本文關(guān)鍵詞： NGF 甲醛 哮喘模型 肺功能 RT-PCR DPC　出處：《華中師范大學(xué)》2008年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】： 神經(jīng)生長(zhǎng)因子(Nerve Growth Factor,NGF)是Rita Levi-Montalcini在50多年前發(fā)現(xiàn),由3種不同類型的蛋白質(zhì)亞基組成的復(fù)合物。它與腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(BDNF)、神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子-3(NT-3)及神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子-4/5(NT-4/5)同屬于神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)素家族,是中樞神經(jīng)系統(tǒng)的膽堿能神經(jīng)元、周圍神經(jīng)系統(tǒng)的交感和感覺(jué)神經(jīng)元生長(zhǎng)和分化所必需的,以往對(duì)它的研究限于神經(jīng)系統(tǒng)。近來(lái)研究發(fā)現(xiàn)NGF也影響機(jī)體免疫和造血系統(tǒng),與變態(tài)反應(yīng)性和炎癥性疾病的發(fā)病有關(guān)。NGF能誘導(dǎo)免疫炎性細(xì)胞和氣道結(jié)構(gòu)細(xì)胞的生成、增殖、分化和成熟,介導(dǎo)炎性細(xì)胞向炎性部位募集,并能促使外周神經(jīng)元釋放神經(jīng)肽。特別是許多研究證實(shí)NGF在支氣管哮喘的氣道炎癥反應(yīng)和氣道高反應(yīng)性中起著重要的橋梁作用。 甲醛(formaldehyde,FA)是一種常見(jiàn)的裝修型化學(xué)性室內(nèi)空氣污染物,也是一種內(nèi)源性有機(jī)化合物。它以其來(lái)源廣、毒性大、污染水平高、污染時(shí)間長(zhǎng)等特點(diǎn),已成為我國(guó)最主要也是污染最嚴(yán)重的室內(nèi)空氣污染物之一。甲醛暴露對(duì)人體健康的影響主要涉及:呼吸道和眼部的刺激作用、致敏作用和免疫毒性、遺傳毒性和癌癥、肺功能損害、神經(jīng)行為改變等諸多方面。許多研究表明,甲醛可導(dǎo)致哮喘的發(fā)生,但其分子機(jī)理還不清楚。我們課題組以前的研究證實(shí):甲醛暴露能誘導(dǎo)某些基因,如類香草素受體1(VR1),N-甲基-D-天(門)冬氨酸受體(NMDA),胸腺基質(zhì)淋巴細(xì)胞生成素(TSLP)和S-谷胱甘肽亞硝基硫醇還原酶(GSNOR)的表達(dá)上調(diào)。本研究以NGF基因作為研究對(duì)象,檢測(cè)甲醛染毒后的體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)和體內(nèi)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中NGF mRNA表達(dá)水平的改變;并建立大鼠哮喘模型,檢測(cè)模型中肺功能變化和肺組織中NGF mRNA表達(dá)水平的改變,以確立甲醛,NGF和哮喘之間的聯(lián)系。實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下: 1體外實(shí)驗(yàn):液態(tài)甲醛誘導(dǎo)小鼠肥大細(xì)胞NGF mRNA表達(dá)水平的改變 為研究甲醛對(duì)培養(yǎng)的小鼠肥大細(xì)胞NGF mRNA水平的改變作用,將肥大細(xì)胞分別暴露于0μmol/L、5μmol/L、25μmol/L、125μmol/L四組不同濃度液態(tài)甲醛中,染毒3h,然后采用RT-PCR二步法檢測(cè)細(xì)胞中NGF mRNA水平。