本文關(guān)鍵詞： 剛地弓形蟲 排泄-分泌抗原 CD~(4+)CD~(25+)調(diào)節(jié)性T細(xì)胞 CD~(4+)T細(xì)胞 NK細(xì)胞 凋亡　出處：《南京醫(yī)科大學(xué)》2009年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：剛地弓形蟲(Toxoplasma gondii)是人畜共患細(xì)胞內(nèi)寄生原蟲。免疫功能正常機(jī)體感染弓形蟲,絕大多數(shù)為隱性感染,但孕婦、嬰幼兒和免疫抑制者感染后,則可能導(dǎo)致流產(chǎn)、畸胎或急性獲得性弓形蟲病,死亡率甚高,危害嚴(yán)重。本實(shí)驗(yàn)室前期研究發(fā)現(xiàn),弓形蟲RH株感染能夠引起孕鼠體內(nèi)CD~(4+)CD~(25+)調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(Treg)數(shù)量下降,凋亡率增加。同時(shí),越來越多的證據(jù)表明,CD~(4+)CD~(25+)調(diào)節(jié)性T細(xì)胞在懷孕免疫耐受狀態(tài)維持中起到尤為重要的作用,提示感染引起的CD~(4+)CD~(25+)調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的減少在弓形蟲感染致流產(chǎn)發(fā)生過程中可能起到重要作用。弓形蟲是一種細(xì)胞內(nèi)寄生原蟲,蟲體侵入宿主細(xì)胞后,在細(xì)胞內(nèi)大量繁殖,排泄分泌大量抗原性物質(zhì),即弓形蟲ESA(excreted-secreted antigens),參與引起宿主損傷和免疫反應(yīng)。然而目前為止有關(guān)這些蟲源性物質(zhì)對機(jī)體免疫細(xì)胞的影響,研究還不深入。目前在小鼠模型上的研究發(fā)現(xiàn),ESA同樣可以導(dǎo)致孕鼠流產(chǎn),引起體內(nèi)CD~(4+)CD~(25+)調(diào)節(jié)性T細(xì)胞數(shù)量下降。這些研究表明,ESA對機(jī)體所產(chǎn)生的影響與弓形蟲感染所致的影響相似。那么弓形蟲ESA所致的孕鼠流產(chǎn)是否也和體內(nèi)CD~(4+)CD~(25+)調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的減少有關(guān)?ESA對正常機(jī)體的免疫細(xì)胞有何影響?結(jié)合上述資料和問題,本研究旨在探討ESA致孕鼠流產(chǎn)過程中CD~(4+)CD~(25+)調(diào)節(jié)性T細(xì)胞所發(fā)揮的作用,觀察ESA對正常小鼠體內(nèi)CD~(4+)T細(xì)胞、CD8+T細(xì)胞、NK細(xì)胞的影響,并初步探討其變化機(jī)制,為今后弓形蟲病的免疫預(yù)防和干預(yù)提供理論基礎(chǔ)。 我們首先建立剛地弓形蟲感染孕鼠模型和ESA處理孕鼠模型,通過尾靜脈過繼CD~(4+)CD~(25+)調(diào)節(jié)性T細(xì)胞,觀察各組孕鼠流產(chǎn)率的變化。之后,建立ESA處理正常小鼠模型,流式細(xì)胞術(shù)檢測小鼠脾臟中CD~(4+)T細(xì)胞、CD8+T細(xì)胞、NK細(xì)胞數(shù)量比例變化。采用3H-TdR摻入細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)檢測不同處理組脾臟CD~(4+)CD~(25+)調(diào)節(jié)性T細(xì)胞抑制功能;同時(shí)采用ELISA檢測正常CD~(4+)CD25-T細(xì)胞與不同處理組脾臟CD~(4+)CD~(25+)調(diào)節(jié)性T細(xì)胞共培養(yǎng)后其細(xì)胞因子(IFN-γ、IL-4)的分泌水平;采用LDH法檢測NK細(xì)胞的殺傷功能變化;然后應(yīng)用AnnexinV和7-AAD聯(lián)合標(biāo)記染色法檢測小鼠脾臟中CD~(4+)T細(xì)胞、CD8+T細(xì)胞、NK細(xì)胞凋亡率變化;采用RT-PCR方法檢測Fas和caspase3 mRNA在脾臟CD~(4+)T細(xì)胞中表達(dá)水平。最后采用AnnexinV和7-AAD聯(lián)合標(biāo)記染色法檢測ESA體外在不同培養(yǎng)體系下對CD~(4+)T細(xì)胞的凋亡率的變化。 本研究獲得如下主要結(jié)果: 1.體內(nèi)過繼正常孕鼠脾臟CD~(4+)CD~(25+)調(diào)節(jié)性T細(xì)胞能使ESA所致孕鼠的流產(chǎn)率下降我們發(fā)現(xiàn),與正常孕鼠相比,ESA處理孕鼠流產(chǎn)發(fā)生率顯著增加,ESA處理后6天(孕14天),所有胚胎和胎盤均發(fā)生出血、壞死及吸收,流產(chǎn)率為100%,而過繼孕鼠CD~(4+)CD~(25+)調(diào)節(jié)性T細(xì)胞后,部分胚胎存活,流產(chǎn)率下降為60%。然而,過繼孕鼠CD~(4+)CD~(25+)調(diào)節(jié)性T細(xì)胞卻不能有效降低弓形蟲感染所致的流產(chǎn)。 2. ESA處理小鼠脾臟CD~(4+)T細(xì)胞數(shù)量減少,NK細(xì)胞數(shù)量增加流式細(xì)胞儀檢測結(jié)果顯示,不同劑量ESA處理小鼠,脾臟CD~(4+)CD~(25+)Foxp3+T細(xì)胞占脾細(xì)胞的比例均下降,尤其以注射100μl ESA下降最明顯,因此,接下來我們采用100μl ESA注射小鼠建立小鼠模型,觀察各細(xì)胞亞群變化。流式結(jié)果發(fā)現(xiàn),與對照組相比,CD~(4+)T細(xì)胞比例在第2天開始下降,但差別沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;在注射后第4天,調(diào)節(jié)性T細(xì)胞比例明顯降低;到了注射后第6天,比例進(jìn)一步降低,顯著低于同期對照組水平。與CD~(4+)T細(xì)胞的變化相一致,CD~(4+)CD~(25+)Foxp3+T細(xì)胞占脾細(xì)胞的比例也隨著ESA處理時(shí)間呈下降趨勢。