本文關(guān)鍵詞：綠膿桿菌SecA ATPase抑制劑篩選模型的建立和應(yīng)用　出處：《中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué)》2010年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】： 綠膿桿菌是一種重要的院內(nèi)感染條件致病菌。它可以引起多種類型的感染,并多為天然耐多種抗生素菌株,感染后不易被控制。近年來,由于廣譜抗生素的大量使用以及藥物的聯(lián)合治療,導(dǎo)致了多藥耐藥株以及泛耐藥株的急速出現(xiàn)。因此,迫切需要發(fā)現(xiàn)新型低毒、高效抗綠膿桿菌藥物。 Sec (secretion pathway)途徑是細(xì)胞蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)中的主要途徑,SecA是Sec途徑中唯一已知的能量轉(zhuǎn)化酶,可通過水解循環(huán)驅(qū)使蛋白質(zhì)前體穿過細(xì)菌內(nèi)膜,是細(xì)菌所獨(dú)有且不可缺少的。因此,本研究選擇SecA為藥物的靶點(diǎn)并建立相應(yīng)的藥物篩選模型,以期發(fā)現(xiàn)新型高效低毒的抗綠膿桿菌藥物。 本研究首先克隆和表達(dá)了PaSecAN68(綠膿桿菌SecA蛋白N端609個(gè)氨基酸殘基組成的片段,大小約68kDa)和PaSecAN75(綠膿桿菌SecA蛋白N端645個(gè)氨基酸殘基組成的片段,大小約75kDa)蛋白并研究其酶學(xué)性質(zhì)。選擇酶活較高的PaSecAN75作為靶酶,建立和優(yōu)化了兩種綠膿桿菌SecA ATPase抑制劑酶水平篩選模型。采用孔雀綠比色法篩選了3220個(gè)化合物樣品,得到4個(gè)陽(yáng)性樣品；采用NADH比色法篩選了7196個(gè)發(fā)酵液樣品,得到66個(gè)陽(yáng)性樣品。隨后,又運(yùn)用細(xì)胞水平綠膿桿菌SecA ATPase篩選模型,對(duì)上述陽(yáng)性樣品進(jìn)行了復(fù)篩,最終確定了3個(gè)陽(yáng)性化合物樣品和6個(gè)陽(yáng)性發(fā)酵液樣品,這些樣品在酶水平和細(xì)胞水平對(duì)綠膿桿菌SecA ATPase均有較好的抑制作用,為進(jìn)一步發(fā)展新型抗綠膿桿菌藥物奠定了基礎(chǔ)。
[Abstract]:Pseudomonas aeruginosa is an important opportunistic pathogen of nosocomial infection. It can cause many kinds of infections, and most of them are natural antibiotic resistant strains, which are difficult to control after infection. Due to the extensive use of broad-spectrum antibiotics and the combined treatment of drugs, multidrug resistant strains and pan-resistant strains appear rapidly. Therefore, there is an urgent need to find new low-toxic and high-effective anti-Pseudomonas aeruginosa drugs. The Sec section-pathway pathway is the main pathway in cell protein transport. Seca is the only known energy converting enzyme in the Sec pathway. It is unique and indispensable for bacteria to drive protein precursors through endobacterial membrane by hydrolysis cycle. Therefore, SecA was selected as the target of drug and the drug screening model was established. In order to find a new effective and low-toxic anti-Pseudomonas aeruginosa drug. In this study, we first cloned and expressed a fragment composed of 609 amino acid residues at the N-terminal of SecA protein of Pseudomonas aeruginosa. A fragment consisting of 645 amino acid residues at the N-terminal of SecA protein of Pseudomonas aeruginosa and PaSecAN75. the size of which is about 68 kDa. The size of the protein was about 75kDa and its enzymatic properties were studied. PaSecAN75 with high enzyme activity was selected as the target enzyme. Two SecA ATPase inhibitor enzyme level screening models were established and optimized. The samples of 321 compounds were screened by malachite green colorimetry and 4 positive samples were obtained. A total of 7196 fermentation broth samples were screened by NADH colorimetry, and 66 positive samples were obtained. Then, the cell-level SecA ATPase model was used to screen Pseudomonas aeruginosa. Three positive compound samples and six positive fermentation broth samples were determined. These samples can inhibit SecA ATPase of Pseudomonas aeruginosa at the enzyme level and cell level, which lays a foundation for the further development of new anti-Pseudomonas aeruginosa drugs.
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類號(hào)】：R378

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