本文關鍵詞：DFP對慢性鋁染毒大鼠腦組織中氨基酸類神經遞質的調節(jié)機制的研究　出處：《山東大學》2009年碩士論文　論文類型：學位論文

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【摘要】： 【目的】 鋁在自然界中廣泛存在,由于其具有良好的理化特性,普遍應用于工業(yè)、醫(yī)藥和日常生活中,人們接觸鋁的機會大大增加,主要通過食品添加劑、含鋁藥物、鋁制炊具和其他鋁制品攝入體內。研究表明,鋁是一種慢性蓄積性神經毒物,長期接觸鋁可引起學習記憶功能減退、認知功能障礙等癡呆癥狀,過量的鋁蓄積可產生神經毒性,引起神經退行性病變,鋁在Alzheimer型老年性癡呆、透析性癡呆等疾病中發(fā)揮的毒性作用已得到許多學者的肯定。腦內氨基酸類神經遞質按其功能分為興奮性氨基酸類神經遞質和抑制性氨基酸類神經遞質,谷氨酸(Glu)和天門冬氨(Asp)為興奮性神經遞質,甘氨酸(G1y)和γ-氨基丁酸(GABA)為抑制性神經遞質,研究表明,氨基酸類神經遞質含量的改變與神經退行性變、腦損傷、學習記憶密切相關。目前,臨床上大多使用鋁螯合劑治療由于鋁負荷過多引起的疾病,本研究將1,2-二甲基-3-羥基-4-吡啶酮(DFP)作為一種新型鋁螯合劑,以Wistar大鼠為研究對象,建立腦組織中氨基酸類神經遞質測定的高效液相色譜法,通過研究DFP對鋁染毒大鼠的學習記憶能力、腦組織中氨基酸類神經遞質的含量及腦組織病理損傷的恢復和改善作用,來評價DFP對大鼠中樞神經系統(tǒng)的保護作用,同時通過測定大鼠腦組織中鋁和其它必需元素含量,探討DFP排鋁作用及對其它必需元素的影響。 【方法】 1實驗動物模型的建立 健康雄性Wistar大鼠35只,體重180-220g,自由飲水和進食,按體重隨機分成5個組,即陰性對照組,鋁染毒組,DFP+低劑量組,DFP+中劑量組,DFP+高劑量組,均以灌胃方式給藥。除陰性對照組外其余各組均給予AlCl_3溶液進行染毒,染毒8周后,陰性對照組、鋁染毒組給予生理鹽水2周,DFP低、中、高劑量組給予DFP2周。 2 DFP對鋁染毒大鼠學習記憶能力的改善 實驗結束前兩天,進行大鼠迷宮實驗,觀察DFP對鋁染毒大鼠學習記憶能力的改善情況。 3大鼠腦組織中氨基酸類神經遞質測定的方法學研究 采用丹酰氯柱前衍生,高效液相色譜一紫外檢測法測定大鼠腦組織中氨基酸類神經遞質的含量。 色譜條件:大連依利特Hypersil-2 C_(18)(4.6mm×250mm,5μm)色譜柱;流動相:A:甲醇,B:四氫呋喃.甲醇-0.05mol/L醋酸鈉(V:V:V=1:15:84),梯度洗脫,流速:0.6ml.min~(-1);紫外檢測器,波長為254nm;進樣量:20μl。 4 DFP對鋁染毒大鼠腦組織中氨基酸類神經遞質含量的影響 給藥結束后,斷頭處死大鼠,分離并準確稱取一定量腦組織,按比例加入生理鹽水,冰浴中充分勻漿,甲醇沉淀蛋白,離心,取上清液加入100μl 2mol/LKHCO_3溶液,200μl丹酰氯-丙酮(4g/L),混勻,80℃水浴,暗中反應40min,取出后加入200μl 0.1mol/L的鹽酸溶液停止反應,冷卻后20μl進樣,高效液相色譜-紫外檢測法測定腦組織中天門冬氨酸、谷氨酸、甘氨酸、γ-氨基丁酸四種氨基酸類神經遞質的含量。 5 DFP對鋁染毒大鼠腦組織中排鋁作用的研究 取各組大鼠腦組織,稱重,用微波消解儀消化后,石墨爐原子吸收分光光度法測定腦組織中鋁含量,觀察DFP的排鋁效果。 6 DFP對鋁染毒大鼠腦組織中其它必需元素的影響 取各組大鼠腦組織,稱重,用微波消解儀消化后,火焰原子吸收分光光度法測定大鼠腦組織中的銅、鋅、鈣、鐵、鎂含量,研究DFP對鋁染毒大鼠腦組織中必需元素的影響。 7 DFP對鋁致腦組織損傷恢復的形態(tài)學觀察 取各組大鼠腦組織,蘇木素.伊紅染色(HE)染色,進行病理學觀察,觀察鋁對大鼠中樞神經系統(tǒng)的病理形態(tài)學改變及DFP對其恢復作用。 