本文關(guān)鍵詞：DFP對(duì)慢性鋁染毒大鼠腦組織中氨基酸類(lèi)神經(jīng)遞質(zhì)的調(diào)節(jié)機(jī)制的研究　出處：《山東大學(xué)》2009年碩士論文　論文類(lèi)型：學(xué)位論文

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【摘要】： 【目的】 鋁在自然界中廣泛存在,由于其具有良好的理化特性,普遍應(yīng)用于工業(yè)、醫(yī)藥和日常生活中,人們接觸鋁的機(jī)會(huì)大大增加,主要通過(guò)食品添加劑、含鋁藥物、鋁制炊具和其他鋁制品攝入體內(nèi)。研究表明,鋁是一種慢性蓄積性神經(jīng)毒物,長(zhǎng)期接觸鋁可引起學(xué)習(xí)記憶功能減退、認(rèn)知功能障礙等癡呆癥狀,過(guò)量的鋁蓄積可產(chǎn)生神經(jīng)毒性,引起神經(jīng)退行性病變,鋁在Alzheimer型老年性癡呆、透析性癡呆等疾病中發(fā)揮的毒性作用已得到許多學(xué)者的肯定。腦內(nèi)氨基酸類(lèi)神經(jīng)遞質(zhì)按其功能分為興奮性氨基酸類(lèi)神經(jīng)遞質(zhì)和抑制性氨基酸類(lèi)神經(jīng)遞質(zhì),谷氨酸(Glu)和天門(mén)冬氨(Asp)為興奮性神經(jīng)遞質(zhì),甘氨酸(G1y)和γ-氨基丁酸(GABA)為抑制性神經(jīng)遞質(zhì),研究表明,氨基酸類(lèi)神經(jīng)遞質(zhì)含量的改變與神經(jīng)退行性變、腦損傷、學(xué)習(xí)記憶密切相關(guān)。目前,臨床上大多使用鋁螯合劑治療由于鋁負(fù)荷過(guò)多引起的疾病,本研究將1,2-二甲基-3-羥基-4-吡啶酮(DFP)作為一種新型鋁螯合劑,以Wistar大鼠為研究對(duì)象,建立腦組織中氨基酸類(lèi)神經(jīng)遞質(zhì)測(cè)定的高效液相色譜法,通過(guò)研究DFP對(duì)鋁染毒大鼠的學(xué)習(xí)記憶能力、腦組織中氨基酸類(lèi)神經(jīng)遞質(zhì)的含量及腦組織病理?yè)p傷的恢復(fù)和改善作用,來(lái)評(píng)價(jià)DFP對(duì)大鼠中樞神經(jīng)系統(tǒng)的保護(hù)作用,同時(shí)通過(guò)測(cè)定大鼠腦組織中鋁和其它必需元素含量,探討DFP排鋁作用及對(duì)其它必需元素的影響。 【方法】 1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型的建立 健康雄性Wistar大鼠35只,體重180-220g,自由飲水和進(jìn)食,按體重隨機(jī)分成5個(gè)組,即陰性對(duì)照組,鋁染毒組,DFP+低劑量組,DFP+中劑量組,DFP+高劑量組,均以灌胃方式給藥。除陰性對(duì)照組外其余各組均給予AlCl_3溶液進(jìn)行染毒,染毒8周后,陰性對(duì)照組、鋁染毒組給予生理鹽水2周,DFP低、中、高劑量組給予DFP2周。 2 DFP對(duì)鋁染毒大鼠學(xué)習(xí)記憶能力的改善 實(shí)驗(yàn)結(jié)束前兩天,進(jìn)行大鼠迷宮實(shí)驗(yàn),觀察DFP對(duì)鋁染毒大鼠學(xué)習(xí)記憶能力的改善情況。 3大鼠腦組織中氨基酸類(lèi)神經(jīng)遞質(zhì)測(cè)定的方法學(xué)研究 采用丹酰氯柱前衍生,高效液相色譜一紫外檢測(cè)法測(cè)定大鼠腦組織中氨基酸類(lèi)神經(jīng)遞質(zhì)的含量。 色譜條件:大連依利特Hypersil-2 C_(18)(4.6mm×250mm,5μm)色譜柱;流動(dòng)相:A:甲醇,B:四氫呋喃.