本文關(guān)鍵詞：幽門螺桿菌alpA基因在乳酸菌中的表達(dá)及免疫原性分析　出處：《細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志》2010年03期 　論文類型：期刊論文

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【摘要】：目的:在乳酸菌中表達(dá)幽門螺桿菌(Hp)黏附素al-pA基因,口服免疫小鼠后檢測其免疫原性。方法:PCR方法從基因組中擴(kuò)增alpA基因,將其克隆至表達(dá)載體pNICE:sec,將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化乳酸菌NZ9000株,篩選鑒定陽性菌落,誘導(dǎo)表達(dá)的alpA蛋白用SDS-PAGE和Western blot進(jìn)行鑒定。將雌性ICR(CV級(jí))小鼠隨機(jī)分為4組,分別用PBS、攜帶空質(zhì)粒的乳酸菌、攜帶pNICE:sec-alpA的乳酸菌、滅活的Hp灌胃。免疫7次后檢測其特異性IgG和IgA的產(chǎn)生。結(jié)果:擴(kuò)增alpA基因并構(gòu)建了重組原核表達(dá)質(zhì)粒pNICE:sec-alpA,轉(zhuǎn)化乳酸菌NZ9000后經(jīng)nisin誘導(dǎo)可表達(dá)Mr約56 000的重組蛋白,表達(dá)量約占菌體總蛋白量的9.6%,Western blot分析其能與幽門螺桿菌抗血清特異性反應(yīng),具有良好的免疫原性。攜帶pNICE:sec-alpA質(zhì)粒的乳酸菌刺激產(chǎn)生的IgG水平明顯高于攜帶空質(zhì)粒組,與滅活Hp組沒有明顯的差異,但其刺激產(chǎn)生的IgA水平明顯高于其他組(P0.05)。結(jié)論:表達(dá)al-pA蛋白的乳酸菌口服免疫小鼠后,能夠刺激小鼠產(chǎn)生特異的IgG和IgA,可作為幽門螺桿菌口服疫苗候選抗原。為乳酸菌作為抗原遞送載體的研究和Hp口服疫苗的開發(fā)提供一定的實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
[Abstract]:Objective: to express the adhesion al-pA gene of Helicobacter pylori (HP) in lactic acid bacteria and to detect its immunogenicity after oral immunization. The recombinant plasmid was transformed into NZ9000 strain of lactic acid bacteria, and positive colonies were screened and identified. The induced expression of alpA protein was identified by SDS-PAGE and Western blot. The female ICR(CV mice were randomly divided into 4 groups with PBS. Lactobacillus carrying empty plasmids and lactic acid bacteria carrying pNICE:sec-alpA. The production of specific IgG and IgA were detected after 7 times of immunization. Results: the alpA gene was amplified and the recombinant prokaryotic expression plasmid pNICE:sec-alpA was constructed. After the transformation of lactic acid bacteria NZ9000, the recombinant protein of Mr 56 000 was induced by nisin, and the expression amount was about 9.6% of the total bacterial protein. Western blot analysis showed that it could react specifically with Helicobacter pylori antiserum. The level of IgG produced by lactic acid bacteria carrying pNICE:sec-alpA plasmid was significantly higher than that of empty plasmid group, and there was no significant difference between the two groups. However, the level of IgA stimulated by Lactic acid bacteria was significantly higher than that of other groups (P 0.05). Conclusion: lactic acid bacteria expressing al-pA protein can stimulate mice to produce specific IgG and IgA after oral immunization. It can be used as the candidate antigen of Helicobacter pylori oral vaccine, and provide some experimental basis for the study of lactic acid bacteria as antigen delivery carrier and the development of HP oral vaccine.
【作者單位】： 中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院/北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院醫(yī)學(xué)生物學(xué)研究所;
【基金】：云南省自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(2007C144M)
【分類號(hào)】：R392.11
【正文快照】： 幽門螺桿菌(Helicobacter pylori,Hp)是寄生于胃上皮細(xì)胞表面的革蘭陰性微需氧菌[1],其感染可導(dǎo)致急、慢性活動(dòng)性胃炎,消化性潰瘍,胃腺癌等疾病�，F(xiàn)有的根除Hp的方法主要是三聯(lián)和四聯(lián)抗菌療法,但是Hp的抗感染治療存在治愈率不高且不能有效阻止Hp的再感染和復(fù)發(fā)等問題。由于越

【參考文獻(xiàn)】

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【共引文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1422714