本文關(guān)鍵詞： 蛋白表達(dá) IL-33 傷口愈合 感染傷口 細(xì)胞因子　出處：《廣東藥學(xué)院》2013年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：機(jī)體組織傷口的愈合過程十分復(fù)雜，由多種組織細(xì)胞、免疫細(xì)胞及相關(guān)分子共同參與，經(jīng)有序調(diào)控而完成組織修復(fù)，整個(gè)過程可以分為炎癥期、增殖期和塑型期共三個(gè)階段。目前，組織傷口愈合的機(jī)制研究成為創(chuàng)傷修復(fù)領(lǐng)域的一個(gè)熱點(diǎn)課題，尤其是一些難愈性的組織傷口給病人造成極大的痛苦，并給臨床治療工作帶來(lái)很大的困惑。促組織傷口愈合的治療措施通常為局部給予敷料或抗生素來(lái)促進(jìn)傷口修復(fù)和避免傷口的感染，但對(duì)于一些感染后難愈性傷口，療效往往不令人滿意。IL-33是新近發(fā)現(xiàn)的一種前炎性細(xì)胞因子，屬于IL-1超家族成員。IL-33通過與細(xì)胞表面受體ST2L結(jié)合，誘導(dǎo)免疫應(yīng)答向Th2型偏移，促進(jìn)Th2型細(xì)胞因子如IL-4、IL-5、IL-10、IL-13的分泌，可調(diào)節(jié)組織細(xì)胞如上皮細(xì)胞、成纖維細(xì)胞以及免疫細(xì)胞如肥大細(xì)胞、巨噬細(xì)胞的功能活性。本課題擬建立小鼠非感染性皮膚傷口和耐藥性金黃色葡萄球菌（MRSA）感染傷口兩種動(dòng)物模型，探討IL-33在傷口修復(fù)過程中的作用及其相關(guān)機(jī)制。 研究目的：通過觀察IL-33在小鼠皮膚傷口組織中的變化情況，探討外源性IL-33在皮膚感染性及非感染性傷口修復(fù)中的作用及其機(jī)制，為提高組織傷口（尤其難愈性傷口）愈合的治療措施提供新的思路和方向。 研究方法：建立小鼠背部皮膚傷口模型，通過給予外源性IL-33的治療，觀察小鼠傷口的愈合時(shí)間和愈合率；皮膚組織mRNA提取后，RT-PCR鑒定相關(guān)細(xì)胞生長(zhǎng)因子的基因表達(dá)水平；皮膚組織固定，經(jīng)HE染色、Masson染色和免疫組織化學(xué)染色，觀察傷口局部新生血管與肉芽組織的形成、局部成纖維細(xì)胞與炎性細(xì)胞的數(shù)量、膠原纖維的增殖以及替代活化途徑巨噬細(xì)胞（AAM）的產(chǎn)生。體外檢測(cè)IL-33促進(jìn)成纖維細(xì)胞（NIH3T3）遷移的作用。研究結(jié)果： 1.優(yōu)化表達(dá)IL-33蛋白 GST-IL-33融合蛋白經(jīng)誘導(dǎo)時(shí)間的優(yōu)化及表達(dá)部位的鑒定后，表達(dá)菌株培養(yǎng)2h37℃250rpm，加入終濃度1mM IPTG誘導(dǎo)4h，經(jīng)過超聲裂解、純化、酶切、去內(nèi)毒素等獲得IL-33。 2. IL-33促進(jìn)小鼠非感染性皮膚傷口愈合的作用 建立BALB/c小鼠皮膚傷口模型，經(jīng)IL-33治療后，對(duì)照組皮膚傷口的愈合時(shí)間為10天，治療組為8天。組織病理學(xué)檢查發(fā)現(xiàn)，IL-33治療后成纖維細(xì)胞與膠原纖維數(shù)量增多，肉芽組織形成較對(duì)照組增加，傷口局部AAM與相應(yīng)的細(xì)胞生長(zhǎng)因子如TGF-β、VEGF基因表達(dá)量增加，并能有效促進(jìn)成纖維細(xì)胞的遷移。 3. IL-33促進(jìn)小鼠皮膚耐藥性金黃色葡萄球菌（MRSA）感染傷口的愈合作用 建立C57BL/6小鼠皮膚傷口感染耐藥性金黃色葡萄球菌模型，經(jīng)IL-33治療后，對(duì)照組皮膚傷口的愈合時(shí)間為12天，，治療組為10天。組織病理學(xué)檢查發(fā)現(xiàn)，治療組成纖維細(xì)胞與膠原纖維數(shù)量較對(duì)照組增多，流式細(xì)胞檢測(cè)發(fā)現(xiàn)脾臟Th17細(xì)胞的比例上升，傷口局部組織中TGF-β、IL-6、VEGF表達(dá)增加。 結(jié)論：成功誘導(dǎo)并制備IL-33蛋白；IL-33通過調(diào)節(jié)CD4+T細(xì)胞免疫應(yīng)答，誘導(dǎo)AAM巨噬細(xì)胞生成，促進(jìn)成纖維細(xì)胞（NIH3T3）的遷移，調(diào)節(jié)細(xì)胞因子和生長(zhǎng)因子的產(chǎn)生，從而發(fā)揮促進(jìn)小鼠皮膚傷口愈合的作用。
[Abstract]:Interleukin - 33 ( IL - 33 ) is one of the most recently discovered inflammatory cytokines , which can regulate the secretion of Th2 - type cytokines such as IL - 4 , IL - 5 , IL - 10 and IL - 13 . Objective : To investigate the role and mechanism of exogenous IL - 33 in skin infection and non - infective wound repair by observing the changes of IL - 33 in skin wound tissue of mice . Methods : To establish a model of skin wound on the back skin of mice . After the treatment of exogenous IL - 33 , the healing time and the healing rate of the wound were observed . After the mRNA extraction of skin tissue , the expression level of the related cell growth factor was observed by RT - PCR , the number of local fibroblasts and granulation tissue , the proliferation of the collagen fibers and the production of alternative activation pathway macrophages were observed . The results of the study were as follows : 1 . Optimization of Expression of IL - 33 Protein The expression of GST - IL - 33 fusion protein was optimized and the expression of GST - IL - 33 fusion protein was optimized and the expression of GST - IL - 33 fusion protein was identified . The expression strain was cultured for 4 hours at 2h37 鈩

本文編號(hào)：1544392