本文關(guān)鍵詞： 腫瘤壞死因子α 白介素β 抗炎 藥物篩選 穩(wěn)定轉(zhuǎn)染　出處：《現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展》2015年06期 　論文類型：期刊論文

【摘要】：目的:構(gòu)建兩個高表達(dá)人TNFα和IL-1β細(xì)胞系,建立抗炎藥物篩選細(xì)胞模型。方法:運用PCR的方法從載體pCMVSport-TNFα和p CMVSport-IL1β上擴(kuò)增目的基因,以亞克隆方法將目的基因分別插入真核表達(dá)載體pcDNA3.1和pFLAG-CMV中,用單酶切、PCR擴(kuò)增和基因測序的方法鑒定重組效果,然后將重組成功的質(zhì)粒轉(zhuǎn)入HEK293細(xì)胞系內(nèi),挑選能夠穩(wěn)定表達(dá)并遺傳的單克隆細(xì)胞株,用蛋白免疫印跡(Western blot)法分析其表達(dá)效果。結(jié)果:三種鑒定方法均顯示重組質(zhì)粒構(gòu)建成功。Western blot結(jié)果顯示,細(xì)胞株T3、T4均能較高表達(dá)炎癥因子TNF-α;細(xì)胞株I2、I3、I5均能較高表達(dá)炎癥因子IL-1β。結(jié)論:成功構(gòu)建了TNFα和IL-1β靶標(biāo)的藥物篩選細(xì)胞模型,為篩選具有抗炎作用的中藥提供了一個新平臺。
[Abstract]:Objective: to construct two high expression human TNF 偽 and IL-1 尾 cell lines. Methods: PCR method was used to amplify the target gene from vector pCMVSport-TNF 偽 and p CMVSport-IL1 尾. The target gene was inserted into eukaryotic expression vector pcDNA3.1 and pFLAG-CMV by subcloning method. The recombinant effect was evaluated by single enzyme digestion PCR amplification and gene sequencing. Then the recombinant plasmid was transferred into HEK293 cell line to select the stable expression and inheritance of monoclonal cell lines. Results: all the three identification methods showed that the recombinant plasmid was successfully constructed. Western blot showed that the recombinant plasmid was constructed successfully. The expression of inflammatory factor TNF- 偽 was higher in T _ 3 / T _ 4 cell line than in T _ 3 / T _ 4 cell line. Conclusion: the drug screening model of TNF 偽 and IL-1 尾 target was successfully constructed. It provides a new platform for screening Chinese medicine with anti-inflammatory effect.
【作者單位】： 北京中醫(yī)藥大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院;北京中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院;
【基金】：國家自然科學(xué)基金項目(81072901) 教育部博士點基金項目(20120013110013) 在讀研究生資助項目(2014-JYBZZ-XS-029);在讀研究生資助項目(2014-JYBZZ-XS-013)
【分類號】：R329.2
【正文快照】： 前言炎癥是指機(jī)體對感染、外來物質(zhì)或其它原因(如抗原抗體復(fù)合物)所致?lián)p傷的一種反應(yīng),炎癥的復(fù)雜進(jìn)程既能為機(jī)體抵抗外界感染或損傷,也會為宿主帶來不同程度的傷害作用。另一方面,炎癥反應(yīng)也可能帶來一系列的疾病,最常見的包括類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎,腸道炎癥,牛皮癬和多發(fā)性硬化癥等

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本文編號：1450536