發(fā)布時(shí)間：2018-02-09 04:44

  本文關(guān)鍵詞： 蟲(chóng)媒病毒 山西省 甘肅省 江西省 版納病毒 遼寧病毒 淡色庫(kù)蚊濃核病毒 乙腦病毒 分子特征 種系發(fā)生　出處：《中國(guó)疾病預(yù)防控制中心》2009年碩士論文　論文類(lèi)型：學(xué)位論文

【摘要】： 蟲(chóng)媒病毒是指通過(guò)吸血節(jié)肢動(dòng)物叮咬敏感的脊椎動(dòng)物而傳播疾病的一類(lèi)病毒,目前國(guó)際上已經(jīng)發(fā)現(xiàn)500余種蟲(chóng)媒病毒,其中有100多種與人畜疾病關(guān)系密切,感染后可表現(xiàn)為發(fā)熱、出疹、關(guān)節(jié)炎、出血和腦膜腦炎,嚴(yán)重的可以引起死亡。許多新發(fā)傳染病如西尼羅熱和裂谷熱也都屬于蟲(chóng)媒病毒病。因此,蟲(chóng)媒病毒及蟲(chóng)媒病毒病已經(jīng)成為國(guó)際社會(huì)關(guān)注的熱點(diǎn)公共衛(wèi)生問(wèn)題。 自20世紀(jì)50年代以來(lái)已經(jīng)證實(shí)4種蟲(chóng)媒病毒及相關(guān)疾病在我國(guó)存在與流行,即乙型腦炎病毒、森林腦炎或稱(chēng)春夏季腦炎病毒、新疆出血熱病毒和登革熱病毒1～4血清型。我國(guó)幅原遼闊,媒介昆蟲(chóng)眾多,我國(guó)的蟲(chóng)媒病毒肯定遠(yuǎn)遠(yuǎn)不止目前已知的幾種,但是缺乏相應(yīng)的背景調(diào)查。本研究于2006～2008年對(duì)我國(guó)山西、甘肅和江西三省開(kāi)展蟲(chóng)媒病毒調(diào)查,在7～8月蚊蟲(chóng)高發(fā)季節(jié)采集蚊蟲(chóng)標(biāo)本,通過(guò)組織培養(yǎng)方法分離病毒,對(duì)分離到的病毒采用血清學(xué)和分子生物學(xué)等方法進(jìn)行鑒定,以明確當(dāng)?shù)卮嬖谙x(chóng)媒病毒的種類(lèi)及分布特點(diǎn)。本研究在完善我國(guó)蟲(chóng)媒病毒背景資料,并為蟲(chóng)媒病毒病的預(yù)防和控制提供病原學(xué)依據(jù)等方面都具有重要的流行病學(xué)意義。 1.山西省蟲(chóng)媒病毒分離鑒定 2006～2007年夏季在山西省運(yùn)城市、臨汾市、陽(yáng)泉市和忻州市的七個(gè)縣區(qū)采集4屬7種共17860只蚊蟲(chóng)標(biāo)本,包括2種庫(kù)蚊、3種伊蚊、1種按蚊和1種阿蚊。將蚊蟲(chóng)標(biāo)本分為144批進(jìn)行研磨處理,通過(guò)組織細(xì)胞培養(yǎng)法得到15株陽(yáng)性分離物。血清學(xué)鑒定結(jié)果顯示,有8株分離物僅能與版納病毒特異性免疫腹水發(fā)生反應(yīng);有2株分離物除了能和版納病毒特異性免疫腹水發(fā)生反應(yīng)外,還能夠與遼寧病毒特異性免疫腹水發(fā)生反應(yīng);其余5株分離物與常見(jiàn)的蟲(chóng)媒病毒抗體發(fā)生均不發(fā)生反應(yīng)。分子生物學(xué)鑒定結(jié)果進(jìn)一步證實(shí)15株陽(yáng)性分離物中有10株版納病毒(Bannavires,BAV),2株遼寧病毒(Liaoning virus,LNV),3株淡色庫(kù)蚊濃核病毒(Culexpipiens pallens densovirus,CppDNV)及2株有待進(jìn)一步的鑒定的病毒分離物。10株BAV中有6株分離自淡色庫(kù)蚊,有1株分離自背點(diǎn)伊蚊,其余的3株分離自混合蚊種。2株LNV分別分離自淡色庫(kù)蚊和背點(diǎn)伊蚊。3株CppDNV中有2株分離自淡色庫(kù)蚊,有1株分離自騷擾阿蚊。 新分離病毒分子生物學(xué)特征分析顯示,10株BAV之間第12片段編碼區(qū)序列高度同源,核苷酸同源性為98.7%～100%,氨基酸同源性為98.1%～100%;與版納病毒標(biāo)準(zhǔn)株(BANNA)相比,第12片段核苷酸同源性在90.5%～91.2%之間,氨基酸同源性在93.2%～94.2%之間。系統(tǒng)進(jìn)化分析提示山西省分離的10株病毒位于獨(dú)立的進(jìn)化分支中,顯示出明顯的地域性特點(diǎn)。2株LNV之間第10片段部分核苷酸同源性為100%,與遼寧病毒標(biāo)準(zhǔn)株(LNV-NE97-31)同源性最低,僅為76.7%。系統(tǒng)進(jìn)化分析顯示除LNV-NE97-31外,中國(guó)其他地區(qū)的分離株均位于同一個(gè)進(jìn)化分支中,山西分離株和新疆分離株第10片段進(jìn)化都相對(duì)獨(dú)立,表現(xiàn)出了LNV進(jìn)化過(guò)程中的地域性。對(duì)CppDNV非結(jié)構(gòu)蛋白NS1和NS2的部分核苷酸序列分析顯示,3株山西省新分離株的同源性為100%;與我國(guó)其他省市的分離株同源性很高,在99.9%～100%之間。