發(fā)布時間：2018-01-18 13:05

  本文關鍵詞：慢性乙型肝炎治療型MVA載體疫苗的基礎研究　出處：《中國人民解放軍軍醫(yī)進修學院》2008年博士論文　論文類型：學位論文

  更多相關文章： 乙型肝炎 治療型疫苗 異源性載體

【摘要】： 由于DNA疫苗在誘導機體特異性細胞免疫方面具有獨特優(yōu)勢,已作為針對慢性乙型肝炎具有潛力的免疫治療手段被廣泛研究。如何加強DNA疫苗的效果是推動DNA疫苗發(fā)展的關鍵。其中一個研究方向就是通過選擇佐劑和調(diào)整免疫程序加強DNA疫苗的保護效率。 異源性載體prime/boost免疫策略是利用不同性質(zhì)的載體表達同一個保護抗原,一般是DNA疫苗初次免疫(prime),然后用病毒載體加強(boost)。DNA疫苗抗原純度高,持續(xù)表達低劑量的抗原,可多次重復免疫以及誘導高效價記憶性細胞毒性T淋巴細胞(CTL)反應,是理想的用于初次免疫的疫苗;重組病毒能高效表達目的抗原,模擬病毒感染誘導機體免疫的天然過程,能誘發(fā)多種細胞因子,而且有利于高親和性抗體和T細胞受體的選擇,可以有效地產(chǎn)生Th1型和CTL反應。 白細胞介素18(IL-18)最早被稱為IFN-γ誘導因子γ,它不僅能促進T細胞和NK細胞產(chǎn)生IFN-γ、IL-2和GM-CSF等細胞因子,并能增強Th1細胞和NK細胞表達Fas配體,從而介導細胞毒作用。 本課題在構建含HBV不同抗原基因的重組MVA假病毒顆粒的基礎上,采取DNA prime/VLP boost的免疫程序,輔以細胞因子IL-18作為佐劑,評價其治療HBV慢性感染的可能價值。 首先將表達乙型肝炎病毒PreS2-S、C、PreC/C等抗原基因,以及分別突變2個和4個核苷酸的PreC/C基因分別克隆入與痘苗病毒Ankara株(MVA)基因組同源的穿梭載體pSC11中,構建并篩選重組質(zhì)粒,將所得轉(zhuǎn)染MVA病毒經(jīng)過9次傳代培養(yǎng),篩選分別攜帶這些目的基因的重組MVA病毒,通過PCR擴增證實重組病毒分別正確攜帶目的基因,并且在傳代過程中成功形成單克隆,間接免疫熒光鑒定重組病毒可以被所表達抗原的特異性抗體識別,證實重組病毒正確表達目的抗原并具有良好的抗原性。 大量制備DNA疫苗、重組病毒以及鼠白細胞介素-18(mIL-18)質(zhì)粒,分別采用DNA疫苗單獨免疫、rMVA單獨免疫、DNA prime/rMVA boost、DNA prime/rMVAboost+mIL-18的免疫程序免疫C57BL/6小鼠,采用ELISA、ELISPOT方法評價體液免疫和細胞免疫的效果。結果顯示,表達PreS2-S、C兩種抗原的各組疫苗在抗體產(chǎn)生的時間和滴度方面均沒有統(tǒng)計學差異,用ELISPOT檢測IFN-γ的產(chǎn)生可知,所有免疫組均可引起針對特異性抗原的細胞免疫,rMVA單獨免疫組強于DNA疫苗單獨免疫組,弱于DNA prime/rMVA boost和DNA prime/rMVAboost+mIL-18組,DNA prime/rMVA boost和DNA prime/rMVA boost+mIL-18之間沒有顯著差別。 研究表明,攜帶HBV保護性抗原基因的重組MVA病毒可以誘導針對抗原的特異性細胞免疫和體液免疫,將其與表達相同抗原的DNA疫苗聯(lián)合,采用DNAprime/rMVA boost的免疫方案,可以誘導比兩者單獨應用更強的細胞免疫反應,實驗結果將為治療型HBV疫苗的應用研究提供科學依據(jù)。
[Abstract]:Because of the unique advantages of DNA vaccine in inducing specific cellular immunity. Has been widely studied as a potential immunotherapy for chronic hepatitis B. how to enhance the effectiveness of DNA vaccine is the key to promote the development of DNA vaccine. One of the research directions is through the selection of adjuvants. And adjusts the immune program to enhance the DNA vaccine protection efficiency. The strategy of heterogenous vector prime/boost immunization is to express the same protective antigen by using different vectors, which is usually the prime of primary immunization of DNA vaccine. Then the virus vector was used to enhance the antigen purity of boost.DNA vaccine and the low dose antigen was continuously expressed. The vaccine can be repeated multiple times and induce high titer memory cytotoxic T lymphocyte cytotoxic T lymphocyte (CTL) reaction. It is an ideal vaccine for primary immunization. The recombinant virus can express the target antigen efficiently, mimic the natural process of virus infection and induce many cytokines, and is beneficial to the selection of high affinity antibody and T cell receptor. Th1 type and CTL reaction can be produced