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云南省異盤(pán)并殖吸蟲(chóng)的形態(tài)和分子標(biāo)記研究

發(fā)布時(shí)間:2018-01-18 09:26

  本文關(guān)鍵詞:云南省異盤(pán)并殖吸蟲(chóng)的形態(tài)和分子標(biāo)記研究 出處:《昆明醫(yī)學(xué)院》2010年碩士論文 論文類(lèi)型:學(xué)位論文


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【摘要】: [目的]在形態(tài)學(xué)分類(lèi)的基礎(chǔ)上,結(jié)合DNA序列分析的方法深入研究異盤(pán)并殖吸蟲(chóng)的蟲(chóng)種獨(dú)立性,及其在并殖科吸蟲(chóng)中的分類(lèi)學(xué)地位,建立基因進(jìn)化樹(shù),確定云南省異盤(pán)并殖吸蟲(chóng)與其他地區(qū)相同或不同蟲(chóng)種間的親緣關(guān)系,逐步澄清并殖科吸蟲(chóng)的蟲(chóng)種爭(zhēng)議,探討更加客觀和易于鑒定的分類(lèi)學(xué)方法,并為進(jìn)一步研究各蟲(chóng)種的生物學(xué)特性、地理分布、對(duì)人體的致病性,以及開(kāi)展相關(guān)的防治工作奠定重要基礎(chǔ),為云南省并殖吸蟲(chóng)的研究和并殖吸蟲(chóng)病的防治提供有價(jià)值的科學(xué)依據(jù)。 [方法]從異盤(pán)并殖吸蟲(chóng)流行區(qū)采集溪蟹,經(jīng)分類(lèi)鑒定后分離囊蚴,感染實(shí)驗(yàn)動(dòng)物大白鼠獲得成蟲(chóng)和蟲(chóng)卵。觀察囊蚴、成蟲(chóng)及蟲(chóng)卵形態(tài),并測(cè)量其大;掃描電鏡觀察成蟲(chóng)的皮棘形態(tài)特征。用試劑盒分別提取囊蚴和成蟲(chóng)的DNA,利用ITS2和CO1引物體外擴(kuò)增獲得ITS2和CO1基因序列,通過(guò)GenBank的Blast程序和DNASTAR的MagAlign程序進(jìn)行基因的同源性分析,使用MAGE 4.0軟件構(gòu)建基因進(jìn)化樹(shù)。 [結(jié)果]本次共采集到兩類(lèi)溪蟹,分類(lèi)地位隸屬于溪蟹總科,溪蟹科,溪蟹屬,分別為景洪溪蟹和毛足溪蟹;景洪溪蟹頭胸甲表面較隆,暗紅色,分區(qū)明顯,前側(cè)緣具有細(xì)齒10余個(gè);兩螯不對(duì)稱,以右螯為大;雄性第1腹肢粗壯,倒數(shù)第2節(jié)長(zhǎng)度約為末節(jié)的3.6倍,末緣似山峰樣起伏,尖銳指向外方;雄性尾節(jié)三角形,雌性尾節(jié)半圓形。毛足溪蟹頭胸甲表面扁平,暗褐色,具有短剛毛,前側(cè)緣具有細(xì)齒13-15個(gè);兩螯稍不對(duì)稱;第3顎足外肢有短鞭;雄性第1腹肢扁平,倒數(shù)第2節(jié)長(zhǎng)度約為末節(jié)的3.0倍;雄性腹部呈三角形,尾節(jié)長(zhǎng)三角形;雌性腹部卵圓形,尾節(jié)半圓形。 異盤(pán)并殖吸蟲(chóng)活體成蟲(chóng)肉紅色,作蛭樣運(yùn)動(dòng)。輕壓固定后呈橢圓形,蟲(chóng)體寬長(zhǎng)比為1:1.56-2.12?诟刮P(pán)比為1.62-2.09:1,口吸盤(pán)明顯大于腹吸盤(pán)。卵巢多位于腹吸盤(pán)左側(cè),前緣位于腹吸盤(pán)水平前后,分支細(xì)而多;子宮管狀蟠曲成團(tuán),與卵巢并列、大于卵巢,其前緣多超過(guò)腹吸盤(pán)水平,并與腹吸盤(pán)部分或完全重疊。睪丸分別位于卵巢和子宮團(tuán)的下方,中心部較小,分支末端常有顯著膨大。異盤(pán)并殖吸蟲(chóng)囊蚴多呈橢圓形,具有二層囊壁,外壁薄而均勻,內(nèi)壁遠(yuǎn)較外壁厚且兩極增厚明顯,內(nèi)外壁之間的間隙明顯。異盤(pán)并殖吸蟲(chóng)蟲(chóng)卵多呈卵圓形,金黃色,絕大多數(shù)兩側(cè)對(duì)稱;卵殼厚薄不均勻,末端增厚明顯;卵蓋位于較寬一端,肩峰多明顯;掃描電鏡觀察成蟲(chóng)體表被有單生型皮棘,蟲(chóng)體前中部皮棘密集,排列規(guī)則;蟲(chóng)體后部皮棘稀疏,排列不規(guī)則,形狀似尖刀狀或三角形;口吸盤(pán)內(nèi)壁為縱向皺襞,腹吸盤(pán)內(nèi)壁為環(huán)形皺襞。 通過(guò)Blast同源性比較,來(lái)自中國(guó)云南與印度Arunachal和Manipur地區(qū)的異盤(pán)并殖吸蟲(chóng)ITS2基因同源性為98%,與泰國(guó)Saraburi地區(qū)的異盤(pán)并殖吸蟲(chóng)ITS2同源性99%,與中國(guó)云南的豐宮和印度的衛(wèi)氏并殖吸蟲(chóng)ITS2同源性分別為95%和93%;來(lái)自中國(guó)云南與泰國(guó)、越南、中國(guó)廣西地區(qū)的異盤(pán)并殖吸蟲(chóng)CO1基因同源性為98%,與來(lái)自印度的異盤(pán)并殖吸蟲(chóng)CO1基因同源性為91%。ITS2和CO1基因進(jìn)化樹(shù)顯示已報(bào)道的所有異盤(pán)并殖吸蟲(chóng)聚為一支,與其它蟲(chóng)種間差異明顯。 [結(jié)論]云南的景洪溪蟹和毛足溪蟹是異盤(pán)并殖吸蟲(chóng)的第二中間宿主。家貓對(duì)異盤(pán)并殖吸蟲(chóng)的易感性明顯優(yōu)于SD大鼠,家貓是異盤(pán)并殖吸蟲(chóng)的理想實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型;而大鼠則不理想。云南省存在的異盤(pán)并殖吸蟲(chóng)與其它地區(qū)報(bào)道的異盤(pán)并殖吸蟲(chóng)無(wú)明顯形態(tài)學(xué)差異。DNA序列分析顯示來(lái)自不同地區(qū)的異盤(pán)并殖吸蟲(chóng)同源性極高,進(jìn)化樹(shù)上聚類(lèi)為一支,獨(dú)立于其它蟲(chóng)種之外。