系統(tǒng)進(jìn)化分析提示所有中國(guó)分離株均位于一個(gè)相對(duì)獨(dú)立的進(jìn)化分支中,并且與AaeDNV的進(jìn)化關(guān)系較近。 本研究分離到的BAV、LNV和CppDNV病毒均為山西省首次報(bào)道。 2.甘肅省蟲(chóng)媒病毒分離鑒定 2008年7～8月間在甘肅省張掖市、酒泉市、嘉峪關(guān)市、白銀市和平?jīng)鍪形鍌�(gè)標(biāo)本采集點(diǎn)共采集13839只蚊蟲(chóng)標(biāo)本,蚊種包括庫(kù)蚊、伊蚊和按蚊3屬。將蚊蟲(chóng)標(biāo)本分為280批進(jìn)行研磨處理,利用組織培養(yǎng)方法得到6株陽(yáng)性分離物。血清學(xué)鑒定結(jié)果顯示6株分離物均能夠與乙腦病毒特異性抗體發(fā)生反應(yīng),分子生物學(xué)鑒定結(jié)果進(jìn)一步證實(shí)6株病毒均為乙腦病毒(Japanese Encephalitis Virus,JEV),所有毒株均分離自庫(kù)蚊標(biāo)本。 分子生物學(xué)特征分析顯示,6株JEV均為基因Ⅰ型乙腦病毒。6株JEV新分離株之間E基因序列同源性很高,核苷酸同源性為98.1%～99.9%,氨基酸同源性為99.6%～100%;與疫苗株SA14-14-2相比,E基因核苷酸同源性為87.5%～87.9%,氨基酸同源性為96.8～97.2%。新分離株與疫苗株在E基因區(qū)段存在11處共同氨基酸位點(diǎn)差異,但這些位點(diǎn)均不處于決定抗原性的關(guān)鍵氨基酸位點(diǎn)。系統(tǒng)進(jìn)化分析顯示2008年甘肅JEV新分離株與2004年四川分離株和2005年上海分離株進(jìn)化關(guān)系較近。 甘肅省既往蟲(chóng)媒病毒調(diào)查僅局限在隴南地區(qū),西北部地區(qū)從未涉及。本研究首次在甘肅省東部白銀市和西北部地區(qū)張掖市、酒泉市和嘉峪關(guān)市開(kāi)展蟲(chóng)媒病毒調(diào)查,并在白銀市分離到6株基因Ⅰ型乙腦病毒,這是在該地區(qū)首次分離到乙腦病毒,并提示基因Ⅰ型乙腦病毒已經(jīng)傳播到我國(guó)西北內(nèi)陸地區(qū)。 3.江西省蟲(chóng)媒病毒分離鑒定 2008年7～8月間在江西省吉安市、贛州市、宜春市、撫州市和上饒市五個(gè)地區(qū)共采集11916只蚊蟲(chóng)標(biāo)本,隸屬于3屬3種,包括三帶喙庫(kù)蚊、中華按蚊和騷擾阿蚊。將蚊蟲(chóng)標(biāo)本分為240批次進(jìn)行研磨處理,通過(guò)組織培養(yǎng)法得到14株陽(yáng)性分離物。14株陽(yáng)性分離物均只能夠引起B(yǎng)HK-21細(xì)胞產(chǎn)生病變,而對(duì)C6/36細(xì)胞無(wú)致病變效應(yīng)。通過(guò)血清學(xué)和分子生物學(xué)初步鑒定,14株陽(yáng)性分離物基本可以排除甲病毒、黃病毒、布尼亞病毒的可能,也可以排除dsRNA病毒的可能,進(jìn)一步的鑒定工作及其與疾病關(guān)系的研究正在進(jìn)行中。 在蚊蟲(chóng)標(biāo)本采集點(diǎn)當(dāng)?shù)乜h醫(yī)院采集331份發(fā)熱病人血清標(biāo)本,使用乙腦IgM抗體ELISA試劑盒檢測(cè)血清標(biāo)本中的乙腦IgM抗體,共檢測(cè)到4份陽(yáng)性標(biāo)本,其他引起腦炎與發(fā)熱病原體感染的研究正在進(jìn)行中。 本課題的意義 本研究于2006～2008年在我國(guó)山西、甘肅和江西三省開(kāi)展蟲(chóng)媒病毒調(diào)查,共采集43615只蚊蟲(chóng)標(biāo)本,隸屬于4屬7種,包括2種庫(kù)蚊、3種伊蚊、1種按蚊和1種阿蚊。所有標(biāo)本分為664批進(jìn)行研磨處理,通過(guò)組織培養(yǎng)技術(shù)共分離到21株病毒分離物,經(jīng)血清學(xué)和分子生物學(xué)鑒定,病毒隸屬于3科4種,包括呼腸孤病毒科Seadornavirus屬BAV病毒(10株)及LNV病毒(2株),細(xì)小病毒科短頸濃核病毒屬CppDNV病毒(3株)和黃病毒科黃病毒屬JEV病毒(6株)。這些數(shù)據(jù)不僅填補(bǔ)和豐富了上述地區(qū)蟲(chóng)媒病毒的基線(xiàn)數(shù)據(jù),更重要的是為當(dāng)?shù)叵x(chóng)媒病毒病的預(yù)防控制及夏秋季不明原因發(fā)熱病例的診斷提供了重要的依據(jù)和信息,為深入研究我國(guó)蟲(chóng)媒病毒的分布及相關(guān)疾病的發(fā)生、發(fā)展和流行特征積累了資料。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)疾病預(yù)防控制中心
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2009
【分類(lèi)號(hào)】：R373

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本文編號(hào)：1497105