本文關(guān)鍵詞： Dnmll 胚胎著床 原位雜交 實時熒光定量PCR　出處：《東北林業(yè)大學(xué)》2014年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：Dnmll屬于動力蛋白GTP酶超家族,是線粒體分裂體系的重要組成成分。在不同物種中,Dnmll在與多種分子相互作用后,可以定位于線粒體并組裝成高級結(jié)構(gòu),引起膜的收縮和分裂。Dnmll功能的消失會增強線粒體的融合和線粒體之間的連通性。近期研究發(fā)現(xiàn),Dnmll在細(xì)胞凋亡過程和多種疾病中也具有重要作用。 本研究應(yīng)用原位雜交的方法分別檢測了Dnmll mRNA在早期妊娠、假孕、人工蛻膜化、延遲著床及激活等模型的小鼠子宮中的表達(dá)情況,并利用實時熒光定量PCR的方法研究Dnmll mRNA在小鼠早期妊娠子宮中相對表達(dá)量的變化。原位雜交結(jié)果顯示,Dnmll mRNA在妊娠第1-4天的子宮腔上皮和腺上皮中均有表達(dá),第1天的信號強度較弱,第2-4天的子宮腔上皮和腺上皮中的信號強度相比第1天均有所增強；在妊娠第5天,除在腔上皮和腺上皮中表達(dá)外,在子宮基質(zhì)中也呈現(xiàn)弱表達(dá),且主要集中在初級蛻膜區(qū)；在假孕模型中,假孕第1天子宮的腔上皮葉1可觀察到信號的出現(xiàn),在假孕第2-5天,子宮腔上皮和腺上皮中均有信號表達(dá),信號強度基本沒有改變；在激活著床的子宮組織中,信號的表達(dá)情況與妊娠第5天相似,除在腔上皮和腺上皮中可觀察到信號外,在初級蛻膜化區(qū)域中也檢測到了少量信號的表達(dá)；在延遲著床子宮組織中,只在腔上皮和腺上皮中觀察到信號。在妊娠第6-8天,信號主要集中于蛻膜區(qū),且隨著蛻膜化組織的發(fā)展,信號的范圍也不斷擴大,最后幾乎涵蓋大部分基質(zhì)細(xì)胞。在人工誘導(dǎo)蛻膜化的子宮組織中,在蛻膜區(qū)可檢測到信號的表達(dá),且表達(dá)情況與妊娠第8天的情況相似,在對照組的子宮組織中,只在腔上皮和腺上皮中檢測到信號,且信號強度較低。實時熒光定量PCR結(jié)果顯示：Dnmll mRNA在妊娠第1-3天內(nèi),表達(dá)逐漸增強,在第三天是表達(dá)量最高,在妊娠第4到6天時,表達(dá)又逐漸減弱,在妊娠第6至8天時,Dnmll mRNA的表達(dá)量比較接近。 綜上所述,Dnmll mRNA在小鼠早期妊娠的子宮組織中發(fā)生時空特異性表達(dá),并且相對表達(dá)量也發(fā)生變化,Dnmll mRNA在小鼠子宮基質(zhì)中的表達(dá)變化受到胚胎著床的調(diào)節(jié)。
[Abstract]:Dnmll belongs to the superfamily of dynamic protein GTP, which is an important component of mitochondrial mitosis system. In different species, Dnmll interacts with a variety of molecules. It can be located in mitochondria and assembled into advanced structure, causing membrane contraction and fission. The disappearance of Dnmll function will enhance mitochondrial fusion and mitochondrial connectivity. Dnmll also plays an important role in the process of apoptosis and many diseases. In this study, in situ hybridization was used to detect the expression of Dnmll mRNA in mouse uterus of early pregnancy, pseudopregnancy, artificial decidualization, delayed implantation and activation. The changes of relative expression of Dnmll mRNA in early pregnancy uterus of mice were studied by real-time fluorescence quantitative PCR. Dnmll mRNA was expressed in uterine cavity epithelium and glandular epithelium on the 1st and 4th day of pregnancy, and the signal intensity was weak on the 1st day. The signal intensity of uterine cavity epithelium and glandular epithelium on day 2-4 was higher than that on day 1. On the 5th day of pregnancy, the expression was weak in the uterine matrix, and mainly in the primary decidua area, except in the luminal epithelium and glandular epithelium. In the model of pseudopregnancy, the signal was observed in the luminal epithelium of uterus on the first day of pseudopregnancy, and the signal expression was found in the epithelium of uterine cavity and glandular epithelium on day 2-5 of pseudopregnancy, and the signal intensity was not changed. The signal expression was similar to that in the 5th day of pregnancy in the uterine tissues activated by implantation. In addition to the signals observed in the luminal and glandular epithelium, a small number of signals were also detected in the primary decidualization region. The signal was observed only in the luminal and glandular epithelium in the delayed implantation uterine tissue. On the 6th to 8th day of pregnancy, the signal was mainly concentrated in decidua area, and the range of signal was enlarged with the development of decidualized tissue. Finally, most of the stromal cells were almost covered. In the artificial induced decidualization of uterus, signal expression could be detected in decidua, and the expression was similar to that on the 8th day of pregnancy. In the control group, the signal was detected only in the luminal and glandular epithelium, and the signal intensity was low. The results of real-time fluorescence quantitative PCR showed that the mRNA was within 1-3 days of gestation. The expression of Dnmll mRNA was higher on the third day, decreased gradually on the 4th to 6th day of gestation, and the expression of Dnmll mRNA was similar at the 6th to 8th day of gestation. To sum up, the expression of Dnmll mRNA in the uterus of early pregnancy in mice was spatio-temporal specific, and the relative expression of Dnmll mRNA was also changed. The expression of Dnmll mRNA in mouse uterine matrix was regulated by embryo implantation.
【學(xué)位授予單位】：東北林業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R321

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本文編號：1452033