發(fā)布時(shí)間：2018-03-01 11:07

  本文關(guān)鍵詞： 早孕滋養(yǎng)細(xì)胞 原代培養(yǎng) 胎盤(pán) 人外周血淋巴細(xì)胞分離液 percoll密度梯度 差速 細(xì)胞角蛋白-　出處：《廣東醫(yī)學(xué)》2015年05期 　論文類(lèi)型：期刊論文

【摘要】：目的對(duì)4種建立滋養(yǎng)細(xì)胞的方法進(jìn)行比較,以期尋求一種簡(jiǎn)便高效的人早孕滋養(yǎng)細(xì)胞的體外培養(yǎng)方法,為相關(guān)研究提供基礎(chǔ)。方法早孕絨毛通過(guò)胰酶聯(lián)合膠原酶消化分離后,分別采用直接接種、差速貼壁聯(lián)合差速消化法、人外周血淋巴細(xì)胞分離液分離純化法、完整絨毛消化聯(lián)合簡(jiǎn)化的percoll密度梯度分離法4種方法純化培養(yǎng),倒置顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài),應(yīng)用HE染色、免疫組化和免疫細(xì)胞化學(xué)法檢測(cè)細(xì)胞純度。結(jié)果直接接種、差速貼壁聯(lián)合差速消化法、人外周血淋巴細(xì)胞分離液分離純化法得到的細(xì)胞細(xì)胞角蛋白7(CK-7)表達(dá)陽(yáng)性率不足60%;簡(jiǎn)化的percoll密度梯度分離法得到的細(xì)胞CK-7表達(dá)陽(yáng)性率達(dá)90%以上。結(jié)論完整絨毛消化聯(lián)合簡(jiǎn)化的percoll密度梯度分離純化可以得到大量較高純度的滋養(yǎng)細(xì)胞以供后期實(shí)驗(yàn)。
[Abstract]:Objective to compare four methods for the establishment of trophoblastic cells in order to find a simple and efficient method for the culture of human trophoblastic cells in early pregnancy in vitro, and to provide a basis for related studies. Methods the villi of early pregnancy were digested and separated by trypsin and collagenase. Methods: direct inoculation, differential adhesion combined with differential digestion, isolation and purification of human peripheral blood lymphocytes, complete villus digestion combined with simplified percoll density gradient method were used to purify and culture. The morphology of cells was observed by inverted microscope, and the purity of cells was detected by HE staining, immunohistochemistry and immunocytochemistry. The positive rate of cytokeratin 7 (CK-7) expression in human peripheral blood lymphocytes was less than 60%, and the positive rate of CK-7 expression in cells obtained by simplified percoll density gradient method was more than 90%. Combined with simplified percoll density gradient separation and purification, a large number of high purity trophoblastic cells can be obtained for later experiments.
【作者單位】： 承德醫(yī)學(xué)院藥理學(xué)教研室;承德醫(yī)學(xué)院病理學(xué)教研室;承德醫(yī)學(xué)院基礎(chǔ)研究所;
【基金】：2012年河北省科學(xué)技術(shù)研究與發(fā)展計(jì)劃(第五批)項(xiàng)目(編號(hào):H2012406010) 河北省高等學(xué)校自然科學(xué)研究青年基金項(xiàng)目(編號(hào):2010103)
【分類(lèi)號(hào)】：R321

【參考文獻(xiàn)】

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【共引文獻(xiàn)】

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【二級(jí)參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1551658