[Abstract]:On the basis of morphological classification , the author further studies the species independence of the different species and the taxonomic status of the species in the same or different species , and establishes a genetic evolutionary tree to determine the genetic relationships among the species of different species in Yunnan Province , and to establish a more objective and easy - to - identify taxonomic method , and to provide a valuable scientific basis for further study on the biological characteristics , geographical distribution , pathogenicity of the species and the related prevention and control work . In this paper , the morphological characteristics of adult worms and eggs were observed by using the kit . The DNA of the cysts , adults and eggs was observed by scanning electron microscope . The sequences of the ITS2 and CO1 genes were amplified by using ITS2 and CO1 , and the gene sequences were amplified by the BLAST program of GenBank and MagAlign program of DNASTAR . The gene was constructed by using MAGE 4.0 software . There are two kinds of river crabs collected in this time . The classification status belongs to the general family of the river crab , the river crab family and the river crab , which are respectively the JingHongxi crab and the hairy foot flow crab ; the front side edge of the crab head of the river crab is long , dark red , the partition is obvious , the front side edge has more than 10 fine teeth ; the two chelators are slightly asymmetrical ; the length of the second section of the third jaw foot is about 3.0 times of the last section ; the male abdomen is triangular , the tail section is long triangle ; the female abdomen is oval , and the tail section is semicircular . The present invention is characterized by the following : 1 : 1 : 1 : 1 . 56 - 2 . 12 . The ratio of the width to length is 1 : 1 . 56 - 2 . 12 . The ratio of the diameter of the abdomen to the abdomen is 1 : 1 . 56 - 2 . 12 . The homology of ITS2 gene from Yunnan and Arunachal and Manipur areas of China was 98 % . The homology of ITS2 was 95 % and 93 % respectively . Conclusion There is no significant difference in the susceptibility of domestic cats to the different regions , but there is no obvious morphological difference between the two species . The DNA sequence analysis shows that there is a very high homology among the different species in Yunnan Province , and the evolution tree cluster is one , independent of the other species .

【學(xué)位授予單位】:昆明醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】:碩士
【學(xué)位授予年份】:2010
【分類(lèi)號(hào)】:R383.23

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本文編號(hào):1440352

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