本文關(guān)鍵詞： 胃癌 靶向治療 單克隆抗體庫 功能性單克隆抗體 靶標(biāo)　出處：《中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué)》2008年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】： 胃癌是世界和我國均最常見的惡性腫瘤之一,由于缺少有效的治療藥物,胃癌目前5年生存率還很低。隨著腫瘤靶向治療的興起,尋找在胃癌生長轉(zhuǎn)移過程中發(fā)揮著重要功能的特異的基因/蛋白,為靶向治療胃癌提供有價值的靶標(biāo)已成為胃癌研究的新熱點。本研究采用“功能性單克隆抗體庫技術(shù)”,通過建立大容量抗胃癌細(xì)胞單抗庫并進(jìn)行直接的體內(nèi)外功能性篩選,以期篩選出胃癌增殖轉(zhuǎn)移相關(guān)功能性單抗,為分離獲得具有作為胃癌治療靶標(biāo)潛力的相應(yīng)靶抗原功能性基因/蛋白奠定基礎(chǔ)。 采用固定化的人胃癌細(xì)胞NCI-N87免疫BALB/c小鼠,甲基纖維素選擇培養(yǎng)技術(shù)制備雜交瘤單抗庫。用活細(xì)胞免疫熒光篩選能與胃癌細(xì)胞反應(yīng)的單抗,正常胃組織標(biāo)本免疫組化負(fù)篩選與正常胃組織交叉反應(yīng)的單抗。然后以直接的抑制人胃癌細(xì)胞增殖、黏附、遷移、侵襲的功能性實驗從單抗庫中篩選具有抑制作用的功能性單抗,并采用共接種動物模型對部分功能性單抗進(jìn)行體內(nèi)抑制移植瘤生長作用的篩選。純化部分所獲得的功能性單抗,進(jìn)一步確定其體內(nèi)外抑制胃癌生長的作用及量效關(guān)系。采用細(xì)胞免疫熒光及免疫組化對部分確定有功能的抗體所識別的抗原蛋白進(jìn)行亞細(xì)胞定位及組織表達(dá)特異性的初步研究,并采用WesternBlotting分析其識別的抗原蛋白的分子量。 取1只免疫小鼠的脾細(xì)胞融合,成功制備了含有1012株雜交瘤克隆的大容量單抗庫,免疫熒光篩選得到了295株可與活的人胃癌細(xì)胞反應(yīng)的單抗,其中252株顯示出膜反應(yīng)特征。經(jīng)免疫組化篩選獲得與正常胃癌組織不反應(yīng)或低反應(yīng)、具有相對特異性的單抗145株。以直接的功能性篩選實驗從這145株單抗中篩選出能顯著抑制人胃癌細(xì)胞增殖的單抗22株,抑制率為16%～44%;能顯著抑制人胃癌細(xì)胞與淋巴內(nèi)皮粘附的單抗4株,抑制率達(dá)15～33%;能顯著抑制胃癌細(xì)胞遷移的單抗9株,抑制率為15-34%;能顯著抑制胃癌細(xì)胞侵襲的單抗1株,抑制率為28%。挑選部分抑制胃癌增殖的功能性單抗共計8株在裸鼠體內(nèi)采用共接種模型進(jìn)行體內(nèi)抑瘤作用的篩選,結(jié)果顯示其中4株單抗能夠非常顯著地抑制移植瘤的生長,抑制率達(dá)58%～69%。采用純化的單抗證明,這4株中的11G5單抗體外對人胃癌細(xì)胞增殖的抑制作用呈現(xiàn)一定的量效依賴關(guān)系,體內(nèi)抑瘤實驗中高(50mg/(kg·次))、中(25mg/(kg·次))、低(12.5mg/(kg·次))治療組對移植瘤的抑制率分別為75.73%、65.29%、53.77%,也具有一定的量效依賴關(guān)系�；罴�(xì)胞免疫熒光結(jié)果顯示11G5抗原定位在胃癌細(xì)胞膜上,初步的免疫組化研究表明11G5的靶抗原在胃癌組織中的表達(dá)顯著高于胃正常組織。Western Blotting分析表明其識別的為空間表位。 本研究首次制備成功了含1012個克隆的抗胃癌大容量單抗庫,從中篩選獲得了32株能夠抑制人胃癌細(xì)胞增殖、黏附、遷移、侵襲的功能性單抗,其中4株在體內(nèi)也能夠顯著抑制人胃癌生長的抗胃癌功能性抗體,為分離鑒定在胃癌生長轉(zhuǎn)移中發(fā)揮著重要作用的功能性基因/蛋白奠定了基礎(chǔ)。本研究確證了其中1株單抗11G5具有體內(nèi)外抑制胃癌生長的作用,并初步證明其定位于細(xì)胞膜上,在人胃癌組織中較特異地表達(dá),提示11G5單抗所識別的功能性抗原蛋白可作為胃癌靶向治療的潛在靶標(biāo)。本研究同時還初步驗證了所采用的“功能性單克隆抗體庫技術(shù)”分離鑒定胃癌生長轉(zhuǎn)移相關(guān)的功能性基因/蛋白有效、可行,有望為腫瘤靶向治療分子靶標(biāo)的篩選分離提供一個新的有效工具。
[Abstract]:Gastric cancer is one of the most common malignant tumors in the world and in China , and the 5 - year survival rate of gastric cancer is low due to the lack of effective therapeutic drugs . With the rise of tumor targeting therapy , it has become a new hotspot in gastric cancer research . The monoclonal antibodies against gastric cancer cell proliferation , adhesion , migration and invasion were screened by immunofluoresence screening of living cells . A monoclonal antibody against human gastric cancer cell proliferation was prepared successfully . The results showed that the inhibitory rate was 15 - 34 % . This study has proved that the monoclonal antibody 11G5 has the functions of inhibiting gastric cancer cell proliferation , adhesion , migration and invasion . Four of them can significantly inhibit the growth of human gastric cancer cells in vivo . The results show that one monoclonal antibody 11G5 has the potential target of inhibiting gastric cancer growth . It is suggested that the functional gene / protein identified by the monoclonal antibody library technique is effective and feasible in human gastric cancer . It is expected to provide a new and effective tool for screening and separating tumor targeting therapeutic molecule target .

【學(xué)位授予單位】：中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2008
【分類號】：R735.2;R392

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前5條

1 胡海;冉宇靚;遇瓏;周轉(zhuǎn);婁晉寧;楊治華;;靶向腫瘤血管內(nèi)皮細(xì)胞抑制人肝癌移植瘤生長的功能性抗體的研制[J];癌癥;2007年05期

2 葉坤輝;鄭安理;;胃癌分子標(biāo)靶治療藥物的新進(jìn)展[J];臨床腫瘤學(xué)雜志;2007年01期

3 胡海;冉宇靚;陳立釗;遇瓏;孫立新;楊治華;;采用抗體庫技術(shù)篩選抑制肺癌的功能性抗體[J];腫瘤防治研究;2007年06期

4 遇瓏;潘健;周轉(zhuǎn);冉宇靚;胡海;婁晉寧;楊治華;;抑制食管癌與肺血管內(nèi)皮黏附的功能性抗體的制備[J];中國腫瘤生物治療雜志;2006年05期

5 冉宇靚;胡海;陳立釗;遇瓏;孫立新;楊治華;;肺癌抑制性抗體及其抗原的鑒定[J];中國腫瘤生物治療雜志;2007年02期

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本文編號：1464956