本文選題：Jagged-1　切入點(diǎn)：樹(shù)突狀細(xì)胞　出處：《暨南大學(xué)》2008年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】： 目的:探討Jagged-1在樹(shù)突狀細(xì)胞(dendritic cells,DCs)介導(dǎo)T細(xì)胞誘導(dǎo)同種異基因皮膚移植免疫耐受中的作用及其機(jī)制。方法:建立體外誘導(dǎo)小鼠骨髓來(lái)源DCs的模型,顯微鏡下觀察Jagged-1對(duì)重組粒細(xì)胞—巨噬細(xì)胞集落刺激因子(rmGM-CSF)和白細(xì)胞介素4(rmIL-4)協(xié)同誘導(dǎo)的小鼠骨髓DCs形態(tài)學(xué)變化的影響;熒光標(biāo)記單克隆抗體染色技術(shù)結(jié)合流式細(xì)胞儀檢測(cè)Jagged-1對(duì)不同時(shí)間小鼠骨髓DCs分化標(biāo)記CD11c及DCs成熟標(biāo)記MHC-Ⅱ、CD86、CD80和CD40表達(dá)的影響;利用MTT法檢測(cè)Jagged-1誘導(dǎo)的DCs、T細(xì)胞和DC-T細(xì)胞共培養(yǎng)體系中T細(xì)胞對(duì)同種異基因淋巴細(xì)胞增殖的影響;通過(guò)Luminex蛋白液相芯片技術(shù)和ELISA檢測(cè)經(jīng)Jagged-1處理的DCs、T細(xì)胞和DC-T細(xì)胞共培養(yǎng)體系上清中白細(xì)胞介素2(IL-2)、白細(xì)胞介素4(IL-4)、白細(xì)胞介素6(IL-6)、白細(xì)胞介素10(IL-10)、白細(xì)胞介素12(IL-12)、干擾素γ(IFN-γ)、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β(TGF-β)、腫瘤壞死因子α(TNF-α)的表達(dá)水平;建立同種異基因小鼠皮膚移植模型,磁珠分選Jagged-1介導(dǎo)DC-T細(xì)胞共培養(yǎng)體系中CD4~+T細(xì)胞,輸入受體小鼠,觀察皮膚移植物存活時(shí)間和移植物病理變化,檢測(cè)受體外周血中CD4~+CD25~+Treg的表達(dá)水平,小鼠混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)和遲發(fā)型超敏反應(yīng)。結(jié)果:Jagged-1誘導(dǎo)的細(xì)胞具有典型成熟DCs的形態(tài)特征,培養(yǎng)第6d和12d時(shí),Jagged-1組CD11c細(xì)胞平均熒光強(qiáng)度(MFI)均明顯增高(P＜0.01與P＜0.05);Jagged-1組CD80、CD40和MHC-Ⅱ~(high)表達(dá)細(xì)胞的陽(yáng)性率明顯高于對(duì)照組(P＜0.05),且CD80和CD40的MFI也明顯增高(P＜0.01與P＜0.05),而CD86的MFI無(wú)明顯變化(P＞0.05);Jagged-1誘導(dǎo)的DCs、T細(xì)胞和DC-T細(xì)胞均不同程度抑制IFN-γ、IL-2、IL-12和TNF-α等Th1型細(xì)胞因子的表達(dá),顯著升高TGF-β、IL-6、IL-4或IL-10等Treg或Th2型細(xì)胞因子水平;在混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)(MLR)中,Jagged-1組DCs、T細(xì)胞和DC-T細(xì)胞共培養(yǎng)體系中T細(xì)胞刺激同種異基因淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng)性均顯著降低(P＜0.01),DAPT能在一定程度上逆轉(zhuǎn)Jagged-1的作用;Jagged-1介導(dǎo)的DCs直接接觸作用后的CD4~+T細(xì)胞能延長(zhǎng)同種異基因小鼠移植皮片存活時(shí)間,皮膚移植物平均存活38.6d,顯著高于對(duì)照組和DAPT+Jagged-1組(P＜0.01),Jagged-1處理組移植皮片內(nèi)浸潤(rùn)的炎癥細(xì)胞數(shù)量明顯減少;在MLR中,Jagged-1處理組小鼠淋巴細(xì)胞對(duì)供體小鼠淋巴細(xì)胞呈現(xiàn)低反應(yīng)性(P＜0.01),且加入IL-2逆轉(zhuǎn)效果不明顯,而對(duì)第三方無(wú)關(guān)供體KM小鼠淋巴細(xì)胞表現(xiàn)強(qiáng)烈的增殖反應(yīng);Jagged-1處理組小鼠在遲發(fā)型超敏反應(yīng)中也表現(xiàn)出顯著的低反應(yīng)性(P＜0.01);Jagged-1組小鼠外周血CD4~+CD25~+Treg與對(duì)照組(P＜0.01)和DAPT+Jagged-1組(P＜0.05)有顯著差異,DAPT能阻斷Jagged-1上調(diào)CD4~+CD25~+Treg的作用。結(jié)論:Jagged-1能誘導(dǎo)骨髓來(lái)源DCs的分化和成熟;Jagged-1可以通過(guò)抑制IFN-γ、IL-12和TNF-α等Th1型細(xì)胞因子表達(dá),促進(jìn)IL-4、IL-10等的表達(dá)誘導(dǎo)外周T細(xì)胞向Th2細(xì)胞分化,同時(shí)誘導(dǎo)DCs促進(jìn)T細(xì)胞向Th2型分化,并減弱DCs刺激淋巴細(xì)胞增殖能力;Jagged-1聯(lián)合DCs處理的CD4~+T細(xì)胞誘導(dǎo)小鼠獲得供體抗原特異性的免疫耐受,與CD4~+CD25~+Treg數(shù)量相對(duì)升高,改變Th1/Th2細(xì)胞因子平衡極化有關(guān),這些發(fā)現(xiàn)可能為臨床移植耐受的誘導(dǎo)提供新的治療靶點(diǎn)。
[Abstract]:Objective: To investigate the effects of Jagged-1 on dendritic cells (dendritic cells DCs) mediated induction effect and mechanism of skin allograft immune tolerance in T cells. Methods: to establish the induced mouse bone marrow-derived DCs in vitro model, under the microscope of Jagged-1 cells of recombinant granulocyte macrophage colony stimulating factor (rmGM-CSF) and interleukin 4 (rmIL-4) changes in bone marrow of mice DCs induced morphological synergy; fluorescence labeled monoclonal antibody staining combined with flow cytometry Jagged-1 on different time of mouse bone marrow DCs differentiation marker CD11c and DCs marker of mature MHC- II, CD86, expression of CD80 and CD40; using MTT method to detect Jagged-1 induced DCs effect of T cells on allogeneic lymphocyte proliferation of co cultured T cells and DC-T cells; Luminex protein by liquid chip technology and ELISA detection of Jagged-1 