ESA各處理組小鼠脾臟CD8+T細(xì)胞占脾細(xì)胞的比例雖有下降趨勢,但與對照組相比差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。然而,ESA處理小鼠脾臟NK占脾細(xì)胞的比例在ESA處理后第4天和第6天則明顯升高。 3. ESA處理小鼠脾臟CD~(4+)CD~(25+)調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的抑制功能減弱3H-TDR摻入法細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn),在抗CD3的刺激下,ESA處理2天組小鼠脾臟CD~(4+)CD~(25+)T細(xì)胞抑制CD~(4+)CD25-T細(xì)胞增殖的能力較正常對照組明顯下降,第4天下降更明顯,第6天組則與第4天組持平。ELISA結(jié)果顯示,ESA注射組CD~(4+)CD~(25+)調(diào)節(jié)性T細(xì)胞與正常CD~(4+)CD25-T細(xì)胞共培養(yǎng)后IFN-γ分泌水平較對照組升高,并隨著ESA注射時(shí)間延長,共培養(yǎng)后IFN-γ分泌水平不斷升高,顯著高于對照組水平。由此顯示,在實(shí)驗(yàn)觀察期內(nèi),CD~(4+)CD~(25+)調(diào)節(jié)性T細(xì)胞隨著ESA注射天數(shù)的延長,抑制能力不斷下降。 4. ESA處理小鼠脾臟NK細(xì)胞殺傷功能增強(qiáng),NK細(xì)胞體外與ESA共培養(yǎng)后,其殺傷功能也增強(qiáng)LDH法檢測結(jié)果顯示,ESA處理組小鼠脾臟NK細(xì)胞殺傷靶細(xì)胞YAC-1的功能在處理第2天開始增強(qiáng),第4天繼續(xù)增強(qiáng),到第6天有所下降,但仍高于對照組;體外NK細(xì)胞與ESA共培養(yǎng),其殺傷靶細(xì)胞YAC-1的功能也增強(qiáng)。 5. ESA處理小鼠脾臟CD~(4+)T細(xì)胞發(fā)生凋亡,CD~(4+)T細(xì)胞中FAS和caspase3 mRNA表達(dá)量增加流式細(xì)胞儀檢測結(jié)果顯示,ESA注射小鼠第2天組脾臟CD~(4+)CD~(25+)T細(xì)胞的凋亡率與對照組相比沒有明顯升高,到第4天凋亡率開始明顯升高,而第6天繼續(xù)上升;CD~(4+)CD25-T細(xì)胞的凋亡率也隨著ESA注射時(shí)間延長呈不斷上升趨勢。ESA處理小鼠脾臟NK細(xì)胞的凋亡率與對照組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。RT-PCR結(jié)果顯示,脾臟CD~(4+)T細(xì)胞中Fas mRNA表達(dá)水平,在ESA處理后第2天和第4天都有上升的趨勢,但差別沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,到處理后第6天,其表達(dá)水平與對照組比明顯升高;脾臟CD~(4+)T細(xì)胞中caspase3 mRNA表達(dá)水平在ESA處理后第2天開始高于對照組,但差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,到第4天繼續(xù)升高,至處理后第6天,顯著高于對照組水平。 6. ESA體外與混合脾淋巴細(xì)胞共培養(yǎng),其CD~(4+)T細(xì)胞凋亡率增加; ESA體外單獨(dú)與CD~(4+)T細(xì)胞共培養(yǎng),不能引起CD~(4+)T細(xì)胞凋亡流式細(xì)胞儀檢測結(jié)果發(fā)現(xiàn),當(dāng)弓形蟲ESA與脾淋巴細(xì)胞共培養(yǎng)時(shí),其中CD~(4+)T細(xì)胞的凋亡率與正常對照組相比增加,而當(dāng)弓形蟲ESA單獨(dú)與CD~(4+)T細(xì)胞共培養(yǎng)時(shí),凋亡率與對照組比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。 本實(shí)驗(yàn)采用尾靜脈過繼CD~(4+)CD~(25+)調(diào)節(jié)性T細(xì)胞與ESA處理鼠體內(nèi),發(fā)現(xiàn)ESA處理孕鼠在過繼Treg后其流產(chǎn)率顯著降低,以此為研究線索,建立ESA處理小鼠模型研究ESA體內(nèi)對CD~(4+)T細(xì)胞、CD8+T細(xì)胞、NK細(xì)胞的影響,發(fā)現(xiàn)ESA處理小鼠脾臟CD~(4+)T細(xì)胞數(shù)量減少,CD~(4+)T細(xì)胞亞群中的CD~(4+)CD~(25+)調(diào)節(jié)性T細(xì)胞功能減弱,而CD~(4+)T細(xì)胞的減少可能與Fas、caspase3介導(dǎo)的相關(guān)凋亡通路激活有關(guān)。與之相反,ESA處理小鼠脾臟NK細(xì)胞數(shù)量增加,功能增強(qiáng)。進(jìn)一步體外實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),ESA只有與混合脾臟淋巴細(xì)胞共培養(yǎng)時(shí)才能引起CD~(4+)T細(xì)胞的凋亡,其單獨(dú)與CD~(4+)T細(xì)胞培養(yǎng)并不能引起CD~(4+)T細(xì)胞的凋亡。以上研究結(jié)果提示,CD~(4+)CD~(25+)調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的減少在ESA致孕鼠流產(chǎn)過程中起到重要作用;ESA并不是直接的對CD~(4+)T細(xì)胞(包括CD~(4+)CD~(25+)調(diào)節(jié)性T細(xì)胞)產(chǎn)生毒性作用,而是可能通過其他途徑間接誘導(dǎo)CD~(4+)T細(xì)胞的凋亡;ESA具有增強(qiáng)NK細(xì)胞功能的作用。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：南京醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2009
【分類號(hào)】：R392

