本文關(guān)鍵詞： 恥垢分枝桿菌 TrpD 原核表達 多克隆抗體　出處：《濰坊醫(yī)學(xué)院學(xué)報》2015年02期 　論文類型：期刊論文

【摘要】：目的克隆編碼恥垢分枝桿菌調(diào)節(jié)蛋白TrpD的基因并在大腸桿菌中進行蛋白表達及純化。方法利用PCR技術(shù)從恥垢分枝桿菌中擴增TrpD基因,構(gòu)建重組表達質(zhì)粒pET-32a(+)-TrpD;以重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21(DE3),篩選陽性重組菌株,IPTG誘導(dǎo)目的蛋白表達,在變性條件下對目的蛋白進行鎳離子親和層析純化,通過SDS-PAGE和Westem blot鑒定目的蛋白的表達及反應(yīng)原性。結(jié)果擴增了TrpD基因,克隆于表達載體pET-32a(+)中,PCR篩選和酶切鑒定獲得陽性克隆,測序證實正確。經(jīng)誘導(dǎo)在大腸桿菌中表達出相對分子質(zhì)量(Mr)為56000的目的蛋白。結(jié)論已成功構(gòu)建TrpD基因的原核表達載體,并在大腸桿菌中獲得高效蛋白表達及純化,為進一步研究TrpD蛋白在結(jié)核病中的致病機制提供了依據(jù)。
[Abstract]:Objective to clone the gene encoding the regulatory protein TrpD of Mycobacterium smeareus and to express and purify the protein in E. coli. Methods the TrpD gene was amplified from Mycobacterium smeareus by PCR technique. The recombinant expression plasmid pET-32a (pET-32a) was constructed. The recombinant plasmid was transformed into Escherichia coli BL21 and DE3, and the target protein was induced by IPTG. The target protein was purified by nickel ion affinity chromatography under denaturing conditions. The expression and reactivity of the target protein were identified by SDS-PAGE and Westem blot. Results the TrpD gene was amplified and cloned into the expression vector pET-32a (). Positive clones were obtained by PCR screening and restriction endonuclease digestion. The target protein with relative molecular weight of 56000 was induced to express in E. coli. Conclusion the prokaryotic expression vector of TrpD gene has been constructed successfully. High efficient protein expression and purification were obtained in Escherichia coli, which provided a basis for further study of the pathogenicity of TrpD protein in tuberculosis.
【作者單位】： 濰坊醫(yī)學(xué)院醫(yī)學(xué)檢驗學(xué)系;濰坊醫(yī)學(xué)院病原生物學(xué)教研室;
【基金】：國家自然科學(xué)基金資助課題(課題編號:81100006) 山東省自然科學(xué)基金項目資助課題(課題編號:ZR2010HM073)
【分類號】：R392
【正文快照】： 恥塘分枝桿菌(Mycobacterium Smegmatis,Ms)與 成),得到重組菌pET-32a(+)-TrpD。結(jié)核分枝桿菌(A/yco6ocferium tuterciifosii,MTB)同屬 1.2.3重組蛋白的誘導(dǎo)表達及鑒定將重組質(zhì)粒于分枝桿菌屬,在進化上親緣關(guān)系接近,蛋白序列同源 pET-32a(+)-TrpD轉(zhuǎn)化感受態(tài)大腸桿菌BL21性高,

【參考文獻】

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1 李秀星;戚薇;王建玲;;枯草芽孢桿菌谷氨酰胺轉(zhuǎn)胺酶基因的克隆及在大腸桿菌中的表達[J];食品研究與開發(fā);2008年06期

2 李劍欣;郭長江;劉云;林維平;張緒梅;徐琪壽;;大腸桿菌鄰氨基苯甲酸合成酶編碼基因trpED的克隆與表達[J];生物技術(shù)通訊;2007年02期

3 林維平;劉曉影;武敬亮;高志芹;孫同毅;;大腸桿菌色氨酸操縱子基因突變株的構(gòu)建與表達[J];中國生物制品學(xué)雜志;2010年07期

【共引文獻】

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1 胡春霞;葉夢情;易明花;;新型食品添加劑谷氨酰胺轉(zhuǎn)胺酶的生產(chǎn)及應(yīng)用研究進展[J];安徽農(nóng)業(yè)科學(xué);2013年12期

