本文選題：慢病毒載體　切入點(diǎn)：轉(zhuǎn)錄通讀　出處：《中國生物工程雜志》2015年05期 　論文類型：期刊論文

【摘要】：慢病毒載體作為基因?qū)胂到y(tǒng)已被多次應(yīng)用于基因治療試驗(yàn)當(dāng)中,近年來受到了廣泛關(guān)注。轉(zhuǎn)錄通讀是慢病毒載體應(yīng)用過程中存在的潛在不安全因素之一。為了進(jìn)一步完善慢病毒載體轉(zhuǎn)錄通讀的檢測方法,使檢測結(jié)果更加直觀準(zhǔn)確,在已建立的在轉(zhuǎn)錄水平檢測其轉(zhuǎn)錄通讀的基礎(chǔ)上,進(jìn)一步模擬病毒載體整合入基因組的狀態(tài),于原病毒載體3'-LTR后插入經(jīng)密碼子優(yōu)化的Lac Z報(bào)告基因。經(jīng)轉(zhuǎn)染細(xì)胞后進(jìn)行原位染色,發(fā)生通讀現(xiàn)象的細(xì)胞會被染成藍(lán)色,從而在蛋白質(zhì)水平直觀地體現(xiàn)慢病毒載體的通讀情況,說明所建立的方法是準(zhǔn)確可行的。所得結(jié)論與q RTPCR方法在轉(zhuǎn)錄水平檢測的結(jié)果是平行相一致。原位染色檢測法的建立為慢病毒載體轉(zhuǎn)錄通讀的檢測、提高慢病毒載體生物安全性的研究提供了技術(shù)支持。
[Abstract]:Lentiviral vectors as gene delivery system has been applied in gene therapy trials, in recent years has been widely concerned. Transcription readthrough is one of the potential risk factors of lentiviral vectors in the application process. In order to further improve the lentiviral vector transcription readthrough detection method, which makes the results more intuitive and accurate, has been based on the detection of the transcriptional readthrough at the transcriptional level, further simulation of viral vectors integrated into the genome of the state, from the original virus vector 3'-LTR after insertion of the codon optimized Lac Z reporter gene. The transfected cells after in situ staining, the cells will be read through the phenomenon of occurrence of blue, read to reflect lentiviral vectors at the protein level, shows that the method is accurate and feasible. The results with the Q RTPCR method at the level of transcription was flat The establishment of in situ staining assay provides a technical support for the detection of lentiviral vectors' transcriptional reading and improving the biological safety of lentiviral vectors.

【作者單位】： 上海交通大學(xué)附屬兒童醫(yī)院;上海市兒童醫(yī)院;上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)遺傳研究所;衛(wèi)生部醫(yī)學(xué)胚胎分子生物學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室暨上海市胚胎與生殖工程重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;生物治療協(xié)同創(chuàng)新中心四川大學(xué)華西醫(yī)院;
【基金】：國家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(81271690)
【分類號】：R373;Q78

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 何佳平;方_g聃;張帆;孫鳳強(qiáng);王娟;張敬之;;慢病毒載體轉(zhuǎn)錄通讀率檢測方法的建立[J];生物工程學(xué)報(bào);2013年07期

【共引文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 孫勇;湯必奎;白荷露;朱乃碩;;慢病毒介導(dǎo)的HBV-X基因可調(diào)控表達(dá)小鼠模型的構(gòu)建[J];復(fù)旦學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);2013年04期

2 崔玉倩;趙涵;馬增香;趙世斗;徐海靜;王文婷;郭海鵬;陳子江;;小鼠Tox3基因重組慢病毒載體的構(gòu)建及其在卵巢顆粒細(xì)胞中的表達(dá)[J];國際生殖健康/計(jì)劃生育雜志;2014年02期

3 張嬋;董文斌;趙帥;李清平;康蘭;雷小平;郭琳;翟雪松;;慢病毒載體靶向介導(dǎo)p66shc基因沉默[J];重慶醫(yī)學(xué);2015年01期

4 劉錦愉;韓創(chuàng)業(yè);趙春節(jié);陳首;楊勁松;;慢病毒介導(dǎo)基因轉(zhuǎn)染人韌帶成纖維細(xì)胞表達(dá)的研究[J];廣西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2015年01期

5 王苑;張琦;張艷霞;張敬軍;夏榮;;SOCS1基因調(diào)控未成熟DC及其預(yù)防小鼠移植物抗宿主病的功能研究[J];中國輸血雜志;2015年05期

6 楊東昌;母小新;劉巧玉;鄧?yán)?陳云;孫倍成;;人膜連蛋白A2基因重組慢病毒載體的構(gòu)建及其在肝癌細(xì)胞株中的表達(dá)[J];南京醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);2011年02期