結(jié)果表明:甲醛在低濃度(5μmol/L)時(shí)就能誘導(dǎo)NGF mRNA表達(dá)上調(diào),并且表達(dá)量隨著甲醛濃度升高而升高,但是在高濃度(125μmol/L)時(shí),NGF mRNA表達(dá)量卻急劇下降。 由于甲醛能同時(shí)致DNA損傷,誘導(dǎo)DNA-蛋白質(zhì)發(fā)生交聯(lián)(DNA-proteincrosslinks,DPC),影響DNA正常復(fù)制與轉(zhuǎn)錄,所以本研究同時(shí)以小鼠肥大細(xì)胞作為實(shí)驗(yàn)材料,檢測(cè)對(duì)應(yīng)的甲醛染毒后所誘導(dǎo)的DPC效應(yīng)。結(jié)果顯示:體外實(shí)驗(yàn)中,甲醛在125μM能顯著誘導(dǎo)小鼠肥大細(xì)胞DPC效應(yīng)(P＜0.05)。 2體內(nèi)實(shí)驗(yàn):氣態(tài)甲醛誘導(dǎo)小鼠腦和肺組織NGF mRNA表達(dá)水平的改變 為證實(shí)氣態(tài)甲醛對(duì)小鼠腦和肺組織中NGF mRNA水平的改變作用。我們選取3.0 mg/m~3濃度的氣態(tài)甲醛對(duì)24只昆明小鼠分別進(jìn)行了24h和72h仿真環(huán)境模型染毒。小鼠隨機(jī)分為4組(n=6),對(duì)照組在同樣的染毒缸中吸入經(jīng)過(guò)濾的新鮮空氣,暴露結(jié)束后立即采用RT-PCR二步法檢測(cè)腦和肺組織中NGF mRNA水平。結(jié)果顯示:不同組織中NGF mRNA表達(dá)量隨時(shí)間呈現(xiàn)不同的表達(dá)趨勢(shì)。染毒24h后,肺中NGF mRNA表達(dá)量顯著上調(diào)(P＜0.01);但是72h后,其表達(dá)量下降,略低于對(duì)照組(P＞0.05)。而在腦組織中,NGF mRNA表達(dá)量隨染毒時(shí)間增加而升高,24h時(shí),腦中NGF mRNA表達(dá)量略高于對(duì)照組(P＞0.05);但是72h后,其表達(dá)量顯著上調(diào)(P＜0.01)。而在相對(duì)應(yīng)的DPC實(shí)驗(yàn)中,不同濃度的甲醛均不能誘導(dǎo)小鼠腦和肺組織中DPC效應(yīng)(P＞0.05)。 3大鼠哮喘模型中肺功能檢測(cè)及肺組織中NGF mRNA表達(dá)水平的改變 為了進(jìn)一步建立甲醛,NGF和哮喘之間的聯(lián)系,我們將21只Wistar大鼠隨機(jī)分為空白對(duì)照組,1.0 mg/m~3甲醛染毒組和3.0 mg/m~3甲醛染毒組(n=7),制備了大鼠哮喘模型,應(yīng)用AniRes2005動(dòng)物肺功能分析系統(tǒng)檢測(cè)大鼠肺各項(xiàng)功能指標(biāo);然后處死大鼠,應(yīng)用RT-PCR二步法檢測(cè)肺組織中NGF mRNA水平。結(jié)果顯示:呼氣阻力(Re)和吸氣阻力(Ri)隨著染毒濃度的升高,阻力逐漸增大,肺順應(yīng)性隨著染毒濃度的升高逐漸下降,相對(duì)于空白對(duì)照組均有不同程度的差異性;1.0 mg/m~3甲醛染毒組中NGF mRNA表達(dá)量相對(duì)于空白對(duì)照組顯著上調(diào)(P＜0.01),3.0 mg/m~3甲醛染毒組中NGF mRNA表達(dá)量急劇下降,相對(duì)于1.0 mg/m~3甲醛染毒組有顯著性差異(P＜0.01),僅略高于空白對(duì)照組,但2組之間沒(méi)有顯著性差異(P＞0.05)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：華中師范大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2008
【分類號(hào)】：R363

【參考文獻(xiàn)】

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