treated D Cs, T and DC-T cell co culture system in supernatants of interleukin 2 (IL-2), interleukin 4 (IL-4), interleukin 6 (IL-6), interleukin 10 (IL-10), interleukin 12 (IL-12) and interferon gamma (IFN- gamma). Transforming growth factor beta (TGF- beta), tumor necrosis factor alpha (TNF- alpha) expression level; to establish a murine model for allogeneic skin transplantation, multisort Jagged-1 mediated DC-T cell CD4~+T cell co culture system, the input of recipient mice, observe the skin graft survival and graft pathological changes, the expression level of CD4~+CD25~+Treg in peripheral blood testing, mixed lymphocyte reaction and delayed hypersensitivity reaction in mice. Results: Jagged-1 induced cells with typical morphological features of mature DCs, cultured 6D and 12D, the average fluorescence intensity of Jagged-1 group CD11c cells (MFI) were significantly increased (P < 0.01 and P < 0.05); Jagged-1 group CD80, CD40 And MHC- II ~ (high) positive expression rate of cells was significantly higher than the control group (P < 0.05), and CD80 and CD40 MFI were significantly higher (P < 0.01 and P < 0.05), while CD86 MFI did not change significantly (P > 0.05); Jagged-1 induced DCs, T cells and DC-T cells have different degrees of inhibition of IFN- gamma, IL-2, expression of IL-12 and TNF- alpha and Th1 type cytokines, increased TGF- beta, IL-6, IL-4 or IL-10 Treg or Th2 type cytokines; mixed lymphocyte reaction (MLR) in group Jagged-1, DCs, T and DC-T cells were co cultured with T were significantly decreased cells to stimulate allogeneic lymphocyte proliferation reaction system (P < 0.01), DAPT reversed the effect of Jagged-1 to a certain extent; Jagged-1 DCs mediated by direct contact between CD4~+T cells after allogeneic mice can prolong graft survival time of skin graft survival average 38.6d was significantly higher than that of control group and DAP Group T+Jagged-1 (P < 0.01), Jagged-1 group of skin grafts in infiltrating inflammatory cells decreased significantly; in MLR, Jagged-1 treated mice lymphocytes appeared hyporesponsiveness to donor lymphocytes in mice (P < 0.01), and the addition of IL-2 reversed the effect is not obvious, while the third party unrelated donor lymphocyte KM mice a strong proliferative response; Jagged-1 treated mice in the delayed hypersensitivity reaction also showed low reactivity significantly (P < 0.01); peripheral blood CD4~+CD25~+Treg of mice in Jagged-1 group and control group (P < 0.01) and DAPT+ Jagged-1 group (P < 0.05) there is a significant difference, DAPT can block the upregulation of CD4~+CD25~+Treg Jagged-1 effect. Conclusion: Jagged-1 can induce the differentiation and maturation of bone marrow derived DCs; Jagged-1 can inhibit the expression of IL-12, IFN- gamma, TNF- alpha and Th1 type cytokines promoting IL-4, and the expression of IL-10 induced by peripheral T cells to Th2 At the same time, cell differentiation, induction of DCs T cells to promote Th2 differentiation, and attenuate DCs stimulated lymphocyte proliferation; combined treatment of DCs Jagged-1 CD4~+T cells induced by donor antigen specific immune tolerance in mice, increased the relative quantity of CD4~+CD25~+Treg and Th1/Th2 Cytokines Balance polarization is concerned, these findings may provide new therapeutic targets for induction of clinical transplantation tolerance.

【學(xué)位授予單位】：暨南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2008
【分類號(hào)】：R392

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本文編號(hào)：1565112