發(fā)布時間：2018-02-10 03:43

  本文關鍵詞： 骨髓間充質(zhì)干細胞 心肌素 平滑肌細胞 轉(zhuǎn)化生長因子β3　出處：《天津科技大學》2010年碩士論文　論文類型：學位論文

【摘要】：間充質(zhì)干細胞(MSCs)作為組織工程中最具優(yōu)勢的種子細胞,具有強的自我更新能力和多向分化潛能。本論文以骨髓間充質(zhì)干細胞(BMMSCs)作為研究細胞分化信號轉(zhuǎn)導的對象,發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)錄因子心肌素(myocardin)在轉(zhuǎn)化生長因子β3(TGF-β3)誘導的骨髓間充質(zhì)干細胞向平滑肌細胞(SMCs)分化中具有重要作用,并且深入研究了TGF-β3和myocardin誘導骨髓間充質(zhì)干細胞向平滑肌細胞分化的分子機制。我們對誘導骨髓間充質(zhì)干細胞向平滑肌細胞的定向分化及其分子機制的研究,為臨床提供種子細胞治療血管損傷修復奠定了實驗基礎。 TGF-β3是一種多功能的生物活性調(diào)節(jié)因子,廣泛調(diào)控細胞增殖與分化等過程。使用TGF-p3處理骨髓間充質(zhì)干細胞,RT-PCR和免疫細胞化學結果顯示平滑肌細胞標志物,包括平滑肌肌漿球蛋白重鏈(SMMHC)x SM22α、α-平滑肌肌動蛋白(α-SMA),都顯著增高。這些結果說明TGF-β3可以誘導骨髓間充質(zhì)干細胞向平滑肌細胞分化。 Myocardin是血清反應因子(SRF)的輔助激活轉(zhuǎn)錄因子,它在平滑肌細胞分化中起著重要的作用。利用RT-PCR和Western blotting的方法檢測了轉(zhuǎn)錄因子myocardin在此分化過程中的表達情況,結果發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)錄因子myocardin的mRNA和蛋白水平上調(diào)。同時將myocardin轉(zhuǎn)染至骨髓間充質(zhì)干細胞中,RT-PCR結果顯示SMMHC、SM22α、 a-SMA都顯著增高,熒光素酶活性實驗證明在間充質(zhì)干細胞中1myocardin可以激活SM22a啟動子。進一步利用myocardin缺失轉(zhuǎn)錄激活域的真核表達質(zhì)粒myocardinATAD競爭性抑制內(nèi)源myocardin的功能,發(fā)現(xiàn)myocardin功能缺失后,TGF-p3不能誘導骨髓間充質(zhì)細胞分化。這些結果說明1myocardin可以誘導骨髓間充質(zhì)干細胞向平滑肌細胞分化,TGF-β3信號通路依賴或部分依賴于myocardin。 為深入研究TGF-β3和myocardin誘導的骨髓間充質(zhì)干細胞向平滑肌細胞分化的分子機制,利用RT-PCR方法檢測TGF-β3通路的下游信號分子Smad2/3的mRNA水平,結果Smad2/3的mRNA水平顯著升高,并且在TGF-β3刺激30分鐘時Smad2/3迅速地發(fā)生磷酸化。熒光素酶活性實驗進一步證明,Smad2能夠與myocardin協(xié)同增加SM22α的啟動子活性,而Smad3不具備這種能力。在缺失內(nèi)源myocardin功能的骨髓間充質(zhì)干細胞中,TGF-β3和其相關轉(zhuǎn)錄因子Smad2失去了對平滑肌分化標志物的上調(diào)功能。細胞周期抑制因子Rb、p16、 p21參與myocardin和TGF-β3誘導的骨髓間充質(zhì)干細胞向平滑肌細胞分化過程。
[Abstract]:Mesenchymal stem cells (MSCs), as the most advantageous seed cells in tissue engineering, have strong self-renewal ability and multi-differentiation potential. In this paper, bone marrow mesenchymal stem cells (BMMSCs) were used to study the signal transduction of cell differentiation. It was found that myocardinin plays an important role in the differentiation of bone marrow mesenchymal stem cells into smooth muscle cells induced by transforming growth factor 尾 3 (TGF- 尾 3). The molecular mechanism of differentiation of bone marrow mesenchymal stem cells into smooth muscle cells induced by TGF- 尾 3 and myocardin was studied. It lays an experimental foundation for the treatment of vascular injury by seed cells. TGF- 尾 3 is a multifunctional biological activity regulating factor, which widely regulates cell proliferation and differentiation. RT-PCR and immunocytochemistry results of TGF-p3 treatment of bone marrow mesenchymal stem cells show smooth muscle cell markers. These results indicated that TGF- 尾 3 could induce the differentiation of bone marrow mesenchymal stem cells into smooth muscle cells. Myocardin is an auxiliary activated transcription factor of serum response factor (Myocardin), which plays an important role in the differentiation of smooth muscle cells. The expression of myocardin in the process of differentiation was detected by RT-PCR and Western blotting. The results showed that the levels of mRNA and protein of transcription factor myocardin were up-regulated, and myocardin was transfected into bone marrow mesenchymal stem cells. The results of RT-PCR showed that both SM22 偽 and a-SMA of SMMHC-SM22 偽 and a-SMA were significantly increased. Luciferase activity assay showed that 1 myocardin could activate the SM22a promoter in mesenchymal stem cells. Furthermore, myocardinATAD, an eukaryotic expression plasmid with myocardin deletion transcriptional activation domain, could competitively inhibit the function of endogenous myocardin. It was found that TGF-p3 could not induce the differentiation of bone marrow mesenchymal cells after myocardin function loss. These results suggested that 1 myocardin could induce the differentiation of bone marrow mesenchymal stem cells into smooth muscle cells. TGF- 尾 3 signaling pathway was dependent or partly dependent on myocardinin. In order to study the molecular mechanism of the differentiation of bone marrow mesenchymal stem cells into smooth muscle cells induced by TGF- 尾 3 and myocardin, the mRNA level of downstream signal molecule Smad2/3 in TGF- 尾 3 pathway was detected by RT-PCR method. The mRNA level of Smad2/3 was significantly increased. Moreover, the phosphorylation of Smad2/3 occurred rapidly after 30 minutes of TGF- 尾 3 stimulation. Luciferase activity further demonstrated that Smad2 could increase the promoter activity of SM22 偽 in coordination with myocardin. TGF- 尾 3 and its related transcription factor Smad2 lost the up-regulation of smooth muscle differentiation markers in bone marrow mesenchymal stem cells lacking endogenous myocardin function. TGF- 尾 3 induced differentiation of bone marrow mesenchymal stem cells into smooth muscle cells.
【學位授予單位】：天津科技大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2010
【分類號】：R329

