本文關(guān)鍵詞： 卵母細(xì)胞 非整倍體 紡錘體 姐妹染色單體平衡性過早分離 亞甲基四氫葉酸還原酶 蛋氨酸合成酶還原酶 Down綜合征　出處：《華中科技大學(xué)》2008年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】： 目的探討卵母細(xì)胞第一次減數(shù)分裂中非整倍體發(fā)生機(jī)制以及年齡、葉酸代謝和卵母細(xì)胞非整倍體相關(guān)性的產(chǎn)生原因。 方法光譜核型分析法(spectral karyotyping SKY)檢測人未受精卵母細(xì)胞23條染色體的核型;免疫熒光和熒光原位雜交法檢測不同體外培養(yǎng)時間下小鼠卵母細(xì)胞紡錘體和染色體的構(gòu)象及16號染色體的核型變化;免疫熒光法分析不同年齡女性卵母細(xì)胞紡錘體和染色體的構(gòu)象差異;免疫細(xì)胞化學(xué)和激光共聚焦顯微術(shù)檢測不同年齡小鼠卵母細(xì)胞中絲裂原活化蛋白激酶MAPK的表達(dá)差異;PCR-RFLP法分析亞甲基四氫葉酸還原酶(MTHFR)677位置及蛋氨酸合成酶還原酶(MTRR)66位置的基因型。 結(jié)果獲得SKY結(jié)果的44個人卵母細(xì)胞中,55%(24/44)的卵母細(xì)胞存在兩條姐妹染色單體平衡性過早分離現(xiàn)象(balanced predivision BP);在44個卵母細(xì)胞中,64%(28/44)的卵母細(xì)胞核型正常;36%(16/44)的卵母細(xì)胞為非整倍體,其中22%(10/44)為同源染色體不分離(nondisjunction NDJ),14%(6/44)為姐妹染色單體非平衡性過早分離(unbalanced predivision UBP)。新鮮小鼠成熟卵母細(xì)胞中BP的發(fā)生率僅為7%,明顯低于培養(yǎng)24h、48h和72h后的BP發(fā)生率(P＜0.01,P＜0.001);新鮮小鼠成熟卵母細(xì)胞紡錘體和染色體異常的比率為9%,在培養(yǎng)24h、48h和72h后,其異常發(fā)生率分別為63%、83%和98%,與新鮮卵母細(xì)胞相比,差異有顯著性(P＜0.001)。卵母細(xì)胞正常紡錘體和染色體率隨女性年齡增加而明顯降低,25～29歲女性卵母細(xì)胞正常紡錘體和染色體比率分別為33%和31%,顯著高于30～34歲女性(P＜0.05,P＜0.025)和35～40歲女性(P＜0.01)。6～8周小鼠卵母細(xì)胞中正常紡錘體和染色體比率以及ERK_(1%q2)蛋白的表達(dá)均明顯高于45～50周小鼠(P＜0.025,P＜0.05)。實驗組女性中:C/C基因型7例,C/T型16例,T/T型9例;A/A基因型5例,A/G型14例,G/G型13例;對照組:C/C基因型36例,C/T型29例,T/T型5例;A/A基因型24例,A/G型34例,G/G型12例。 結(jié)論NDJ、UBP和BP均參與了卵母細(xì)胞非整倍體的產(chǎn)生,但BP也可發(fā)生于卵母細(xì)胞排卵后老化過程中,其發(fā)生可能與卵母細(xì)胞排卵后老化過程中紡錘體和染色體構(gòu)象改變有關(guān):卵母細(xì)胞紡錘體和染色體構(gòu)象異常率與女性年齡存在明顯的相關(guān)性,這可能是引起高齡女性非整倍體率增高的重要原因之一;MAPK的表達(dá)降低可能是造成老齡卵母細(xì)胞紡錘體和染色體構(gòu)象異常率增高的原因。MTHFR C 677T、MTRRA66G基因多態(tài)性和Down syndrome發(fā)生相關(guān),TT、AG、GG基因型增加了Down綜合征的發(fā)生風(fēng)險,而CC、AA基因型是降低Down綜合征的保護(hù)性因素。
[Abstract]:Objective to investigate the mechanism of aneuploidy in the first meiotic division of oocyte as well as the causes of age, folate metabolism and aneuploidy of oocyte.
Methods of spectral karyotyping (spectral karyotyping SKY) karyotype detection of unfertilized oocytes of 23 chromosomes; detection of nuclear conformation of oocyte spindle and chromosome of mice and chromosome 16 time change under different culture immunofluorescence and fluorescence in situ hybridization; analysis of conformational differences between different age female oocytes immunofluorescence staining and chromosome differences; immunocytochemistry and confocal microscopy to detect the expression of oocyte mitogen activated protein kinase in mice of different ages MAPK; analysis of methylenetetrahydrofolate reductase PCR-RFLP (MTHFR) 677 position and methionine synthase reductase (MTRR) gene type 66 position.
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本文編號：1504700