本文選題：THAP11　切入點：轉錄　出處：《安徽醫(yī)科大學》2010年碩士論文　論文類型：學位論文

【摘要】： THAP11屬于新發(fā)現(xiàn)的THAP蛋白質家族成員。該蛋白家族是一類鋅離子依賴的DNA結合蛋白質,廣泛參與細胞增殖、凋亡調控,并可能與染色體修飾與重構相關。前期研究表明THAP11可通過直接結合c-Myc啟動子區(qū)抑制c-Myc表達,進而抑制細胞增殖。此外,THAP11還可調控胚胎干細胞(ES)的自我更新和增殖。但目前對其作用機制尚無深入研究。本研究利用哺乳動物雙雜交系統(tǒng),發(fā)現(xiàn)THAP11同時具有轉錄激活和轉錄抑制活性,并通過系列缺失,確定了其功能結構域, N端82個氨基酸區(qū)具有轉錄抑制活性,C端185個氨基酸區(qū)具有轉錄激活活性。THAP11發(fā)揮轉錄抑制活性與染色體修飾相關因子關系。進一步利用酵母雙雜交技術,從成人肝臟cDNA文庫中篩選到CtBP1可與THAP11發(fā)生相互作用。利用免疫共沉淀技術,我們證實了THAP11與CtBP1存在相互作用,并確定了兩種相互作用結構域。鑒于該蛋白可通過直接的蛋白質相互作用參與轉錄因子發(fā)揮轉錄抑制的過程,THAP11與CtBP1相互作用可能是THAP11發(fā)揮轉錄抑制活性的方式。為進一步探討THAP11調控基因表達的分子機制,對全基因組進行THAP11潛在結合位點的檢索,發(fā)現(xiàn)Oct4啟動子含有THAP11潛在的結合位點。分離人Oct4啟動子區(qū),構建報告基因載體,發(fā)現(xiàn)THAP11可激活Oct4啟動子轉錄,這種激活活性依賴于其C端轉錄激活區(qū),而與其DNA結合能力無關。EMSA實驗證實THAP11能夠結合預測的結合位點結合,但系列缺失突變實驗證實THAP11對Oct4啟動子的激活并不依賴該結合位點,表明THAP11可能通過其它機制調控Oct4的表達。利用Real-time PCR實驗表明,在PA-1細胞中過表達THAP11可明顯上調內源Oct4的表達,表明Oct4是THAP11調控的靶基因。為進一步在ES細胞中檢測THAP11功能及作用機制,構建了人THAP11的慢病毒表達載體,并對慢病毒進行了包裝,獲得了THAP11慢病毒顆粒,為后續(xù)的研究提供了有力的工具。
[Abstract]:THAP11 is a newly discovered member of THAP protein family, which is a zinc ion-dependent DNA binding protein, which is widely involved in cell proliferation and apoptosis regulation. Previous studies have shown that THAP11 can inhibit c-Myc expression by direct binding to c-Myc promoter region. In addition, THAP11 can also regulate the self-renewal and proliferation of embryonic stem cell (es). However, there is no in-depth study on the mechanism of its action. In this study, the mammalian two-hybrid system was used. We found that THAP11 has both transcriptional activation and transcriptional inhibitory activity, and through a series of deletions, Its functional domain was determined. The N-terminal 82 amino acid regions had transcriptional inhibitory activity and C-terminal 185 amino acid regions had transcriptional activation activity. THAP11 played a role in the relationship between transcription inhibitory activity and chromosome modification. Further more, yeast two-hybrid technique was used. CtBP1 could interact with THAP11 from adult liver cDNA library. We confirmed that there was interaction between THAP11 and CtBP1 by immunoprecipitation. Two kinds of interaction domains were identified. In view of the direct protein interaction this protein can participate in the process of transcription inhibition by transcription factors. The interaction between THAP11 and CtBP1 may be the way in which THAP11 exerts its transcription inhibitory activity. In order to further explore the molecular mechanism of gene expression regulated by THAP11, By searching the whole genome for the potential binding sites of THAP11, we found that the Oct4 promoter contains the potential binding site of THAP11. The reporter gene vector was constructed by isolating the promoter region of human Oct4. It was found that THAP11 could activate the transcription of Oct4 promoter. This activation activity is dependent on its C-terminal transcriptional activation region, but independent of its DNA binding ability. EMSA experiments confirm that THAP11 can bind to predicted binding sites. However, a series of deletion mutation experiments confirmed that the activation of Oct4 promoter by THAP11 does not depend on the binding site, suggesting that THAP11 may regulate the expression of Oct4 through other mechanisms. Overexpression of THAP11 in PA-1 cells significantly upregulated the expression of endogenous Oct4, suggesting that Oct4 was a target gene regulated by THAP11. In order to further detect the function and mechanism of THAP11 in es cells, the lentivirus expression vector of human THAP11 was constructed. The lentivirus was packaged and THAP11 lentivirus particles were obtained, which provided a powerful tool for further research.
【學位授予單位】：安徽醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2010
【分類號】：R346