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 ;人類腫瘤病毒利用外來體進(jìn)行細(xì)胞間交流[J];微生物與感染;2011年02期

2 徐波;張瑛;;2型糖尿病一級(jí)親屬中胰島β細(xì)胞功能評價(jià)[J];遼寧醫(yī)學(xué)雜志;2011年03期

3 陳文吟;易學(xué)瑞;袁有成;蘇蔚;張峰;孔祥平;;Bay41-4109抗乙型肝炎病毒的體外實(shí)驗(yàn)研究[J];華南國防醫(yī)學(xué)雜志;2011年04期

4 趙莎莎;陳兆祥;藺新英;趙妍;姚蘋;郭冬梅;;有機(jī)碘和無機(jī)碘對人甲狀腺細(xì)胞分泌功能影響的體外實(shí)驗(yàn)研究[J];環(huán)境與健康雜志;2011年04期

5 孫逸輝;;瘦素可調(diào)節(jié)食欲[J];心血管病防治知識(shí);2007年11期

6 江錦琦;;從空腹飲酒引起低血糖說起[J];食品與健康;2001年12期

7 石永平;王金達(dá);王倩;于海濤;黃正明;汪海;;靈芝和蟲草多糖對酒精性肝損傷和2.2.15細(xì)胞分泌乙型肝炎表面抗原和e抗原的影響[J];營養(yǎng)學(xué)報(bào);2011年04期

