本文關鍵詞： 蛋白表達 IL-33 傷口愈合 感染傷口 細胞因子　出處：《廣東藥學院》2013年碩士論文　論文類型：學位論文

【摘要】：機體組織傷口的愈合過程十分復雜，由多種組織細胞、免疫細胞及相關分子共同參與，經有序調控而完成組織修復，整個過程可以分為炎癥期、增殖期和塑型期共三個階段。目前，組織傷口愈合的機制研究成為創(chuàng)傷修復領域的一個熱點課題，尤其是一些難愈性的組織傷口給病人造成極大的痛苦，并給臨床治療工作帶來很大的困惑。促組織傷口愈合的治療措施通常為局部給予敷料或抗生素來促進傷口修復和避免傷口的感染，但對于一些感染后難愈性傷口，療效往往不令人滿意。IL-33是新近發(fā)現(xiàn)的一種前炎性細胞因子，屬于IL-1超家族成員。IL-33通過與細胞表面受體ST2L結合，誘導免疫應答向Th2型偏移，促進Th2型細胞因子如IL-4、IL-5、IL-10、IL-13的分泌，可調節(jié)組織細胞如上皮細胞、成纖維細胞以及免疫細胞如肥大細胞、巨噬細胞的功能活性。本課題擬建立小鼠非感染性皮膚傷口和耐藥性金黃色葡萄球菌（MRSA）感染傷口兩種動物模型，探討IL-33在傷口修復過程中的作用及其相關機制。 研究目的：通過觀察IL-33在小鼠皮膚傷口組織中的變化情況，探討外源性IL-33在皮膚感染性及非感染性傷口修復中的作用及其機制，為提高組織傷口（尤其難愈性傷口）愈合的治療措施提供新的思路和方向。 研究方法：建立小鼠背部皮膚傷口模型，通過給予外源性IL-33的治療，觀察小鼠傷口的愈合時間和愈合率；皮膚組織mRNA提取后，RT-PCR鑒定相關細胞生長因子的基因表達水平；皮膚組織固定，經HE染色、Masson染色和免疫組織化學染色，觀察傷口局部新生血管與肉芽組織的形成、局部成纖維細胞與炎性細胞的數(shù)量、膠原纖維的增殖以及替代活化途徑巨噬細胞（AAM）的產生。體外檢測IL-33促進成纖維細胞（NIH3T3）遷移的作用。研究結果： 1.優(yōu)化表達IL-33蛋白 GST-IL-33融合蛋白經誘導時間的優(yōu)化及表達部位的鑒定后，表達菌株培養(yǎng)2h37℃250rpm，加入終濃度1mM IPTG誘導4h，經過超聲裂解、純化、酶切、去內毒素等獲得IL-33。 2. IL-33促進小鼠非感染性皮膚傷口愈合的作用 建立BALB/c小鼠皮膚傷口模型，經IL-33治療后，對照組皮膚傷口的愈合時間為10天，治療組為8天。組織病理學檢查發(fā)現(xiàn)，IL-33治療后成纖維細胞與膠原纖維數(shù)量增多，肉芽組織形成較對照組增加，傷口局部AAM與相應的細胞生長因子如TGF-β、VEGF基因表達量增加，并能有效促進成纖維細胞的遷移。 3. IL-33促進小鼠皮膚耐藥性金黃色葡萄球菌（MRSA）感染傷口的愈合作用 建立C57BL/6小鼠皮膚傷口感染耐藥性金黃色葡萄球菌模型，經IL-33治療后，對照組皮膚傷口的愈合時間為12天，，治療組為10天。組織病理學檢查發(fā)現(xiàn)，治療組成纖維細胞與膠原纖維數(shù)量較對照組增多，流式細胞檢測發(fā)現(xiàn)脾臟Th17細胞的比例上升，傷口局部組織中TGF-β、IL-6、VEGF表達增加。 結論：成功誘導并制備IL-33蛋白；IL-33通過調節(jié)CD4+T細胞免疫應答，誘導AAM巨噬細胞生成，促進成纖維細胞（NIH3T3）的遷移，調節(jié)細胞因子和生長因子的產生，從而發(fā)揮促進小鼠皮膚傷口愈合的作用。
[Abstract]:Interleukin - 33 ( IL - 33 ) is one of the most recently discovered inflammatory cytokines , which can regulate the secretion of Th2 - type cytokines such as IL - 4 , IL - 5 , IL - 10 and IL - 13 . Objective : To investigate the role and mechanism of exogenous IL - 33 in skin infection and non - infective wound repair by observing the changes of IL - 33 in skin wound tissue of mice . Methods : To establish a model of skin wound on the back skin of mice . After the treatment of exogenous IL - 33 , the healing time and the healing rate of the wound were observed . After the mRNA extraction of skin tissue , the expression level of the related cell growth factor was observed by RT - PCR , the number of local fibroblasts and granulation tissue , the proliferation of the collagen fibers and the production of alternative activation pathway macrophages were observed . The results of the study were as follows : 1 . Optimization of Expression of IL - 33 Protein The expression of GST - IL - 33 fusion protein was optimized and the expression of GST - IL - 33 fusion protein was optimized and the expression of GST - IL - 33 fusion protein was identified . The expression strain was cultured for 4 hours at 2h37 鈩

本文編號：1544392