【相似文獻】

相關期刊論文 前10條

1 李有童;毛祖彝;;熱療聯(lián)合化療對鼠腫瘤組織和正常組織的作用[J];口腔醫(yī)學;1992年02期

2 侯士芳;廖興華;王楠;張同存;韓俊領;;Myocardin協(xié)同維甲酸受體調(diào)節(jié)骨髓間充質(zhì)干細胞向神經(jīng)細胞分化[J];生物技術通訊;2011年01期

3 孫璇;盧光t;;鋅指蛋白297B協(xié)同Myocardin調(diào)節(jié)平滑肌細胞的分化[J];中國動脈硬化雜志;2010年02期

4 駱莉莉;慕曉玲;;肝臟發(fā)育過程中相關分子調(diào)控作用[J];農(nóng)墾醫(yī)學;2008年04期

5 許麗輝;何強;;Myocardin在大鼠血管平滑肌細胞表型轉(zhuǎn)化中的作用機制[J];中國老年學雜志;2010年17期

6 許麗輝;何強;;SRF和Myocardin在血管平滑肌細胞表型轉(zhuǎn)化中的相互作用[J];中國老年學雜志;2010年22期

7 何惠華;黃磊;盧瑋;朱朋成;葛曉娜;杜惠揚;敖啟林;;西地那非抑制低氧肺血管內(nèi)皮向平滑肌樣細胞的轉(zhuǎn)分化及其機制[J];中國組織化學與細胞化學雜志;2007年04期