8 李青;路麗明;周光炎;;IL-9的研究進(jìn)展[J];中國免疫學(xué)雜志;2011年09期

9 李媛;王久君;高珊;劉娜;郝友華;丁紅暉;楊東亮;趙西平;;HBV感染者自然殺傷細(xì)胞活性分析[J];肝臟;2011年04期

10 芮澤;張寧;胡志毅;殷國勇;;持續(xù)性壓力促進(jìn)成骨細(xì)胞分泌VEGF的機(jī)制[J];南京醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);2011年07期

相關(guān)會(huì)議論文 前10條

1 陳明;夏仁云;;二磷酸鹽對關(guān)節(jié)磨屑刺激單核細(xì)胞分泌IL-1β的抑制作用[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)疼痛學(xué)分會(huì)第七屆年會(huì)論文摘要集[C];2007年

2 譚映霞;俞康;胡永仙;章圣輝;韓義香;高申孟;吳建波;;基因修飾CD20-scFv-IgGFc-CD28-ζ T細(xì)胞靶向殺傷Raji細(xì)胞凋亡的研究[A];全國臨床免疫檢驗(yàn)研討會(huì)暨第六屆全國臨床免疫學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2009年

3 李海英;曹振環(huán);田亞坤;彭巧麗;陳新月;吳昊;;HIV-1/AIDS患者Gag特異性T細(xì)胞分泌細(xì)胞因子功能、增殖功能的特征研究[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第四次全國艾滋病、病毒性丙型肝炎暨全國熱帶病學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2009年

4 鄭峻松;彭代智;黃文華;羅高興;黃輝;劉敬;周新;;細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)調(diào)控劑對嚴(yán)重?zé)齻笮∈骉淋巴細(xì)胞分泌功能的影響及機(jī)制研究[A];第八屆西南五省一市燒傷整形學(xué)術(shù)會(huì)議暨貴州省醫(yī)學(xué)會(huì)燒傷整形分會(huì)2010年學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2010年

5 周專;;細(xì)胞內(nèi)的Ca~(2+)平衡和細(xì)胞分泌[A];中國生理學(xué)會(huì)2002年生理學(xué)新進(jìn)展研討會(huì)和計(jì)算機(jī)實(shí)驗(yàn)信號(hào)處理技術(shù)講習(xí)班資料匯編[C];2002年

6 馮林;鄭峻松;刁慶春;;MRL/lps小鼠中CD4~+CD25~+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞對B細(xì)胞影響的研究[A];中華中醫(yī)藥學(xué)會(huì)皮膚科分會(huì)第七次學(xué)術(shù)年會(huì)、2010年重慶四川中西醫(yī)結(jié)合皮膚性病學(xué)術(shù)年會(huì)、全國中西醫(yī)結(jié)合診療皮膚性病新進(jìn)展新技術(shù)學(xué)習(xí)班論文匯編[C];2010年

7 黃怡;黃琴;李衛(wèi)芬;余東游;周緒霞;;鼠李糖乳桿菌對Caco-2細(xì)胞抗氧化功能和細(xì)胞因子分泌的影響[A];第四屆第十次全國學(xué)術(shù)研討會(huì)暨動(dòng)物微生態(tài)企業(yè)發(fā)展戰(zhàn)略論壇論文集（上冊）[C];2010年

8 單保恩;楊興肖;馬鳴;劉麗華;艾軍;趙連梅;張小芳;;大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞對T細(xì)胞免疫活性的影響[A];2010’全國腫瘤分子標(biāo)志及應(yīng)用學(xué)術(shù)研討會(huì)暨第五屆中國中青年腫瘤專家論壇論文匯編[C];2010年

9 劉景華;周凡;竇立萍;王莉莉;王立新;于力;;α-GalCer通過使供鼠T細(xì)胞向Th2極化而減輕急性移植物抗宿主病[A];第13屆全國實(shí)驗(yàn)血液學(xué)會(huì)議論文摘要[C];2011年

10 王薇;葉林柏;吳正輝;佘應(yīng)龍;郜金榮;;SARS-CoV Spike蛋白刺激小鼠巨噬細(xì)胞分泌炎癥相關(guān)因子的研究[A];湖北省暨武漢市生物化學(xué)與分子生物學(xué)學(xué)會(huì)第八屆第十七次學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2007年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前10條

