本文關鍵詞： Toll-like受體 Sertoli細胞 吞噬 Tyro3家族受體 陰道閉鎖　出處：《中國協(xié)和醫(yī)科大學》2008年博士論文　論文類型：學位論文

【摘要】： 一、Toll-like受體在小鼠Sertoli細胞中的表達及功能 Toll-like受體(Toll like receptors,TLRs)是近來發(fā)現(xiàn)的一種模式識別受體,識別病原微生物進化中的保守分子。在人中已發(fā)現(xiàn)10個成員(TLR1-10),小鼠中發(fā)現(xiàn)了12個成員(TLR1-9,11-13)。TLRs在介導天然免疫和獲得性免疫中發(fā)揮著重要的作用。本文旨在研究TLRs在小鼠Sertoli細胞的表達及其功能。應用RT-PCR,流式細胞儀和Western blots的方法檢測基因表達。免疫熒光染色用于檢測NF-κB的活化。油紅O染色檢測脂滴的形成用來評價Sertoli細胞的吞噬功能。結(jié)果顯示,TLR2-TLR5在Sertoli細胞中高表達,TLR6,TLR7和TLR13表達相對較低,而TLR1,TLR8,TLR9,TLR11和TLR12在Sertoli細胞中不表達。我們選擇表達水平較高的TLR2-5進行深入研究。結(jié)果表明Sertoli細胞中的TLR2-5均可被其配體酵母多糖,poly(I:C),脂多糖和鞭毛蛋白激活,進而活化NF-κB,誘導Sertoli細胞分泌主要炎癥因子(IL-1α,IL-6,IFNα及IFNβ)。TLR2-5被激活后均可誘導IL-1α和IL-6的表達,而TLR3-4的激活還可誘導IFNα及IFNβ的分泌。另外,TLR3具有調(diào)節(jié)Sertoli細胞吞噬能力的作用,并且發(fā)現(xiàn)TLR介導的Sertoli細胞吞噬作用與清道夫受體的表達上調(diào)有關。上述結(jié)果表明TLR2-5可能在保護生精上皮抵抗外來病原體和自身抗原,維持睪丸的免疫獲免特征中發(fā)揮著重要的作用。 二、Tyro3家族受體敲除小鼠呈現(xiàn)高比率的末端陰道閉鎖 陰道閉鎖是女性生殖系統(tǒng)的常見畸形,導致陰道發(fā)育缺陷的特異分子機制仍不清楚。我們報道缺失Tyro3家族受體的雌性小鼠表現(xiàn)高比率的末端陰道閉鎖。Tyro3受體酪氨酸激酶家族包括三個成員:Tyro3、Axl與Mer。在分析三基因敲除小鼠(Tyro3~(-/-)Axl~(-/-)Mer~(-/-),TAM)表型的過程中,發(fā)現(xiàn)約16%的雌性小鼠表現(xiàn)為末端陰道閉鎖。進而對雙基因敲除及單基因敲除小鼠進行分析,發(fā)現(xiàn)Axl~(-/-) Mer~(-/-)(AM)與Tyro3~(-/-) Mer~(-/-)(TM)小鼠的陰道閉鎖率分別為4.0%和3.7%,Mer~(-/-)(M)雌性小鼠的發(fā)病率為2.5%。其它基因型小鼠Axl~(-/-) Tyro3~(-/-)(AT)、Axl~(-/-)(A)、Tyro3~(-/-)(T)及野生型小鼠從未見此變化。提示Tyro3亞家族成員在調(diào)節(jié)陰道發(fā)育上相互協(xié)調(diào),Mer起著關鍵作用,Axl和Tyro3起輔助Mer的作用。Tyro3家族受體敲除小鼠可做為研究陰道閉鎖發(fā)生機理的有用模型。
[Abstract]:Expression and function of Toll-like receptor in murine Sertoli cells. Toll-like receptor Toll like receptor TLRs is a recently discovered pattern recognition receptor. Ten members of TLR1-10 have been found in humans and 12 members of TLR1-9 have been found in mice. TLRs play an important role in mediating innate and acquired immunity. The purpose of this paper is to study TLRs in small mice. Expression and function of mouse Sertoli cells. Detection of gene expression by RT-PCR, flow cytometry and Western blots. Immunofluorescence staining was used to detect the activation of NF- 魏 B. Oil red O staining was used to detect lipid droplet formation to evaluate the phagocytosis of Sertoli cells. The results showed that the expression of TLR2-TLR5 was relatively low in Sertoli cells. However, TLR1, TLR9, TLR11 and TLR12 were not expressed in Sertoli cells. We selected TLR2-5 with high expression level for further study. The results showed that the TLR2-5 in Sertoli cells could be activated by its ligand yeast polysaccharide, polylipopolysaccharide, lipopolysaccharide and flagellin. Furthermore, the activation of NF- 魏 B could induce the expression of IL-1 偽 and IL-6 in Sertoli cells after the activation of IL-1 偽, IL-6, IFN- 偽 and IFN 尾. TLR2-5, and the activation of TLR3-4 could also induce the secretion of IFN 偽 and IFN 尾. In addition, TLR3 could regulate the phagocytosis of Sertoli cells, and TLR3 could regulate the phagocytosis of Sertoli cells. It was also found that the phagocytosis of Sertoli cells mediated by TLR was related to the up-regulation of scavenger receptor expression. These results suggest that TLR2-5 may protect spermatogenic epithelium from foreign pathogens and autoantigens. It plays an important role in maintaining immune immunity characteristics of testis. The tyro3 receptor knockout mice present a high rate of terminal vaginal atresia. Vaginal atresia is a common malformation of the female reproductive system. The specific molecular mechanisms leading to vaginal dysplasia are still unclear. We report a high rate of terminal vaginal atresia. Tyro3 receptor tyrosine kinase family consists of three members: Tyro3 axl and Mer. in this study, we report the presence of a high rate of terminal vaginal atresia in female mice without Tyro3 family receptors. In the process of removing the phenotype of the Tyro3- /---tam in the tri-gene knockout mice, It was found that about 16% of the female mice showed terminal vaginal atresia, and then the double gene knockout and single gene knockout mice were analyzed. It was found that the vaginal atresia rates were 4.0% and 3.7% in the Axltr / R / M and Tyro3 / R / M mice, respectively.) the incidence of vaginal atresia in the female mice was 2.55.The other genotypic mice, Axl / R / R) Tyro-R / R / R) and wild-type mice, have never seen this change. It is suggested that the Tyro3 subfamily members are regulating the vagina development phase. Mer plays a key role in assisting Mer by axl and Tyro3. Tyro3 receptor knockout mice can be used as a useful model to study the mechanism of vaginal atresia.
【學位授予單位】：中國協(xié)和醫(yī)科大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2008
【分類號】：R392

【共引文獻】

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本文編號：1507511