effectively. Interleukin-18 (IL-18) was first called IFN- 緯 inducible factor 緯 (IFN- 緯 -inducible factor 緯), which can not only promote the production of cytokines such as IFN- 緯 -IL-2 and GM-CSF by T cells and NK cells. It can also enhance the expression of Fas ligand in Th1 cells and NK cells, thus mediating cytotoxicity. Based on the construction of recombinant MVA pseudovirus particles containing different antigen genes of HBV, the immune program of DNA prime/VLP boost was adopted. To evaluate the possible value of cytokine IL-18 as adjuvant in the treatment of chronic HBV infection. First, the antigen genes such as PreS2-SU, PreCrC, and so on were expressed. The PreC/C gene with two and four nucleotides mutation was cloned into the shuttle vector pSC11 homologous to the vaccinia virus Ankara strain. The recombinant plasmid was constructed and screened, and the recombinant MVA virus carrying these target genes was screened after 9 passages culture. PCR amplification confirmed that the recombinant virus carried the target gene correctly, and successfully formed a monoclonal in the course of passage. Indirect immunofluorescence identification of the recombinant virus can be recognized by the specific antibody of the expressed antigen. It was proved that the recombinant virus expressed the target antigen correctly and had good antigenicity. DNA vaccine, recombinant virus and murine interleukin-18 mIL-18 plasmid were prepared in large quantities. DNA vaccine was used to immunize rMVA alone. C57BL / 6 mice were immunized with DNA prime/rMVAboost prime/rMVAboost mIL-18. The effects of humoral and cellular immunity were evaluated by ELISA-ELISPOT method. The results showed that PreS2-S was expressed. There was no significant difference in the time and titer of antibody production between the two antigen groups. The production of IFN- 緯 was detected by ELISPOT. All immune groups can cause specific antigen specific cellular immunity rMVA alone immunization group is stronger than DNA vaccine alone immunization group. It was weaker than DNA prime/rMVAboost and DNA prime/rMVAboost mIL-18 group. There was no significant difference between DNA prime/rMVA boost and DNA prime/rMVA boost mIL-18. Studies have shown that the recombinant MVA virus carrying the HBV protective antigen gene can induce specific cellular and humoral immunity against the antigen and combine it with the DNA vaccine expressing the same antigen. The use of DNAprime/rMVA boost can induce a stronger cellular immune response than that of both alone. The results will provide scientific basis for the application of therapeutic HBV vaccine.
【學位授予單位】：中國人民解放軍軍醫(yī)進修學院
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2008
【分類號】：R392