【相似文獻】

相關期刊論文 前10條

1 宮玉波;黃一飛;黎燕;韓根成;劉勇;王大江;杜改萍;余繼鋒;;小鼠Foxp3基因慢病毒載體構建及其在DC2.4細胞的表達[J];細胞與分子免疫學雜志;2011年07期

2 毛竹君;魏品康;武峰;張慈安;孟先澤;趙婧;趙圣佳;張璇;陸燁;;BGC-823細胞中慢病毒途徑針對HIF-1α基因的RNAi實驗[J];江西科學;2011年03期

3 阮靜;王旭;李煜生;劉愛華;姜勇;;沉默Toll樣受體4基因表達的RNAi慢病毒載體的構建[J];中國組織工程研究與臨床康復;2011年20期

4 陳豪;李丹;林納;黃月紅;陳志新;王小眾;;乙肝病毒X基因慢病毒載體的構建和鑒定[J];福建醫(yī)科大學學報;2011年03期

5 陳亮;許飛;溫桂蘭;;慢病毒載體介導的TGF-β1基因修飾小鼠未成熟樹突狀細胞的實驗研究[J];重慶醫(yī)學;2011年17期

6 肖義濤;羅來敏;張睿;;慢病毒介導COX-2基因的shRNA對子宮內膜癌侵襲力的影響[J];現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學;2011年07期

7 周峰;王杰;張海清;史震;裴冬生;鄭駿年;;β-catenin在IL-24抑制肝癌細胞的血管生成和腫瘤生長中的作用[J];免疫學雜志;2011年08期

8 覃志偉;王宗華;鄒利全;劉志鵬;熊曉峰;李學成;陳陵;;負載人miR-29慢病毒的包裝鑒定及對人胃癌細胞株增殖的影響[J];中國腫瘤;2011年06期

9 李衛(wèi)星;杜軍;胡圳圳;田寅輝;劉皎婧;朱一超;;穩(wěn)定表達GFP-C-Daam1的MDA-MB-231人乳腺癌細胞系的建立[J];南京醫(yī)科大學學報(自然科學版);2011年07期

10 郭偉;李文媛;;慢病毒載體介導hTERT對肝細胞生物學特性的影響[J];長治醫(yī)學院學報;2011年04期

相關會議論文 前10條

1 苗凱;郭敏;安磊;許曉玲;武韓;王棟;吳中紅;田見暉;;低滴度慢病毒生產(chǎn)轉基因胚胎和小鼠的新方法[A];中國畜牧獸醫(yī)學會動物繁殖學分會第十五屆學術研討會論文集（上冊）[C];2010年

2 宋玉文;韓文霞;高聆;于春曉;;慢病毒介導綠色熒光蛋白感染大鼠腎小球系膜細胞實驗研究[A];中華醫(yī)學會第十次全國內分泌學學術會議論文匯編[C];2011年

3 王旭東;仲人前;;慢病毒載體介導microRNA-21抑制體的構建與轉染[A];2010’全國腫瘤分子標志及應用學術研討會暨第五屆中國中青年腫瘤專家論壇論文匯編[C];2010年

4 尹雪瑤;鄭芬萍;吳芳;李霖;李紅;;LXRs激動對PPARγ轉錄抑制脂肪炎癥因子表達的作用及機制研究[A];中華醫(yī)學會第十次全國內分泌學學術會議論文匯編[C];2011年

5 魏夢綺;;TFR和VEGF基因雙順反動子慢病毒感染骨髓基質細胞的研究[A];中華醫(yī)學會第十八次全國放射學學術會議論文匯編[C];2011年

6 孫箴;劉偉;盧大儒;;鎖核酸(LNA)介導細胞核內乙型肝炎病毒(HBV)轉錄抑制研究[A];2012年中國青年遺傳學家論壇會議文集[C];2012年

7 祝高春;彭挺;楊世明;李和;;突變亨廷頓蛋白通過促進突觸小泡蛋白2C轉錄抑制因子REST的核轉位下調SV2C的表達[A];中國解剖學會2011年年會論文文摘匯編[C];2011年