甲醇-0.05mol/L醋酸鈉(V:V:V=1:15:84),梯度洗脫,流速:0.6ml.min~(-1);紫外檢測(cè)器,波長(zhǎng)為254nm;進(jìn)樣量:20μl。 4 DFP對(duì)鋁染毒大鼠腦組織中氨基酸類(lèi)神經(jīng)遞質(zhì)含量的影響 給藥結(jié)束后,斷頭處死大鼠,分離并準(zhǔn)確稱(chēng)取一定量腦組織,按比例加入生理鹽水,冰浴中充分勻漿,甲醇沉淀蛋白,離心,取上清液加入100μl 2mol/LKHCO_3溶液,200μl丹酰氯-丙酮(4g/L),混勻,80℃水浴,暗中反應(yīng)40min,取出后加入200μl 0.1mol/L的鹽酸溶液停止反應(yīng),冷卻后20μl進(jìn)樣,高效液相色譜-紫外檢測(cè)法測(cè)定腦組織中天門(mén)冬氨酸、谷氨酸、甘氨酸、γ-氨基丁酸四種氨基酸類(lèi)神經(jīng)遞質(zhì)的含量。 5 DFP對(duì)鋁染毒大鼠腦組織中排鋁作用的研究 取各組大鼠腦組織,稱(chēng)重,用微波消解儀消化后,石墨爐原子吸收分光光度法測(cè)定腦組織中鋁含量,觀察DFP的排鋁效果。 6 DFP對(duì)鋁染毒大鼠腦組織中其它必需元素的影響 取各組大鼠腦組織,稱(chēng)重,用微波消解儀消化后,火焰原子吸收分光光度法測(cè)定大鼠腦組織中的銅、鋅、鈣、鐵、鎂含量,研究DFP對(duì)鋁染毒大鼠腦組織中必需元素的影響。 7 DFP對(duì)鋁致腦組織損傷恢復(fù)的形態(tài)學(xué)觀察 取各組大鼠腦組織,蘇木素.伊紅染色(HE)染色,進(jìn)行病理學(xué)觀察,觀察鋁對(duì)大鼠中樞神經(jīng)系統(tǒng)的病理形態(tài)學(xué)改變及DFP對(duì)其恢復(fù)作用。 【結(jié)果】 1 DFP對(duì)鋁染毒大鼠學(xué)習(xí)記憶能力的改善 大鼠迷宮實(shí)驗(yàn)中,鋁染毒組大鼠全天總反應(yīng)時(shí)間(TRT)明顯高于陰性對(duì)照組(P＜0.01),低劑量組高于陰性對(duì)照組(P＜0.05),中劑量組與高劑量組與陰性對(duì)照組比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,低、中、高劑量組顯著低于鋁染毒組(P＜0.01);鋁染毒組與低劑量組大鼠錯(cuò)誤次數(shù)顯著多于陰性對(duì)照組(P＜0.01),低、中、高劑量組均顯著少于鋁染毒組(P＜0.01),中劑量組與高劑量組與陰性對(duì)照組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 2高效液相色譜測(cè)定大鼠腦組織中氨基酸類(lèi)神經(jīng)遞質(zhì)含量的方法學(xué)研究 在給定的條件下,大鼠腦組織中四種氨基酸在35min內(nèi)分離完全且分離良好,保留時(shí)間分別為天門(mén)冬氨酸(10.48min)、谷氨酸(11.92min)、甘氨酸(30.76min)、γ-氨基丁酸(33.45min);四種氨基酸在20～200μg/ml范圍內(nèi),線(xiàn)性關(guān)系良好(r≥0.999);天門(mén)冬氨酸最低檢出濃度為1.5×10~(-3)mg/L,加標(biāo)回收率為84.1%～108.8%,日內(nèi)精密度RSD為0.52%～2.90%,日間精密度RSD為1.60%～4.66%;谷氨酸最低檢出濃度為1.8×10~(-3)mg/L,加標(biāo)回收率為82.4%～109.2%,日內(nèi)精密度RSD為1.23%～2.37%,日間精密度RSD為3.04%～5.43%:甘氨酸最低檢出濃度為0.3×10~(-3)mg/L,加標(biāo)回收率為87.1%～109%,日內(nèi)精密度RSD為1.01%～3.15%,日間精密度RSD為1.23%～4.87%;γ-氨基丁酸最低檢出濃度為0.5×10~(-3)mg/L,加標(biāo)回收率為83.1%～104.9%,日內(nèi)精密度RSD為0.72%～3.84%,日間精密度RSD為1.60%～5.76%。 