7 鄧海燕;曾俊義;魏云峰;;大鼠miR-1慢病毒表達(dá)載體的構(gòu)建與鑒定[J];檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床;2013年02期

8 陳志;何韶華;蔣帥;劉鵬;白月璐;馮振卿;朱進(jìn);陳仁杰;;EB病毒潛伏膜蛋白LMP2A對人鼻咽癌細(xì)胞增殖與遷移特性的影響[J];南京醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);2015年04期

9 蔣磊;林飛燕;王福樂;葉愛芳;吳建波;;慢病毒介導(dǎo)TIEG1基因乳腺癌靶向載體的構(gòu)建及活性測定[J];實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志;2011年11期

10 王繼東;羅爽;潘紅娟;姚珍薇;;慢病毒載體介導(dǎo)綠色熒光蛋白基因轉(zhuǎn)染大鼠卵巢的實(shí)驗(yàn)研究[J];生殖與避孕;2012年06期

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 陳美玲;Sonic hedgehog基因?qū)ΨN植體周圍骨缺損修復(fù)的影響[D];華中科技大學(xué);2011年

2 林文平;腦紅蛋白基因修飾的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞對兔脊髓損傷保護(hù)作用的實(shí)驗(yàn)研究[D];福建醫(yī)科大學(xué);2011年

3 許鵬;腦膠質(zhì)瘤中Notch信號通路異常的實(shí)驗(yàn)研究[D];天津醫(yī)科大學(xué);2011年

4 陳美玲;Sonic hedgehog基因?qū)χ搀w周圍骨缺損修復(fù)的影響[D];華中科技大學(xué);2011年

5 蘇冠華;肝細(xì)胞生長因子基因修飾的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植的促血管新生作用[D];華中科技大學(xué);2010年

6 余松濤;hTERT啟動子靶向性活體光學(xué)實(shí)時(shí)成像技術(shù)在腫瘤診斷及療效評估中作用的實(shí)驗(yàn)研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2010年

7 寧小暉;應(yīng)用經(jīng)皮心內(nèi)膜注射導(dǎo)管在體移植生物起搏器的實(shí)驗(yàn)研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2012年

8 陳偉;C-X-C型趨化因子受體4基因過表達(dá)的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞對小鼠GVHD防治作用[D];南京醫(yī)科大學(xué);2012年

9 顧斌;HHV-6與腦膠質(zhì)瘤的相關(guān)性及其U94/rep基因表達(dá)對U251細(xì)胞生物學(xué)性狀的影響[D];南京醫(yī)科大學(xué);2012年

10 崔雅寧;經(jīng)動脈灌注LV-mIL12轉(zhuǎn)染大鼠帶蒂SIEA皮瓣對在體乳腺癌SHZ-88細(xì)胞生長影響的研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2012年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 仲琳;超聲微泡介導(dǎo)人骨形成蛋白-2基因在人牙周膜成纖維細(xì)胞中的表達(dá)[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2010年

2 胡珍珍;慢病毒載體介導(dǎo)的ANNEXIN A10瘤內(nèi)注射對HepG2細(xì)胞皮下移植瘤抑制作用的研究[D];南昌大學(xué);2012年

3 陳潔;KGF基因修飾的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植治療內(nèi)毒素致小鼠急性肺損傷及相關(guān)機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究[D];中國人民解放軍軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院;2012年

4 鄧龍穎;大腸埃希菌胞嘧啶脫氨酶突變體治療結(jié)構(gòu)癌的實(shí)驗(yàn)研究[D];南京醫(yī)科大學(xué);2012年

5 王介忠;CD40siRNA慢病毒載體的構(gòu)建及其對EAM大鼠Treg細(xì)胞的影響[D];山東大學(xué);2013年

6 曲戈;IL-24基因修飾的間充質(zhì)干細(xì)胞向肺癌靶向遷移的體外研究[D];鄭州大學(xué);2013年

7 李見;慢病毒載體介導(dǎo)的IDO基因在人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞表達(dá)的實(shí)驗(yàn)研究[D];蚌埠醫(yī)學(xué)院;2013年

8 王佳林;抑癌基因DLC-1過表達(dá)對結(jié)直腸癌細(xì)胞生物學(xué)行為及Wnt信號通路影響的初步研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2013年

9 李彩娟;RNA干擾下調(diào)脛骨癌痛大鼠脊髓背角Protocadherin20表達(dá)及其鎮(zhèn)痛效應(yīng)研究[D];華中科技大學(xué);2013年

