本文關鍵詞：gx-50對β淀粉樣蛋白所誘導小膠質細胞趨化性的影響　出處：《上海交通大學》2014年碩士論文　論文類型：學位論文

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【摘要】：小膠質細胞是神經膠質細胞的一種，約占大腦中的神經膠質細胞的10～20%。目前的研究認為小膠質細胞是常駐在神經組織中一種免疫細胞，它能清除中樞神經系統(tǒng)中的損壞的神經元，斑塊及感染性物質。在阿爾茲海默癥（Alzheimer‘s disease,AD）的發(fā)展過程中小膠質細胞起著非常重要的作用。腦內老年斑是AD特征性病理表現(xiàn)之一，其主要成分β-淀粉樣蛋白（β-amyloid,Aβ）。過度活化的小膠質細胞聚集在Aβ周圍持續(xù)釋放一些炎性因子，引起神經組織炎癥反應和神經元變性。因此，通過抑制過多的小膠質細胞向Aβ遷移，可以減少小膠質細胞的過度活化，減輕神經炎癥和神經元的變性。gx-50是從花椒中提取的一種活性成分，我們實驗室的前期研究發(fā)現(xiàn)gx-50可以有效抑制LPS誘導巨噬細胞釋放炎性因子,并能夠抑制Aβ誘導的大鼠神經元細胞的凋亡。本研究的目的是探討gx-50對Aβ所誘導的大鼠小膠質細胞趨化反應的影響。 研究方法： 我們采用CCK-8的方法檢測不同濃度的gx-50對小膠質細胞活性的影響。采用transwell法檢測gx-50對大鼠小膠質細胞向Aβ遷移的影響。用ELISA檢測gx-50預處理前后對Aβ誘導小膠質細胞表達趨化因子CCL5和細胞因子TGF-β1的變化情況。使用Real time PCR檢測小膠質細胞表達TGF-β1的影響。采用Western blot檢測小膠質細胞產生相關信號通路中的標志蛋白p-Smad2，Smad7的水平以及另外一種參與小膠質細胞遷移的蛋白p-GSK-3β的表達水平。 結果： 本研究結果顯示：通過CCK-8檢測發(fā)現(xiàn)，經ANOVA分析0.01，0.1，1，10和100μ M的gx-50并沒有顯著影響小膠質細胞的活性，，小膠質細胞的活性較未經處理的相比均達到80%以上。Transwell的實驗結果顯示：gx-50預處理可以減少向Aβ的趨化運動的小膠質細胞的數(shù)目。通過對小膠質細胞趨化因子CCL5的表達進行ELISA檢測，經ANOVA分析顯示，gx-50預處理顯著降低了Aβ所誘導的小膠質細胞CCL5的表達量。使用ELISA和Real time PCR的方法分別在蛋白水平和基因水平上檢測了小膠質細胞中TGF-β1的含量，經ANOVA分析，gx-50預處理之后，TGF-β1的分泌量在基因水平和蛋白水平與Aβ處理組相比顯著升高。Western blot的結果顯示：gx-50預處理與單獨使用Aβ相比，可以增加p-Smad2和p-GSK-3β的表達，降低Smad7的表達，并且經ANOVA分析發(fā)現(xiàn)都達到了顯著水平。我們又對小膠質細胞表達細胞因子及信號通路關鍵分子進行相關回歸分析，結果顯示小膠質細胞中CCL5的表達與Smad7存在著顯著地依存關系，而p-GSK-3β的表達與p-Smad2存在著顯著地依存關系。 結論： 綜上所述，我們的研究結果證實花椒中的成分gx-50能夠減弱小膠質細胞向Aβ的聚集；抑制了小膠質細胞中趨化因子CCL5的表達，減輕了局部的炎癥反應；而經過信號通路分析發(fā)現(xiàn)，gx-50正是由于活化了TGF-β1-smad2信號通路從而抑制了CCL5的分泌；此外gx-50還可以增加GSK-3β的磷酸化從而降低它的活性從而抑制小膠質細胞向Aβ的聚集。由此可見：gx-50可以通過修復Aβ對TGF-β1-smad2信號通路造成的損傷和抑制GSK-3β活性的從而有效地抑制Aβ誘導的小膠質細胞趨化運動，防止Aβ造成的進一步的神經組織炎癥反應，對阿爾茲海默癥的發(fā)病具有一定的延緩作用。
[Abstract]:Microglia are a type of glial cell, accounting for glial cells in the brain of the 10 ~ 20%. current research that microglia are resident in neural tissues for immune cells, it can eliminate the damage of central nervous system neurons, plaque and infectious substances in Alzheimer's disease (. Alzheimer 's disease, AD) in the development of small and medium-sized glial cells play a very important role. Senile plaques in the brain is one of the pathological characteristics of AD, the main component of amyloid beta (beta -amyloid and A beta). Microglial cells activation gathered in A beta around the sustained release of some inflammatory disease factor, cause nerve inflammation and neuronal degeneration. Therefore, the migration to A beta by inhibiting excessive microglia, can reduce the excessive activation of microglia, alleviate nerve inflammation and neuronal degeneration in.Gx-50 is from the pepper An active ingredient extraction, our previous study found that gx-50 can effectively inhibit the LPS induced release of inflammatory cytokines in macrophages, apoptosis and suppresses A beta induced neuronal cells of rats. The purpose of this study is to investigate the effect of gx-50 on A beta induced rat microglial cells chemotaxis.
Research methods:
We used the method of CCK-8 gx-50 detection of different concentrations on the activation of microglial cells was detected by Transwell. The influence of gx-50 on rat microglia to A beta migration. The expression of chemokine CCL5 and cytokine TGF- beta 1 beta on A induced microglial cells before and after pretreatment of ELISA detection gx-50 the use of Real time PCR. Detection of microglia affect the expression of TGF- beta 1. The detection of Western blot microglia in signal pathway related protein markers p-Smad2, Smad7 and another in microglia migration protein p-GSK-3 beta expression level.
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本文編號：1433331