本文關(guān)鍵詞： 原癌基因蛋白質(zhì)c-myc 多能干細(xì)胞 蛋白轉(zhuǎn)導(dǎo)結(jié)構(gòu)域 載體構(gòu)建　出處：《中華臨床醫(yī)師雜志(電子版)》2015年05期 　論文類型：期刊論文

【摘要】：目的構(gòu)建重組表達(dá)載體TAT-c-Myc,在E.coli BL21中高效表達(dá)并純化融合蛋白。方法經(jīng)PCR獲得編碼人c-Myc的全基因序列,含有設(shè)計(jì)的限制性酶切位點(diǎn)的產(chǎn)物連接到含有TAT轉(zhuǎn)導(dǎo)結(jié)構(gòu)的原核表達(dá)載體PET-28b-TAT-V2上,得到重組表達(dá)載體TAT-c-Myc,轉(zhuǎn)化大腸桿菌,應(yīng)用IPTG誘導(dǎo)TAT-c-Myc融合蛋白的表達(dá)。表達(dá)產(chǎn)物用SDS-PAGE鑒定,親和層析柱純化,并應(yīng)用Western blot檢測蛋白的特異性,融合蛋白轉(zhuǎn)導(dǎo)人皮膚成纖維(HSF)細(xì)胞的效果應(yīng)用免疫熒光檢測。結(jié)果成功構(gòu)建了TAT-c-Myc融合蛋白的原核表達(dá)載體,在誘導(dǎo)下獲得了高效表達(dá)。Western blot檢測提示融合蛋白有良好的特異性。免疫熒光檢測提示融合蛋白具有快速轉(zhuǎn)導(dǎo)入HSF細(xì)胞內(nèi)的能力。結(jié)論為進(jìn)一步的通過蛋白轉(zhuǎn)導(dǎo)方式誘導(dǎo)多能干細(xì)胞提供了物質(zhì)基礎(chǔ)。
[Abstract]:Objective to construct the recombinant expression vector TAT-c-Myc, express and purify the fusion protein in E.coli BL21. Methods the whole gene sequence of human c-Myc was obtained by PCR. The product containing restriction restriction site was linked to the prokaryotic expression vector PET-28b-TAT-V2 containing TAT transduction structure to obtain the recombinant expression vector TAT-c-Myc. The expression of TAT-c-Myc fusion protein was induced by IPTG. The expression product was identified by SDS-PAGE and purified by affinity chromatography. The specificity of the protein was detected by Western blot. The effect of fusion protein on human skin fibroblast was detected by immunofluorescence. Results the prokaryotic expression vector of TAT-c-Myc fusion protein was successfully constructed. After induction, the high expression of. Western was obtained. Blot analysis showed that the fusion protein had good specificity, and immunofluorescence assay showed that the fusion protein had the ability to be transferred into HSF cells quickly. Conclusion the results suggest that the fusion protein can be further induced into HSF cells by protein transduction. The cell provides the material basis.
【作者單位】： 解放軍第302醫(yī)院國際肝病診療中心;解放軍第302醫(yī)院肝衰竭診療與研究中心;
【基金】：軍隊(duì)“十二五”重大課題(BWS11J075)
【分類號(hào)】：R329.2
【正文快照】： 誘導(dǎo)性多能干細(xì)胞(induced pluripotent stemcell,i PSC)是通過人工方法將某些特定的外源性轉(zhuǎn)錄因子導(dǎo)入體細(xì)胞或成體干細(xì)胞中,使體細(xì)胞或成體干細(xì)胞重新編程為具有無限增殖潛能和定向分化能力的、類似于胚胎干細(xì)胞的一類“人造干細(xì)胞”。2006年,Takahashi等[1]首次報(bào)道將oct4

【共引文獻(xiàn)】

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