8 懷磊;王翠翠;張翠萍;李其輝;唐克晶;邢海燕;饒青;王敏;王建祥;;慢病毒介導的RNA干擾抑制MEIS1的表達對NB4細胞增殖、凋亡、分化影響的研究[A];第13屆全國實驗血液學會議論文摘要[C];2011年

9 陳帥;李浩博;李牧;李雙;趙培林;;基于樹突狀細胞的腫瘤疫苗構建及其抗腫瘤效應研究[A];中國解剖學會2011年年會論文文摘匯編[C];2011年

10 王躍群;吳秀山;李永青;袁婺洲;朱傳炳;劉明耀;;人類鋅指蛋自家族新基因ZNF307的克隆、表達和功能研究[A];湖南省生理科學學會2004年度學術年會論文摘要匯編[C];2004年

相關重要報紙文章 前4條

1 香港麥迪信醫(yī)學出版有限公司 供稿;凋亡與腫瘤：一對矛盾的連體嬰[N];醫(yī)藥經(jīng)濟報;2002年

2 廣知;多種因素易致“癡”[N];醫(yī)藥經(jīng)濟報;2004年

3 余海若;諾貝爾獎為何13次關注傳染病[N];大眾科技報;2004年

4 李潔尉;華南植物園吳克強博士入選中科院“百人計劃”[N];廣東科技報;2009年

相關博士學位論文 前10條

1 陳春經(jīng);慢病毒載體介導胰島素樣生長因子-1基因修飾肌源性干細胞移植治療雌性壓力性尿失禁大鼠的實驗研究[D];福建醫(yī)科大學;2012年

2 胡曉;雌激素受體α對小鼠實驗性自身免疫性腦脊髓炎的抑制作用[D];重慶醫(yī)科大學;2011年

3 周建松;HPV16E6/E7共同啟動子shRNA慢病毒的構建及其對宮頸癌細胞株抑制作用的體內外研究[D];浙江大學;2012年

4 董春娟;植物中2個DREB類轉錄抑制子的功能研究[D];清華大學;2010年

5 朱煊;重組慢病毒CXCR7-shRNA對人膀胱癌細胞生物學行為影響的研究[D];中南大學;2012年

6 賴穎暉;慢病毒介導α-反義寡核苷酸對β-地中海貧血小鼠的作用[D];廣西醫(yī)科大學;2010年

7 周海濤;慢病毒介導的Nanog基因對周圍神經(jīng)損傷性神經(jīng)病理性疼痛模型脊髓突觸重塑的影響[D];福建醫(yī)科大學;2012年

8 劉濤;慢病毒介導的Foxa2和Hnf4a組成性表達對胚胎干細胞向肝細胞分化的影響[D];第三軍醫(yī)大學;2009年

9 張旭東;慢病毒介導的Bcl-2基因RNAi聯(lián)合TRAIL基因共表達對淋巴瘤細胞生長作用研究[D];鄭州大學;2012年

10 蔣道軍;人肝臟特異表達基因TCP10L的克隆和功能研究[D];復旦大學;2004年

相關碩士學位論文 前10條

1 黃先紅;THAP11調控基因轉錄的分子機制研究[D];安徽醫(yī)科大學;2010年

2 陳維;慢病毒介導轉基因小鼠胚胎的初步研究[D];華中農業(yè)大學;2011年

3 張旭;miR-122對HBV感染的肝癌細胞增殖和凋亡的影響及其機制研究[D];第四軍醫(yī)大學;2012年

4 毛亞江;腫瘤轉移抑制蛋白Mtss1慢病毒干擾載體的構建和鑒定[D];湖南師范大學;2010年

5 黃敏;重組慢病毒載體介導艾滋病毒Rev蛋白調控卡波濟肉瘤相關皰疹病毒裂解性周期復制的研究[D];南京醫(yī)科大學;2010年

6 陳麗妹;Grb2抑制對腸癌細胞HT29腫瘤相關信號轉導的影響[D];福建醫(yī)科大學;2012年

7 韓騰龍;用慢病毒載體介導癌基因建立細胞衰老的模型[D];第四軍醫(yī)大學;2010年

8 劉漢屈;Hyper-IL-6重組慢病毒促肝細胞增殖及對大鼠急性肝衰竭保護作用的實驗研究[D];重慶醫(yī)科大學;2010年

9 王朝莉;HBVprec/c shRNA慢病毒真核表達載體的構建及其對HBV增值的影響[D];重慶醫(yī)科大學;2010年

10 李傳智;慢病毒載體介導人TNF-β基因對結直腸癌細胞的作用[D];青島大學;2010年

，

本文編號：1573218