本文選題：磷脂　切入點：白血病　出處：《蘇州大學》2013年碩士論文　論文類型：學位論文

【摘要】：第一章iNKT細胞新配體過氧化物衍生磷脂的表達研究 目的：研究iNKT細胞新配體過氧化物衍生磷脂（PDLs）在哺乳動物胸腺、脾臟、肝臟中的表達情況；探討它在人骨髓樣本中的表達與疾病的關系；比較急性髓細胞白血病患者骨髓樣本和急性淋巴瘤白血病與正常對照骨髓樣本中PDLs表達水平的差異，進而研究其PDL與NKT功能相關的生物學功能及。 方法：(1)采用Folch法提取豬、小鼠、以及人的胸腺中的磷脂，提取小鼠肝臟和脾臟中的磷脂，以及提取正常人骨髓樣本、急性髓系白血病和急性淋巴細胞白血病病人骨髓的磷脂；(2)將提取得到的總磷脂進行質譜分析；(3)對所得總磷脂進行質譜定性分析，確定磷脂的的種類及相應子類的結構；(4)對胸腺、肝臟、脾臟、以及骨髓樣本中不同種類的磷脂進行相對定量分析：把某種磷脂的相對質譜峰度之和作為分子，把總磷脂的相對質譜峰度之和作為分母，兩者的比值即使該種磷脂的相對表達量。(5)對上述相對定量的方法進行方法學驗證。 結果：(1)通過多級質譜檢測技術對各種樣本中不同組分的磷脂進行定性分析，發(fā)現(xiàn)在哺乳動物的胸腺、肝臟、脾臟以及骨髓樣本中，都主要含有12種磷脂，不同種類的磷脂又根據(jù)脂肪酸鏈的長度不同而又分為很多子類(2)我們發(fā)現(xiàn)iNKT的新配體PDLs在哺乳動物的胸腺、肝臟、脾臟中都有表達(3)方法學驗證試驗證明我們所采用的相對定量的方法是可行的(4)我們發(fā)現(xiàn)在急性髓系白血病和急性淋巴細胞白血病中，其iNKT新配體PDLs的表達水平均高于正常人。 結論：我們采用高精度質譜不僅可以實現(xiàn)不同磷脂的定性分析，而且還可以實現(xiàn)不同磷脂的相對表達量定量分析，通過方法學的驗證也能夠證明我們這一方法的可行性。不僅如此，我們的實驗結果表明，在與免疫系統(tǒng)密切相關的免疫組織胸腺、肝臟、脾臟中都有PDLs的表達，而且在白血病中，PDLs的表達水平均高于正常對照，這一結果為進一步的研究iNKT在免疫系統(tǒng)中的功能作了鋪墊。 第二章類風濕性關節(jié)炎血清抗體糖基化的研究 目的：研究血清中抗體的糖基化與類風濕性關節(jié)炎（RA）發(fā)病之間的密切關系，并從酶學的角度探討造成這種變化的分子機制，進一步用動物實驗來研究酶的變化對動物生長的影響，進而用HPLC來驗證我們的假說——RA血清中可能存在識別N-糖變化的免疫球蛋白。 方法：(1)對30個正常人和32個病人血清中的總免疫球蛋白進行分離純化，并進一步用protein G純化得到IgG；(2)用PNGase F酶處理免疫球蛋白，，并純化得到N糖鏈；(3)用質譜對N糖鏈進行結構鑒定，并運用統(tǒng)計學的方法來檢測與正常人相比RA病人抗體的糖基化的異常；(4)用ELISA試劑盒檢測血清中半乳糖苷酶的變化；(5)動物實驗驗證半乳糖苷酶對小鼠生長的影響；(6)用HPLC檢測RA總免疫球蛋白是否存在抗半乳糖缺失的N糖鏈的抗體。 結果：(1)我們對32個RA病人和30個正常人的抗體N糖鏈進行了質譜分析，并鑒定了超過50個N糖鏈；(2)統(tǒng)計學分析發(fā)現(xiàn)，在RA病人的抗體N糖鏈中確實存在半乳糖（Gal）缺失的情況；(3)用ELISA試劑盒檢測發(fā)現(xiàn)，RA血清中半乳糖苷酶的表達量明顯高于正常人；(4)用商品化的半乳糖苷酶腹腔注射到小鼠體內，我們發(fā)現(xiàn)半乳糖苷酶的注射能夠明顯降解N-糖鏈末端的Gal，并且能夠讓血清中的類風濕性因子（RF）上升；(5)用HPLC檢測發(fā)現(xiàn)RA總免疫球蛋白與末端缺失Gal的N糖標準品共培養(yǎng)物，我們發(fā)現(xiàn)RA血清中存在專一性識別末端缺失Gal的N糖的免疫球蛋白。 結論：本課題基于質譜對N糖鏈的結構鑒定進一步證實RA抗體的N糖鏈確實存在半乳糖缺失的現(xiàn)象，而造成這種缺失可能是因為由于半乳糖苷酶的表達量上升。進一步的動物實驗表明，在動物體內，半乳糖苷酶降解掉N糖末端的Gal以后，能夠有效的促進RF因子含量的上升；不僅如此，我們用HPLC還發(fā)現(xiàn)在RA中存在識別末端缺失Gal的N糖鏈的免疫球蛋白。
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【學位授予單位】：蘇州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2013
【分類號】：R3411

【共引文獻】

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本文編號：1584019