本文關鍵詞： 胎血 樹突細胞 細胞培養(yǎng)技術　出處：《臨床肝膽病雜志》2015年11期 　論文類型：期刊論文

【摘要】：目的建立漿細胞樣樹突狀細胞(pDC)的體外培養(yǎng)方法。方法采集2014年6月-2015年2月于湖南中醫(yī)藥大學第一附屬醫(yī)院就診的健康產婦臍帶血40 ml,分離臍帶血單個核細胞(CBMC),用含重組人FMS樣酪氨酸激酶3配體(Flt3-L)100ng/ml、白細胞介素(IL)3 10 ng/ml的RPMI1640完全培養(yǎng)基連續(xù)培養(yǎng)7 d,每隔1天半換液。第8天加入2μg/ml的CpG ODN,24 h后收集細胞行流式檢測,同時檢測pDC培養(yǎng)上清干擾素(IFN)α水平。在培養(yǎng)細胞的第1、3、5、7、8天,觀察培養(yǎng)孔中的pDC形態(tài)特征變化。結果 CBMC培養(yǎng)2 h后可見圓形扁平細胞布滿視野,24 h后細胞開始貼壁,細胞質伸展開,體積有所增大,圓形,透亮,并可見散在的小集落形成;培養(yǎng)第3~4天,細胞體積較前繼續(xù)增大,多數為圓形,部分細胞表面可見小的突起,并可見少量梭形、蝌蚪狀、星形或其他不規(guī)則形的細胞,培養(yǎng)液中集落較前明顯增多、增大;培養(yǎng)第5~8天,集落數量及集落內細胞數逐漸減少,而培養(yǎng)液中圓形或具有小突起的懸浮細胞逐漸增多。流式細胞儀檢測發(fā)現CD123、BDCA-2、BDCA-4均表達陽性的細胞,該細胞為pDC。在培養(yǎng)過程中,pDC比例不斷增加,其在培養(yǎng)開始時僅占CBMC總數的1.08%,第4天升至5.32%,第8天時達到高峰,為19.8%。培養(yǎng)第8天時,pDC培養(yǎng)上清IFNα水平達(11 302.61±1745.31)pg/ml。結論以人CBMC為培養(yǎng)初始細胞,利用Flt3-L與IL-3聯合,可成功體外誘導出pDC。
[Abstract]:Objective to establish a plasmacyte-like dendritic cell (PDC). Methods 40 ml umbilical cord blood was collected from the first affiliated hospital of Hunan University of traditional Chinese Medicine from June 2014 to February 2015. Umbilical cord blood mononuclear cells (CBMC) were isolated and 100ng / ml with recombinant human FMS like tyrosine kinase 3 ligand Flt3-Ln / ml. The complete RPMI1640 medium of IL-310 ng/ml was cultured continuously for 7 days, and the solution was changed every 1 and a half days. On the 8th day, 2 渭 g / ml CpG ODN was added. After 24 hours, the cells were collected for flow detection and the level of IFN- 偽 in the supernatant of pDC culture was detected. The morphological changes of pDC in culture holes were observed. Results after 2 h of CBMC culture, round flat cells were found to be covered with visual field for 24 h. After 24 hours, the cells began to adhere to the wall, the cytoplasm was expanded and the volume increased. Small clusters forming round, transparent, and visible; On the 3rd day of culture, the cell volume continued to increase, most of the cells were round, some cells had small protuberances on the surface, and a small number of fusiform, tadpole, stellate or other irregular cells could be seen. The colony in the culture medium was obviously increased and increased compared with the former. On the 5th day of culture, the number of colony and the number of cells in the colony gradually decreased, while the number of circular or small protuberant suspension cells in the culture medium increased gradually. Flow cytometry showed that CD123 and BDCA-2 were detected by flow cytometry. All BDCA-4 positive cells, which were pDC. the proportion of pDC increased continuously during the culture process, which accounted for only 1.08% of the total number of CBMC at the beginning of culture. On the 4th day, it rose to 5.32 and reached the peak on the 8th day, 19.8. at the 8th day of cultivation. The level of IFN 偽 in the supernatant of pDC culture was 11 302.61 鹵1745.31 g / ml. Conclusion Human CBMC was used as the initial culture cell. The combination of Flt3-L and IL-3 could induce pDCin successfully in vitro.
【作者單位】： 湖南中醫(yī)藥大學第一附屬醫(yī)院傳染科;
【分類號】：R329.2
【正文快照】： 每年約有100萬人死于HBV感染所致的肝衰竭、肝硬化和肝細胞癌[1-2]。HBV在體內持續(xù)存在的機制十分復雜,其中機體細胞免疫功能低下是導致病毒不能有效被清除的重要原因。樹突狀細胞(dendrit-ic cell,DC)是目前已知的功能最強、唯一能激活初始T淋巴細胞的抗原遞呈細胞(antigen p