8 鄧黎;譚虎;梁志清;;Myocardin表達載體的構建[J];重慶醫(yī)學;2007年16期

9 陳雪;孟寒;許梅;王珊珊;黃冠;阮秋蓉;;低密度脂蛋白誘導骨髓間充質(zhì)干細胞向平滑肌樣細胞分化的作用[J];中國動脈硬化雜志;2009年08期

10 孟寒;阮秋蓉;瞿智玲;黃冠;余俊;;小鼠骨髓間充質(zhì)干細胞體外誘導向平滑肌樣細胞分化過程中myocardin的表達[J];中國動脈硬化雜志;2008年01期

相關會議論文 前10條

1 謝晶日;李明;;益氣養(yǎng)陰活血法對胃癌前病變大鼠TGF-β1的影響[A];第二十二屆全國中西醫(yī)結合消化系統(tǒng)疾病學術會議暨消化疾病診治進展學習班論文匯編[C];2010年

2 李豐衣;張琳;孫勁暉;田德祿;祝世功;劉霞;王慶寶;;調(diào)肝理脾方對酒精性肝纖維化大鼠轉(zhuǎn)化生長因子(TGF-β1)蛋白表達的影響[A];第十二屆中國科協(xié)年會22分會場——“中醫(yī)藥在重大公共衛(wèi)生事件中的地位和作用論壇”論文集[C];2010年

3 李豐衣;張琳;孫勁暉;田德祿;祝世功;劉霞;王慶寶;;調(diào)肝理脾方對酒精性肝纖維化鼠大轉(zhuǎn)化生長因子(TGF-β1)蛋白表達的影響[A];經(jīng)濟發(fā)展方式轉(zhuǎn)變與自主創(chuàng)新——第十二屆中國科學技術協(xié)會年會（第三卷）[C];2010年

4 許斌;;曲格列酮對TGF-β1誘導的腎小管上皮細胞合成纖維連接蛋白和Ⅰ型膠原纖維的影響[A];2010年江蘇省藥學大會暨第十屆江蘇省藥師周大會論文集[C];2010年

5 張昱;李琦;;中藥灌腸對慢性腎衰竭患者腎功能及血TGF-β_1的影響[A];中國中西醫(yī)結合學會養(yǎng)生學與康復醫(yī)學專業(yè)委員會委員會議暨第七次學術研討會論文集[C];2011年

6 尹禮烘;趙鳳達;梁建萍;周榮偉;章衛(wèi)華;;涼血化瘀法防治放射性肺損傷及對TGF-β_1表達的影響[A];江西省中西醫(yī)結合學會第九次活血化瘀學術研討會活血化瘀臨床應用新進展培訓班論文集[C];2011年

7 朱斌;朱彩鳳;林宜;朱曉玲;黃陳招;魯盈;;大黃素通過阻斷多通路抑制TGF-β1誘導的腎成纖維細胞分泌細胞外基質(zhì)[A];第十一屆全國中西醫(yī)結合腎臟病學術會議論文匯編[C];2010年

8 楊汝春;張華琴;朱曉玲;魯盈;;黃芪對TGF-β1刺激的足細胞骨架蛋白表達異常的干預作用[A];第十一屆全國中西醫(yī)結合腎臟病學術會議論文匯編[C];2010年

9 張繼東;馮利;劉春喜;王博;任敏;郭雪峰;;芩丹膠囊對老年自發(fā)性高血壓大鼠血管外膜重構以及TGF-β1表達的影響[A];第十次中國中西醫(yī)結合學會心血管病學術大會暨第五次江西省中西醫(yī)結合學會心血管病學術大會論文匯編[C];2010年