3 DFP對(duì)鋁染毒大鼠腦組織中氨基酸類(lèi)神經(jīng)遞質(zhì)含量的影響 鋁染毒組大鼠腦組織中興奮性氨基酸類(lèi)神經(jīng)遞質(zhì)天門(mén)冬氨酸(Asp)和谷氨酸(Glu)的含量顯著低于陰性對(duì)照組(P＜0.01),低、中、高劑量組均高于鋁染毒組(P＜0.01),但仍低于陰性對(duì)照組(P＜0.01)。鋁染毒組大鼠腦組織中抑制性氨基酸類(lèi)神經(jīng)遞質(zhì)甘氨酸(Gly)和γ-氨基丁酸(GABA)的含量顯著高于陰性對(duì)照組(P＜0.01),低、中、高劑量組均低于鋁染毒組(P＜0.01),但仍高于陰性對(duì)照組(P＜0.01)。 4 DFP對(duì)鋁染毒大鼠腦組織中鋁的排出作用 鋁染毒組大鼠血清鋁含量明顯高于陰性對(duì)照組,差異具有顯著性(P＜0.01),高劑量組明顯低于鋁染毒組(P＜0.01),但各給藥組尚高于陰性對(duì)照組(P＜0.01);鋁染毒組大鼠腦鋁含量高于陰性對(duì)照組(P＜0.01),低、中、高劑量組腦鋁含量低于鋁染毒組(P＜0.01),高劑量組與陰性對(duì)照組比較,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 5 DFP對(duì)鋁染毒大鼠腦組織中其它必需元素的影響 鋁染毒組大鼠腦組織中鋅含量顯著高于陰性對(duì)照組(P＜0.05),其它各組與陰性對(duì)照組及鋁染毒組相比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;各組大鼠腦組織中銅、鐵、鈣、鎂的含量比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 6 DFP對(duì)鋁致大鼠腦組織損傷恢復(fù)的形態(tài)學(xué)觀察 鋁染毒組大鼠腦組織有明顯的病理改變,各劑量組與鋁染毒組相比神經(jīng)元細(xì)胞基本正常;各劑量組中,高劑量組恢復(fù)情況較好,基本恢復(fù)到正常。 【結(jié)論】 1 DFP能夠有效地改善鋁染毒大鼠的學(xué)習(xí)記憶能力。 2本研究建立的高效液相色譜測(cè)定腦組織中氨基酸類(lèi)神經(jīng)遞質(zhì)含量的方法具有快速、準(zhǔn)確、靈敏、樣品制備簡(jiǎn)便等優(yōu)點(diǎn),能夠有效地分離、測(cè)定大鼠腦組織中氨基酸類(lèi)神經(jīng)遞質(zhì)的含量。 3 DFP能夠升高鋁染毒大鼠腦組織中興奮性氨基酸類(lèi)神經(jīng)遞質(zhì)的含量,降低抑制性氨基酸類(lèi)神經(jīng)遞質(zhì)的含量,對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)有明顯的保護(hù)作用。 4 DFP排鋁效果顯著,同時(shí)對(duì)其它必需元素鋅、鎂、鈣、銅、鐵均無(wú)促排作用。 5 DFP對(duì)鋁蓄積引起的腦組織病理?yè)p害有一定的保護(hù)作用。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2009
【分類(lèi)號(hào)】：R363

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本文編號(hào)：1436064