10 胡晨曦;應(yīng)用HSV-TK系統(tǒng)，研究ATRA和VSV-G對耐藥AML細(xì)胞的殺傷作用[D];蘇州大學(xué);2014年

【二級參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 馬海燕;方_g聃;張敬之;;應(yīng)用熒光實(shí)時(shí)定量PCR方法檢測重組慢病毒滴度及其感染效率[J];生命科學(xué)研究;2009年05期

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 傅鵬;原理;李金花;王春花;李林;原愛紅;馬駿;;小鼠動力蛋白激活蛋白1-shRNA慢病毒載體的構(gòu)建及在足細(xì)胞中的敲低效應(yīng)[J];第二軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);2012年10期

2 劉欣春;朱悅;;靶向大鼠Nogo受體基因的小發(fā)夾RNA慢病毒載體的構(gòu)建及病毒包裝[J];山西醫(yī)藥雜志;2012年11期

3 謝書陽,張敬之,任兆瑞;慢病毒載體與造血干細(xì)胞介導(dǎo)的基因治療[J];中國生物工程雜志;2004年10期

4 馬強(qiáng);李明;董文其;吳英松;;一種新型慢病毒載體制備體系的初步建立[J];生物化學(xué)與生物物理進(jìn)展;2007年08期

5 馬強(qiáng);李明;董文其;吳英松;;一種新型慢病毒載體制備方法的建立[J];生物工程學(xué)報(bào);2007年05期

6 李宏圖;劉曉玉;龐希寧;;神經(jīng)元抑制性沉默元件雙鏈RNA慢病毒載體的構(gòu)建與鑒定[J];中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院學(xué)報(bào);2009年06期

7 黨寧寧;逄曙光;宋海燕;張敏;王彥;邊勝男;;針對絲聚合蛋白基因RNA干擾重組慢病毒載體的構(gòu)建及篩選[J];中國現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志;2014年08期

8 羅望;張泓;許淼;顧林;孫倍成;;慢病毒——基因轉(zhuǎn)移的潛在新載體[J];江蘇藥學(xué)與臨床研究;2006年06期

9 彭徐;;慢病毒載體研究進(jìn)展[J];西昌學(xué)院學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);2007年03期

10 張蕊;龔道清;;慢病毒載體的研究進(jìn)展及應(yīng)用[J];中國畜牧獸醫(yī);2010年06期

相關(guān)會議論文 前10條

1 馮東福;畢永延;陳二濤;王永志;楚勝華;;小鼠pLVX-Wnt3a-IRES-ZsGreen1慢病毒載體的構(gòu)建及神經(jīng)干細(xì)胞轉(zhuǎn)染[A];中華醫(yī)學(xué)會神經(jīng)外科學(xué)分會第九次學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2010年

2 李振宇;徐開林;潘秀英;陳香梅;鹿群先;主鴻鵠;李慧;陳海英;何徐彭;;慢病毒載體的構(gòu)建及其包裝細(xì)胞系的建立[A];中華醫(yī)學(xué)會第八次全國血液學(xué)學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2004年

3 王海彬;;雌激素相關(guān)受體α基因超表達(dá)慢病毒載體的構(gòu)建[A];中華醫(yī)學(xué)會第六次全國骨質(zhì)疏松和骨礦鹽疾病學(xué)術(shù)會議暨中華醫(yī)學(xué)會骨質(zhì)疏松和骨礦鹽疾病分會成立十周年論文匯編[C];2011年

4 張曉宇;秦宜德;王超;張文曉;王巍;何曉光;;牛乳鐵蛋白肽基因的慢病毒載體構(gòu)建[A];華東六省一市生物化學(xué)與分子生物學(xué)會2010年學(xué)術(shù)交流會論文集[C];2010年

5 李振宇;徐開林;潘秀英;鹿群先;;慢病毒載體的構(gòu)建、改造及其包裝細(xì)胞系的建立[A];2005年華東六省一市血液病學(xué)學(xué)術(shù)會議暨浙江省血液病學(xué)學(xué)術(shù)年會論文匯編[C];2005年

6 王玉蘭;任振華;;感染食蟹猴骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的病毒載體研究[A];第十三次全國臨床藥理學(xué)學(xué)術(shù)大會論文匯編[C];2012年

7 黃新鳳;葉金波;蔣英芝;任曉虎;黃培武;劉建軍;;SET shRNA慢病毒載體的構(gòu)建及其在肝細(xì)胞中的表達(dá)鑒定[A];中國科協(xié)第十四屆年會第十七分會場環(huán)境危害與健康防護(hù)研討會論文集[C];2012年

