發(fā)布時間：2018-02-09 09:33

  本文關(guān)鍵詞： 骨髓基質(zhì)細(xì)胞 衰老 氧化應(yīng)激　出處：《中國組織化學(xué)與細(xì)胞化學(xué)雜志》2015年06期 　論文類型：期刊論文

【摘要】：目的建立體外骨髓基質(zhì)細(xì)胞(bone marrow stromal cells,BMSSCs)衰老模型,分析衰老BMSCs生物學(xué)特性,為進(jìn)一步研究衰老BMCs對造血細(xì)胞的影響奠定實(shí)驗基礎(chǔ)。方法雄性健康SD大鼠BMSCs全骨髓貼壁法體外培養(yǎng),實(shí)驗分為對照組和衰老模型組。對照組為常規(guī)培養(yǎng)48h;衰老模型組為常規(guī)培養(yǎng)基內(nèi)加入D-半乳糖。CCK-8法測定BMSCs增殖能力;流式細(xì)胞術(shù)分析細(xì)胞周期;衰老特異性β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色觀察衰老BMSCs百分率;酶學(xué)法檢測BMSCs內(nèi)過氧化物丙二醛(MDA)含量和總超氧化物歧化酶(SOD)活性,DCFH-DA流式熒光檢測BMSCs活性氧簇(ROS)水平;Western Blotting檢測BMSCs衰老相關(guān)信號蛋白P16、P21、P53的水平;ELISA檢測BMSCs培養(yǎng)上清液中IL-1β、GM-CSF、SCF的含量。結(jié)果與對照組相比,衰老模型組BMSCs增殖能力顯著下降;處于G1期的BMSCs比例增高、S期細(xì)胞比例降低,細(xì)胞阻滯于G1期;BMSCs SA-β-Gal染色陽性率顯著上升;胞內(nèi)ROS、MDA含量上升,SOD含量下降;P16、P21、P53水平明顯上調(diào);BMSCs培養(yǎng)上清液中IL-1β、GM-CSF、SCF含量明顯下降。結(jié)論 D-半乳糖誘導(dǎo)骨髓基質(zhì)細(xì)胞衰老可能與氧化損傷激活衰老相關(guān)信號通路有關(guān),衰老骨髓基質(zhì)細(xì)胞分泌活性造血生長因子減少。
[Abstract]:Objective to establish bone marrow stromal cells in vitro (bone marrow stromal cells, BMSSCs) aging model, analysis of biological characteristics of aging BMSCs, which laid a foundation for further study of aging effect of BMCs on hematopoietic cells. Methods BMSCs male healthy SD rats by whole bone marrow adherent method in vitro culture, the experiment was divided into control group and aging model control group. Group of cultured 48h; aging model group for the determination of the proliferation ability of conventional BMSCs medium with D- galactose.CCK-8 method; cell cycle analysis by flow cytometry; senescence specific beta galactosidase (SA- beta -Gal) staining was observed in senescent BMSCs percentage; enzymatic method in detection of BMSCs malondialdehyde (MDA) content and total superoxide dismutase (SOD) activity, DCFH-DA, flow cytometry and fluorescence detection of BMSCs reactive oxygen species (ROS) level; Western Blotting detection of BMSCs senescence related signal protein P16, P21, P53; ELISA BMSC S in supernatant of IL-1 beta, GM-CSF, SCF respectively. Results compared with the control group, aging model group BMSCs proliferation decreased significantly; at the time of G1 BMSCs ratio increased, the proportion of cells in S phase decreased, cells in G1 phase increased significantly; the positive rate of BMSCs SA- beta -Gal staining; intracellular ROS, MDA content increased, SOD content decreased; P16, P21, P53 level was significantly increased; BMSCs in supernatant of IL-1 beta, GM-CSF, SCF content decreased significantly. Conclusion D- galactose induced aging and oxidative damage of bone marrow stromal cells may activate the aging related signaling pathways related to aging of bone marrow stromal cells secreting hematopoietic growth factor reduced.

【作者單位】： 重慶醫(yī)科大學(xué)干細(xì)胞與組織工程研究室;重慶醫(yī)科大學(xué)組織胚胎學(xué)教研室;
【基金】：國家自然科學(xué)基金資助項目(81173398) 重慶市科委基礎(chǔ)與前沿研究項目(cstc2014jcyj A10001)
【分類號】：R329.2

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本文編號：1497621