本文關(guān)鍵詞： 恥垢分枝桿菌 TrpD 原核表達(dá) 多克隆抗體　出處：《濰坊醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)》2015年02期 　論文類(lèi)型：期刊論文

【摘要】：目的克隆編碼恥垢分枝桿菌調(diào)節(jié)蛋白TrpD的基因并在大腸桿菌中進(jìn)行蛋白表達(dá)及純化。方法利用PCR技術(shù)從恥垢分枝桿菌中擴(kuò)增TrpD基因,構(gòu)建重組表達(dá)質(zhì)粒pET-32a(+)-TrpD;以重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21(DE3),篩選陽(yáng)性重組菌株,IPTG誘導(dǎo)目的蛋白表達(dá),在變性條件下對(duì)目的蛋白進(jìn)行鎳離子親和層析純化,通過(guò)SDS-PAGE和Westem blot鑒定目的蛋白的表達(dá)及反應(yīng)原性。結(jié)果擴(kuò)增了TrpD基因,克隆于表達(dá)載體pET-32a(+)中,PCR篩選和酶切鑒定獲得陽(yáng)性克隆,測(cè)序證實(shí)正確。經(jīng)誘導(dǎo)在大腸桿菌中表達(dá)出相對(duì)分子質(zhì)量(Mr)為56000的目的蛋白。結(jié)論已成功構(gòu)建TrpD基因的原核表達(dá)載體,并在大腸桿菌中獲得高效蛋白表達(dá)及純化,為進(jìn)一步研究TrpD蛋白在結(jié)核病中的致病機(jī)制提供了依據(jù)。
[Abstract]:Objective to clone the gene encoding the regulatory protein TrpD of Mycobacterium smeareus and to express and purify the protein in E. coli. Methods the TrpD gene was amplified from Mycobacterium smeareus by PCR technique. The recombinant expression plasmid pET-32a (pET-32a) was constructed. The recombinant plasmid was transformed into Escherichia coli BL21 and DE3, and the target protein was induced by IPTG. The target protein was purified by nickel ion affinity chromatography under denaturing conditions. The expression and reactivity of the target protein were identified by SDS-PAGE and Westem blot. Results the TrpD gene was amplified and cloned into the expression vector pET-32a (). Positive clones were obtained by PCR screening and restriction endonuclease digestion. The target protein with relative molecular weight of 56000 was induced to express in E. coli. Conclusion the prokaryotic expression vector of TrpD gene has been constructed successfully. High efficient protein expression and purification were obtained in Escherichia coli, which provided a basis for further study of the pathogenicity of TrpD protein in tuberculosis.
【作者單位】： 濰坊醫(yī)學(xué)院醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)學(xué)系;濰坊醫(yī)學(xué)院病原生物學(xué)教研室;
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金資助課題(課題編號(hào):81100006) 山東省自然科學(xué)基金項(xiàng)目資助課題(課題編號(hào):ZR2010HM073)
【分類(lèi)號(hào)】：R392
【正文快照】： 恥塘分枝桿菌(Mycobacterium Smegmatis,Ms)與 成),得到重組菌pET-32a(+)-TrpD。結(jié)核分枝桿菌(A/yco6ocferium tuterciifosii,MTB)同屬 1.2.3重組蛋白的誘導(dǎo)表達(dá)及鑒定將重組質(zhì)粒于分枝桿菌屬,在進(jìn)化上親緣關(guān)系接近,蛋白序列同源 pET-32a(+)-TrpD轉(zhuǎn)化感受態(tài)大腸桿菌BL21性高,

【參考文獻(xiàn)】

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【共引文獻(xiàn)】

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【二級(jí)參考文獻(xiàn)】

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【相似文獻(xiàn)】

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2 湛W歐，

本文編號(hào)：1457374