8 楊龍江;侯健;;構(gòu)建含有人血小板因子4和其片段的慢病毒載體[A];第12屆全國實(shí)驗(yàn)血液學(xué)會議論文摘要[C];2009年

9 李振宇;徐開林;潘秀英;鹿群先;孫海英;主鴻鵠;陳香梅;何徐彭;;慢病毒載體的構(gòu)建、改造及其包裝細(xì)胞系的建立[A];第九屆全國實(shí)驗(yàn)血液學(xué)會議論文摘要匯編[C];2003年

10 劉峰;肖興鵬;田玉科;;大鼠蛋白激酶Cγ可控shRNA慢病毒的構(gòu)建與鑒定[A];2011年全國醫(yī)藥學(xué)術(shù)論壇交流會暨臨床藥學(xué)與藥學(xué)服務(wù)研究進(jìn)展培訓(xùn)班論文集[C];2011年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 楊玉芳;用LMP1構(gòu)建重組慢病毒載體及建立轉(zhuǎn)基因小鼠模型[D];第一軍醫(yī)大學(xué);2004年

2 徐世永;慢病毒載體法高效轉(zhuǎn)基因雞制備技術(shù)研究[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2007年

3 王玉梅;人PTEN基因RNAi和RESC慢病毒載體的構(gòu)建及其功能的相關(guān)性研究[D];鄭州大學(xué);2011年

4 吳福國;表達(dá)Cdc42-shRNA重組慢病毒載體的構(gòu)建及其對膀胱癌細(xì)胞影響的實(shí)驗(yàn)研究[D];蘭州大學(xué);2007年

5 馬強(qiáng);腫瘤翻譯調(diào)控蛋白（TCTP）對結(jié)腸癌細(xì)胞LoVo的生物學(xué)特性影響及安全型慢病毒載體構(gòu)建探索[D];南方醫(yī)科大學(xué);2009年

6 郝又國;攜帶Rab9 cDNA的慢病毒對C型Niemann-Pick病小鼠的神經(jīng)保護(hù)作用[D];華中科技大學(xué);2009年

7 楊歡;慢病毒介導(dǎo)中國人產(chǎn)甲酸草酸桿菌中草酸分解基因FRC和OXC轉(zhuǎn)染肝干細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)研究[D];華中科技大學(xué);2011年

8 張文卿;HCMV pp150表達(dá)及E1-pp65慢病毒載體刺激T細(xì)胞免疫應(yīng)答的研究[D];山東大學(xué);2006年

9 林元邦;改進(jìn)型復(fù)制缺陷性腺病毒（HDAd）轉(zhuǎn)基因載體特異性及穩(wěn)定性研究[D];天津醫(yī)科大學(xué);2012年

10 梁俊;體外研究慢病毒載體介導(dǎo)人DNMT1基因?qū)LE患者CD4~+T淋巴細(xì)胞的作用[D];復(fù)旦大學(xué);2012年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 魏寇準(zhǔn);肝素酶過表達(dá)慢病毒載體的構(gòu)建及鑒定[D];皖南醫(yī)學(xué)院;2014年

2 蘇一鳴;構(gòu)建過表達(dá)神經(jīng)生長因子β亞基基因的慢病毒載體的實(shí)驗(yàn)研究[D];福建醫(yī)科大學(xué);2010年

3 高強(qiáng);慢病毒載體包裝細(xì)胞系的建立[D];沈陽藥科大學(xué);2006年

4 李雄;rPNCE-Lenti1259慢病毒載體的構(gòu)建及轉(zhuǎn)染人類胚胎干細(xì)胞[D];中南大學(xué);2009年

5 劉鳳斌;慢病毒介導(dǎo)TFAM/POLG基因knock-down小鼠的建立[D];遼寧醫(yī)學(xué)院;2011年

6 劉景偉;以GFP為報(bào)告基因的多基因共表達(dá)慢病毒載體系統(tǒng)的構(gòu)建[D];鄭州大學(xué);2009年

7 李蘭;人DC-SIGN基因RNAi慢病毒載體的構(gòu)建及功能學(xué)鑒定[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2010年

8 王蘭花;eNOS/F92A-Caveolin-1基因的慢病毒載體構(gòu)建及功能分析[D];泰山醫(yī)學(xué)院;2014年

9 仇長青;鈣周期素結(jié)合蛋白基因亞細(xì)胞定位慢病毒載體的構(gòu)建及慢病毒包裝的研究[D];寧夏醫(yī)科大學(xué);2012年

10 于淼;小鼠DND1慢病毒載體的構(gòu)建及病毒生產(chǎn)[D];湖南師范大學(xué);2010年

，

本文編號：1571078