)譜對(duì)N糖鏈進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定，并運(yùn)用統(tǒng)計(jì)學(xué)的方法來檢測(cè)與正常人相比RA病人抗體的糖基化的異常；(4)用ELISA試劑盒檢測(cè)血清中半乳糖苷酶的變化；(5)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證半乳糖苷酶對(duì)小鼠生長(zhǎng)的影響；(6)用HPLC檢測(cè)RA總免疫球蛋白是否存在抗半乳糖缺失的N糖鏈的抗體。 結(jié)果：(1)我們對(duì)32個(gè)RA病人和30個(gè)正常人的抗體N糖鏈進(jìn)行了質(zhì)譜分析，并鑒定了超過50個(gè)N糖鏈；(2)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析發(fā)現(xiàn)，在RA病人的抗體N糖鏈中確實(shí)存在半乳糖（Gal）缺失的情況；(3)用ELISA試劑盒檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，RA血清中半乳糖苷酶的表達(dá)量明顯高于正常人；(4)用商品化的半乳糖苷酶腹腔注射到小鼠體內(nèi)，我們發(fā)現(xiàn)半乳糖苷酶的注射能夠明顯降解N-糖鏈末端的Gal，并且能夠讓血清中的類風(fēng)濕性因子（RF）上升；(5)用HPLC檢測(cè)發(fā)現(xiàn)RA總免疫球蛋白與末端缺失Gal的N糖標(biāo)準(zhǔn)品共培養(yǎng)物，我們發(fā)現(xiàn)RA血清中存在專一性識(shí)別末端缺失Gal的N糖的免疫球蛋白。 結(jié)論：本課題基于質(zhì)譜對(duì)N糖鏈的結(jié)構(gòu)鑒定進(jìn)一步證實(shí)RA抗體的N糖鏈確實(shí)存在半乳糖缺失的現(xiàn)象，而造成這種缺失可能是因?yàn)橛捎诎肴樘擒彰傅谋磉_(dá)量上升。進(jìn)一步的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明，在動(dòng)物體內(nèi)，半乳糖苷酶降解掉N糖末端的Gal以后，能夠有效的促進(jìn)RF因子含量的上升；不僅如此，我們用HPLC還發(fā)現(xiàn)在RA中存在識(shí)別末端缺失Gal的N糖鏈的免疫球蛋白。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R3411

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1584019