【相似文獻】

相關期刊論文 前10條

1 布拉提拜·阿昝拜克;;62例病毒性急性黃疸性乙型肝炎臨床分析[J];醫(yī)學信息(上旬刊);2011年08期

2 李海燕;許春梅;李軍琪;;白細胞介素-12受體與病毒性乙型肝炎的相關性研究進展[J];國際消化病雜志;2011年03期

3 胡翠君;;沭陽縣2008年乙型肝炎疫情分析[J];中外醫(yī)療;2011年17期

4 呂潔玉;杜二球;陳永利;胡平;金全芳;張冬霞;;CD4~+CD25~+調(diào)節(jié)性T細胞在HBV宮內(nèi)感染的表達及意義[J];湖北醫(yī)藥學院學報;2011年03期

5 馬羽萍;羅改云;;中西醫(yī)結合治療乙型肝炎方法的認識和體會[J];陜西中醫(yī);2011年08期

6 吳昊澄;徐旭卿;王臻;曾蓓蓓;魯琴寶;何凡;劉碧瑤;趙艷榮;;乙型肝炎發(fā)病趨勢的GM(1,1)模型預測[J];浙江預防醫(yī)學;2011年09期

7 李齊芳;鄧肖英;賴海濤;;靈山縣2004—2009年乙型肝炎的流行特征[J];職業(yè)與健康;2011年14期

8 宿新農(nóng);;從業(yè)人員乙型肝炎病毒感染情況調(diào)查[J];中國預防醫(yī)學雜志;2011年08期

9 戚園;楊玨;葛國洪;;不同劑量重組乙型肝炎疫苗對成人免疫效果的影響[J];中國醫(yī)藥指南;2011年23期

10 徐浩;梁雪松;范文翰;萬謨;;阿德福韋酯聯(lián)合拉米夫定治療乙型肝炎DNA陽性肝硬化療效觀察[J];現(xiàn)代生物醫(yī)學進展;2011年12期

相關會議論文 前10條

1 齊興軍;姬寶印;于洪樞;;從業(yè)人員乙型肝炎感染狀況調(diào)查[A];吉林省預防醫(yī)學學術座談會論文集[C];2004年

2 殷曉軒;孫世萍;;心理療法在乙型肝炎治療中的地位與應用[A];中華中醫(yī)藥學會第十三屆內(nèi)科肝膽病學術會議論文匯編[C];2008年

3 黃燦華;;RUNX3基因在乙型肝炎病毒誘導腫瘤發(fā)生中的作用[A];2004年中國科學院新生病毒性疾病控制學術討論會摘要集[C];2004年

4 林壽寧;黃彬;朱永蘋;;壯肝逐瘀煎治療乙型肝炎肝纖維化60例臨床觀察[A];第四次全國中西醫(yī)結合養(yǎng)生學與康復醫(yī)學學術研討會論文集[C];2004年

5 鄒金生;;乙型肝炎臨床治療的思考[A];中國中西醫(yī)結合學會第十六次全國消化系統(tǒng)疾病學術研討會論文匯編[C];2004年

6 劉婭;張愛蕓;袁迎春;席向紅;趙經(jīng)川;;性別因素在乙型肝炎及肝硬化中的作用[A];第五屆全國肝臟疾病臨床暨中華肝臟病雜志成立十周年學術會議論文匯編[C];2006年