10 趙凱;屠文震;;抗硬化復方對硬皮小鼠皮膚TGF-β_1表達的影響[A];首屆中國中西醫(yī)結合風濕病西北學術會議暨培訓班論文匯編[C];2011年

相關重要報紙文章 前1條

1 上海香料研究所 朱立弘;化妝品用添加劑初乳精華素有待被認知[N];中國化工報;2001年

相關博士學位論文 前10條

1 崔趙麗;氣虛、陽虛體質(zhì)與慢性原發(fā)性腎小球疾病中醫(yī)證候及TGF-β相關性分析[D];北京中醫(yī)藥大學;2011年

2 呂偉;一.EphB4通過TGF-β信號通路抑制移植靜脈血管內(nèi)膜增生的機制研究 二.慢性下肢靜脈功能不全術后回顧性分析研究[D];山東大學;2012年

3 呂成昱;TGF-β3，TIMP-1聯(lián)合轉(zhuǎn)染兔骨髓間充質(zhì)干細胞復合藻酸鹽凝膠修復兔軟骨缺損[D];山東大學;2010年

4 孫紅玉;表皮樣干細胞瘤化的發(fā)生和TGF-β1信號通路的關系以及極性相關分子的變化[D];第二軍醫(yī)大學;2010年

5 杜進軍;皂莢提取物對肝癌細胞小鼠TGF-β/Smads信號系統(tǒng)調(diào)控的影響[D];湖北中醫(yī)藥大學;2010年

6 劉麗;TGFβ信號網(wǎng)絡基因遺傳變異與結直腸癌發(fā)生、發(fā)展風險的分子流行病學研究[D];華中科技大學;2011年

7 楊守國;胸主動脈夾層與動脈瘤TGF-β1的差異表達與彈力蛋白代謝在胸主動脈夾層發(fā)病機制中的作用[D];復旦大學;2011年

8 陳浮;鼻咽癌中Myocardin轉(zhuǎn)錄失活機制及其功能研究[D];復旦大學;2010年

9 陸燕;TGF-β1在TAO眼外肌纖維化中的作用及相關信號傳導通路研究[D];第二軍醫(yī)大學;2011年

10 沈娜;TGF-β1對乳腺癌細胞及乳腺癌干細胞特征作用的研究[D];華中科技大學;2012年

相關碩士學位論文 前10條

1 周臻;TGF-β3通過激活Myocardin誘導骨髓間充質(zhì)干細胞向平滑肌細胞分化[D];天津科技大學;2010年

2 范右飛;成人隱匿性自身免疫性糖尿病患者血清IL-10、TGF-β水平及其與胰島β細胞功能的關系[D];山東大學;2010年

3 曹碩;TGF-β1、血管緊張素Ⅱ、醛固酮與放射性肺損傷的關系[D];中國醫(yī)科大學;2010年

4 于小峰;強脈沖光對成纖維細胞分泌TGF-β1的影響及信號通路研究[D];中南大學;2010年

5 孟憲兵;家兔蛛網(wǎng)膜顆粒形態(tài)結構及蛛網(wǎng)膜下腔出血后蛛網(wǎng)膜顆粒TGF-β1表達的研究[D];河北醫(yī)科大學;2011年

6 張思慧;載TGF-β_1微球涂層多孔鈦對成骨細胞功能的影響[D];中南大學;2010年

7 袁小洪;重組腺相關病毒介導TGF-β_1基因修飾脂肪干細胞成軟骨細胞的研究[D];遵義醫(yī)學院;2010年

8 衛(wèi)琴;荷瘤小鼠髓系抑制性細胞比例和TGF-β_1表達水平關系的研究[D];山西醫(yī)科大學;2010年

9 李強;TGF-β1對大鼠脂肪干細胞體外軟骨形成能力影響的研究[D];中南大學;2010年

10 段燕;TGF-β1對IL-1β誘導人牙周膜成纖維細胞分泌HGF影響的研究[D];山西醫(yī)科大學;2011年

，

本文編號：1499576