2 王穩(wěn)航;劉婷;趙可;李茜;滕安國;劉安軍;;外源酶在肉品加工中的應(yīng)用研究進展[J];食品科學(xué);2013年15期

3 懷寶東;王穎;張東杰;;枯草芽孢桿菌耐熱絲氨酸蛋白酶基因的克隆與表達[J];中國生物制品學(xué)雜志;2013年10期

4 張瑩瑩;石楠;杜萍萍;申培立;李志輝;于宏偉;盧海強;蘇旭東;張偉;檀建新;;一株產(chǎn)谷氨酰胺轉(zhuǎn)氨酶菌株的分離、鑒定及其tgl的克隆表達[J];食品工業(yè)科技;2015年11期

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1 趙志軍;L-色氨酸生產(chǎn)菌株的構(gòu)建及代謝調(diào)控研究[D];江南大學(xué);2011年

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1 懷寶東;絲氨酸蛋白酶工程菌的構(gòu)建及改性大豆分離蛋白應(yīng)用研究[D];黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué);2013年

2 孟秀娟;L-色氨酸合成關(guān)鍵調(diào)控基因突變株的構(gòu)建及其發(fā)酵條件的初步探究[D];吉林大學(xué);2013年

3 李德明;基于全基因組測序的色氨酸工業(yè)生產(chǎn)菌分子育種研究[D];華南理工大學(xué);2014年

【二級參考文獻】

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1 李劍欣,張緒梅,徐琪壽;色氨酸的生理生化作用及其應(yīng)用[J];氨基酸和生物資源;2005年03期

2 黃六容,何冬蘭;微生物谷氨酰胺轉(zhuǎn)胺酶的研究進展[J];化學(xué)與生物工程;2004年02期

3 張守亮;陳堅;華兆哲;堵國成;;角質(zhì)酶產(chǎn)生菌Thermobifida fusca WSH03-11誘變及高產(chǎn)突變株發(fā)酵條件優(yōu)化[J];化工進展;2006年05期

4 張緒梅,郭長江,李劍欣,徐琪壽;基因工程在L-色氨酸生產(chǎn)中的應(yīng)用研究進展[J];軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院院刊;2005年04期

5 宋文霞,王瑞明;L-色氨酸的研究[J];農(nóng)產(chǎn)品加工(學(xué)刊);2005年03期

6 劉延嶺;鄧林;周昌豹;陳麗清;;微生物發(fā)酵生產(chǎn)谷氨酰胺轉(zhuǎn)胺酶的研究進展[J];四川食品與發(fā)酵;2004年04期

7 唐名山,王樹英,陳堅,李華鐘;Streptoverticillium mobaraense谷氨酰胺轉(zhuǎn)胺酶的表達、純化和復(fù)性[J];食品與發(fā)酵工業(yè);2004年04期

8 周建,董亞芳,吳自榮;枯草桿菌谷氨酰胺轉(zhuǎn)胺酶的克隆及其在大腸桿菌中的融合表達[J];中國生物工程雜志;2004年08期

9 張緒梅;郭長江;劉云;楊繼軍;韋京豫;徐琪壽;;大腸桿菌PGDH末端缺失突變體的構(gòu)建及抗反饋抑制效應(yīng)分析[J];中國生物化學(xué)與分子生物學(xué)報;2006年10期

10 林維平;郭長江;張緒梅;徐琪壽;;大腸桿菌色氨酸操縱子基因的克隆與表達[J];中國生物制品學(xué)雜志;2008年01期

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1 徐苗,陳保文,沈小兵,蘇城,羅永艾,王國治;恥垢分枝桿菌作為免疫調(diào)節(jié)劑的研究[J];中華微生物學(xué)和免疫學(xué)雜志;2005年09期

2 湛W歐，

本文編號：1457374