【參考文獻】

相關期刊論文 前3條

1 ;Plasmacytoid Dendritic Cells Act as the Most Competent Cell Type in Linking Antiviral Innate and Adaptive Immune Responses[J];Cellular & Molecular Immunology;2005年06期

2 王金湖;邵啟祥;陰晴;王勝軍;潘湘濤;顧超;許化溪;;人PBMC和臍血CD34~+細胞誘導DC2的實驗方法研究[J];中國交通醫(yī)學雜志;2006年02期

3 付海峰;周文波;丁佑銘;汪斌;徐軍輝;徐彥哲;;經沉默免疫負調控基因技術處理的樹突狀細胞聯同細胞毒性T淋巴細胞對HepG2細胞移植瘤的抑制作用[J];臨床肝膽病雜志;2014年09期

【共引文獻】

相關期刊論文 前7條

1 王麗英;楊勇;李占東;李東復;劉力賓;王敏;;siRNA干預樹突狀細胞CD40表達對大鼠炎癥性腸病的治療作用[J];吉林大學學報(醫(yī)學版);2015年01期

2 嚴翹;王飛;;Toll樣受體與病毒感染性皮膚病研究進展[J];中國麻風皮膚病雜志;2014年05期

3 劉真;洪坤學;高占;賈明明;胡新韜;趙全壁;阮玉華;邵一鳴;;HIV-1感染者外周血Ⅰ型干擾素產生細胞水平變化的研究[J];中華實驗和臨床感染病雜志(電子版);2011年02期

4 唐余燕;李丹;余永勝;;漿細胞樣樹突狀細胞(pDCs)在慢性乙肝中的研究進展[J];中國臨床藥理學與治療學;2012年09期

5 李莎;耿文清;尚紅;;HIV感染者pDC功能與TLR7/9介導的信號轉導[J];中國艾滋病性病;2013年11期

6 張新寧;劉榮;;漿細胞樣樹突狀細胞在肝臟疾病中的作用[J];中華臨床醫(yī)師雜志(電子版);2014年08期

7 Meenakshi Sachdeva;Yogesh K Chawla;Sunil K Arora;;Dendritic cells: The warriors upfront-turned defunct in chronic hepatitis C infection[J];World Journal of Hepatology;2015年19期

相關博士學位論文 前1條

1 彭建平;HBV感染免疫耐受期產婦臍帶血pDCs TLR9、IRF7、IFN-α變化及補腎解毒對其表達的影響[D];湖南中醫(yī)藥大學;2015年

相關碩士學位論文 前4條

1 崔春蘭;CD34~+細胞生物學特性的實驗研究[D];延邊大學;2011年

2 彭宏君;p38 MAPK信號轉導通路在腸道病毒71型感染中的作用機制[D];蘇州大學;2014年

3 黃慧琴;清熱利濕法對乙型肝炎相關性肝衰竭陽黃證患者外周血DC及TC免疫功能的影響[D];湖南中醫(yī)藥大學;2012年

4 劉娜娜;慢性乙型肝炎患者DC表面HLA-Ⅱ分子表達模式及其效應研究[D];第三軍醫(yī)大學;2014年

【二級參考文獻】

相關期刊論文 前3條

1 李焱;程朋;;中晚期肝癌臨床治療進展[J];臨床肝膽病雜志;2014年03期

2 林賢凡;吳金明;林春景;金思思;;HBV S-ecdCD40L融合基因修飾對樹突狀細胞功能的影響[J];醫(yī)學研究雜志;2013年12期

3 程婷婷;徐希;葛杭萍;陳楓煜;梁彬;俞康;;慢病毒介導的自殺基因對樹突狀細胞的殺傷作用[J];醫(yī)學研究雜志;2014年04期

【相似文獻】

相關期刊論文 前10條

1 單玉興,張海玉,張紹昆,劉一,徐莘香;兔骨髓間充質干細胞體外誘導軟骨形成[J];吉林大學學報(醫(yī)學版);2004年02期

2 劉敏;孔祥鑫;楊蘋;陳玉斌;李校X;王會巖;;成纖維細胞生長因子-21對體外誘導的非酒精性脂肪肝細胞模型脂代謝的影響[J];吉林大學學報(醫(yī)學版);2012年03期

3 楊自權,衛(wèi)小春,郝一勇,李鵬翠,丁娟,焦強;體外誘導骨髓間質干細胞向軟骨方向分化的研究[J];中華實驗外科雜志;2004年04期

4 常卓;侯玲玲;周雅瓊;彭洪尚;柯\~;;哺乳動物精子體外誘導的研究進展[J];中國生物工程雜志;2013年03期

5 賈延R，

本文編號：1462412