【結果】 1 DFP對鋁染毒大鼠學習記憶能力的改善 大鼠迷宮實驗中,鋁染毒組大鼠全天總反應時間(TRT)明顯高于陰性對照組(P＜0.01),低劑量組高于陰性對照組(P＜0.05),中劑量組與高劑量組與陰性對照組比較差異均無統(tǒng)計學意義,低、中、高劑量組顯著低于鋁染毒組(P＜0.01);鋁染毒組與低劑量組大鼠錯誤次數(shù)顯著多于陰性對照組(P＜0.01),低、中、高劑量組均顯著少于鋁染毒組(P＜0.01),中劑量組與高劑量組與陰性對照組比較差異無統(tǒng)計學意義。 2高效液相色譜測定大鼠腦組織中氨基酸類神經遞質含量的方法學研究 在給定的條件下,大鼠腦組織中四種氨基酸在35min內分離完全且分離良好,保留時間分別為天門冬氨酸(10.48min)、谷氨酸(11.92min)、甘氨酸(30.76min)、γ-氨基丁酸(33.45min);四種氨基酸在20～200μg/ml范圍內,線性關系良好(r≥0.999);天門冬氨酸最低檢出濃度為1.5×10~(-3)mg/L,加標回收率為84.1%～108.8%,日內精密度RSD為0.52%～2.90%,日間精密度RSD為1.60%～4.66%;谷氨酸最低檢出濃度為1.8×10~(-3)mg/L,加標回收率為82.4%～109.2%,日內精密度RSD為1.23%～2.37%,日間精密度RSD為3.04%～5.43%:甘氨酸最低檢出濃度為0.3×10~(-3)mg/L,加標回收率為87.1%～109%,日內精密度RSD為1.01%～3.15%,日間精密度RSD為1.23%～4.87%;γ-氨基丁酸最低檢出濃度為0.5×10~(-3)mg/L,加標回收率為83.1%～104.9%,日內精密度RSD為0.72%～3.84%,日間精密度RSD為1.60%～5.76%。 3 DFP對鋁染毒大鼠腦組織中氨基酸類神經遞質含量的影響 鋁染毒組大鼠腦組織中興奮性氨基酸類神經遞質天門冬氨酸(Asp)和谷氨酸(Glu)的含量顯著低于陰性對照組(P＜0.01),低、中、高劑量組均高于鋁染毒組(P＜0.01),但仍低于陰性對照組(P＜0.01)。鋁染毒組大鼠腦組織中抑制性氨基酸類神經遞質甘氨酸(Gly)和γ-氨基丁酸(GABA)的含量顯著高于陰性對照組(P＜0.01),低、中、高劑量組均低于鋁染毒組(P＜0.01),但仍高于陰性對照組(P＜0.01)。 4 DFP對鋁染毒大鼠腦組織中鋁的排出作用 鋁染毒組大鼠血清鋁含量明顯高于陰性對照組,差異具有顯著性(P＜0.01),高劑量組明顯低于鋁染毒組(P＜0.01),但各給藥組尚高于陰性對照組(P＜0.01);鋁染毒組大鼠腦鋁含量高于陰性對照組(P＜0.01),低、中、高劑量組腦鋁含量低于鋁染毒組(P＜0.01),高劑量組與陰性對照組比較,差異無統(tǒng)計學意義。 5 DFP對鋁染毒大鼠腦組織中其它必需元素的影響 鋁染毒組大鼠腦組織中鋅含量顯著高于陰性對照組(P＜0.05),其它各組與陰性對照組及鋁染毒組相比較差異均無統(tǒng)計學意義;各組大鼠腦組織中銅、鐵、鈣、鎂的含量比較差異無統(tǒng)計學意義。 6 DFP對鋁致大鼠腦組織損傷恢復的形態(tài)學觀察 鋁染毒組大鼠腦組織有明顯的病理改變,各劑量組與鋁染毒組相比神經元細胞基本正常;各劑量組中,高劑量組恢復情況較好,基本恢復到正常。 【結論】 1 DFP能夠有效地改善鋁染毒大鼠的學習記憶能力。 2本研究建立的高效液相色譜測定腦組織中氨基酸類神經遞質含量的方法具有快速、準確、靈敏、樣品制備簡便等優(yōu)點,能夠有效地分離、測定大鼠腦組織中氨基酸類神經遞質的含量。 3 DFP能夠升高鋁染毒大鼠腦組織中興奮性氨基酸類神經遞質的含量,降低抑制性氨基酸類神經遞質的含量,對中樞神經系統(tǒng)有明顯的保護作用。 4 DFP排鋁效果顯著,同時對其它必需元素鋅、鎂、鈣、銅、鐵均無促排作用。 5 DFP對鋁蓄積引起的腦組織病理損害有一定的保護作用。
[Abstract]:......
【學位授予單位】：山東大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2009
【分類號】：R363

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