7 鄭玉清;包麗梅;;口腔科門診乙型肝炎病人治療過程中的護理體會[A];全國第六屆口腔醫(yī)院管理研討會論文匯編[C];2000年

8 楊必金;;乙型肝炎的辨證施治[A];中國中醫(yī)藥學會建會20周年學術年會專輯(下)[C];1999年

9 賓學森;;呼吁重視對“乙型肝炎”的預防與控制[A];中國中西醫(yī)結合學會第十三次全國消化系統(tǒng)疾病學術研討會論文匯編[C];2001年

10 劉慶德;吳云南;;肺結核合并乙型肝炎臨床分析[A];2005年中國防癆協(xié)會全國學術會議論文集[C];2005年

相關重要報紙文章 前10條

1 記者 許曉嵐;我區(qū)將對乙型肝炎流行病學展開調(diào)查[N];內(nèi)蒙古日報(漢);2008年

2 上海市第六人民醫(yī)院教授、主任醫(yī)師 潘鈺卿;乙型肝炎需早治[N];上�？萍紙�;2000年

3 上海中醫(yī)藥大學 胡義揚;乙型肝炎如何預防[N];上海中醫(yī)藥報;2004年

4 市傳染病醫(yī)院副主任醫(yī)師 周紅燕;乙型肝炎能否徹底治愈？[N];無錫日報;2005年

5 郭新會 北京佑安醫(yī)院 主任醫(yī)師;直面乙型肝炎[N];中國勞動保障報;2009年

6 李賽玲;朱軍;乙型肝炎辨治研究[N];中國醫(yī)藥報;2003年

7 本報記者 張雷 實習記者 陳麗瑩;乙型肝炎攜帶病毒≠患病[N];醫(yī)藥經(jīng)濟報;2004年

8 劉士敬 博士;乙型肝炎為何多為慢性的[N];中國醫(yī)藥報;2000年

9 昌吉州人民醫(yī)院傳染病分院副院長 主治醫(yī)師 鞏維進;乙肝不可怕 治療很重要[N];昌吉日報;2009年

10 孔明云;治療乙型肝炎經(jīng)驗方七則[N];中國中醫(yī)藥報;2004年

相關博士學位論文 前10條

1 欒翔凌;慢性乙型肝炎治療型MVA載體疫苗的基礎研究[D];中國人民解放軍軍醫(yī)進修學院;2008年

2 邵中軍;乙型肝炎病毒宮內(nèi)感染危險因素研究[D];第四軍醫(yī)大學;2005年

3 周世水;重組人源抗HBsAg單鏈抗體—干擾素γ在巴氏畢赤酵母中表達的研究[D];華南理工大學;2003年

4 赫兢;治療性乙型肝炎病毒DNA疫苗的基礎研究[D];中國人民解放軍軍醫(yī)進修學院;2005年

5 郭明高;表面抗體基因在肝移植中抑制乙型肝炎病毒再感染的實驗研究[D];第二軍醫(yī)大學;2005年

6 栗華;TGFβ1和血管緊張素系統(tǒng)基因多態(tài)性與乙肝肝硬化遺傳易感性關系的相關性研究[D];山東大學;2005年

7 熊盛;重組人源抗HBsAg單鏈抗體在大腸桿菌和巴氏畢赤酵母中的表達、純化與性質(zhì)鑒定[D];華南理工大學;2002年

8 李玲;激活誘導細胞死亡在乙型肝炎發(fā)病機制中的意義[D];第三軍醫(yī)大學;2001年

9 李樹龍;乙肝纖維化分期相關血漿標志物的定量蛋白質(zhì)組研究[D];中國人民解放軍軍事醫(yī)學科學院;2007年

10 王軍;檢測乙型肝炎病毒S區(qū)“α”決定簇145位點突變株方法的建立及應用研究[D];東北師范大學;2008年

相關碩士學位論文 前10條

1 馬穎;阿德福韋酯片治療慢性乙型病毒性肝炎的療效和安全性研究的方案設計與實施階段小結[D];四川大學;2005年

2 陳麗英;慢性丙型肝炎患者糖尿病并發(fā)率調(diào)查及其臨床特征分析[D];吉林大學;2005年

3 石少媛;人類白細胞抗原-DRB1基因多態(tài)性與山西地區(qū)家族性乙肝的相關性研究[D];山西醫(yī)科大學;2010年

4 張駿飛;拉米夫定治療乙型肝炎肝衰竭的臨床觀察[D];安徽醫(yī)科大學;2011年

5 曹宏;妊娠期乙型肝炎危險因素的探討[D];天津醫(yī)科大學;2003年

6 王秀娟;干擾素聯(lián)合胸腺肽α1治療免疫耐受期乙肝病毒攜帶者的實驗研究[D];吉林大學;2005年

7 劉曉梅;胸腺肽α1抗乙型肝炎病毒作用的研究[D];吉林大學;2006年

8 何夏婷;高校學生乙型肝炎知識—態(tài)度—行為問卷的編制、評價以及應用[D];暨南大學;2010年

9 福軍亮;乙型肝炎患者CD4～+CD25～+調(diào)節(jié)性T細胞特點和肝病進展相關性研究[D];中國人民解放軍軍醫(yī)進修學院;2006年

10 谷軍生;慢性病毒性乙型肝炎急性發(fā)作后體內(nèi)免疫動力學研究[D];鄭州大學;2005年

，

本文編號：1441062