1 章必成;肺部患癌 肺外報(bào)警[N];健康報(bào);2006年

2 章必成;肺部患癌 肺外報(bào)警[N];農(nóng)村醫(yī)藥報(bào)（漢）;2006年

3 劉晴 施建蓉 楊穎;上海探明二仙湯作用機(jī)制[N];中國醫(yī)藥報(bào);2005年

4 中國核科技信息與經(jīng)濟(jì)研究院 張萌　汪永平;歐洲原子能共同體與歐盟核能發(fā)展(二)[N];中國能源報(bào);2011年

5 邵成明;春天護(hù)膚“六要”[N];中國中醫(yī)藥報(bào);2006年

6 蔡天智;東南非共同市場（COMESA）簡介[N];中國中醫(yī)藥報(bào);2002年

7 唐風(fēng);微型陀螺儀將用于癌癥治療[N];中國醫(yī)藥報(bào);2006年

8 李瑞星;八種人不宜飲茶[N];中國消費(fèi)者報(bào);2006年

9 趙立巍;月經(jīng)是如何來潮的[N];醫(yī)藥養(yǎng)生保健報(bào);2007年

10 王振坤;人體的腸道防線[N];家庭醫(yī)生報(bào);2006年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 奚煒煒;kit基因和CD4~+細(xì)胞在新生血管形成中的作用[D];浙江大學(xué);2010年

2 李姝;OTUB1和OTUB2對細(xì)胞抗病毒信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的調(diào)控機(jī)制[D];武漢大學(xué);2010年

3 王紅;α-galactosylceramide活化NKT細(xì)胞在宿主抗衣原體生殖道感染中作用的研究[D];山東大學(xué);2012年

4 白春艷;AD7c-NTP在AD診斷中的臨床及實(shí)驗(yàn)研究[D];吉林大學(xué);2010年

5 宋銀宏;腫瘤肽特異性的同種CD4~+ T細(xì)胞的誘導(dǎo)及其對荷瘤裸鼠抗瘤作用的研究[D];華中科技大學(xué);2010年

6 劉芳芳;SPR傳感檢測細(xì)胞表面分子相互作用的方法研究[D];清華大學(xué);2010年

7 宋銀宏;腫瘤肽特異性的同種CD4~+T細(xì)胞的誘導(dǎo)及其對荷瘤裸鼠抗瘤作用的研究[D];華中科技大學(xué);2010年

8 姚韻靚;Qa-1限制性CD8調(diào)節(jié)性T細(xì)胞對小鼠炎癥性腸病的治療及其機(jī)制研究[D];浙江大學(xué);2012年

9 王澤宋;家蠶30K基因?qū)HO細(xì)胞抗凋亡和促進(jìn)目的產(chǎn)物表達(dá)的作用及其機(jī)制[D];華東理工大學(xué);2012年

10 項(xiàng)靖楠;棕櫚酸對βTC6細(xì)胞PANDER表達(dá)的影響及Exendin-4的保護(hù)作用[D];福建醫(yī)科大學(xué);2012年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 章黎;弓形蟲排泄—分泌抗原（ESA）對小鼠部分免疫細(xì)胞亞群的影響[D];南京醫(yī)科大學(xué);2009年

2 鄒林林;缺氧對人近曲腎小管上皮細(xì)胞表達(dá)和分泌renalase蛋白的影響[D];南京醫(yī)科大學(xué);2010年

3 張朋飛;羧胺三唑在肌萎縮脊髓側(cè)索硬化癥中的抗炎作用研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2011年

4 胡靜平;抗人B7-2單鏈抗體基因在Tn5細(xì)胞、家蠶及哺乳動(dòng)物細(xì)胞中的表達(dá)研究[D];蘇州大學(xué);2010年

5 史曉佾;呼吸道合胞病毒感染巨噬細(xì)胞活化Toll樣受體3、Toll樣受體7介導(dǎo)的抗病毒作用研究[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2010年

6 沈濂;Fcα/μR介導(dǎo)補(bǔ)體對人腎小球系膜細(xì)胞的殺傷[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2010年

7 湯龍;調(diào)節(jié)性γδT細(xì)胞的體外誘導(dǎo)及體外擴(kuò)增的γδT細(xì)胞趨化機(jī)理的初步研究[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2010年

8 赫建帥;CD4~+CD25~+調(diào)節(jié)T細(xì)胞、CD40~+細(xì)胞和CD40L~+T細(xì)胞在肝移植受者免疫調(diào)控中的作用[D];青島大學(xué);2010年

9 閻娟娟;TLR3及其相關(guān)細(xì)胞因子在Bewo細(xì)胞抗HBV感染中的作用[D];山西醫(yī)科大學(xué);2010年

10 馬敬偉;B7-H1/PD-1在人結(jié)腸癌中的表達(dá)及其與調(diào)節(jié)性T細(xì)胞關(guān)系的研究[D];華中科技大學(xué);2011年

，

本文編號(hào)：1498503