本文關(guān)鍵詞：云南豬株旋毛蟲43 ku抗原基因的原核表達　出處：《中國病原生物學(xué)雜志》2015年03期 　論文類型：期刊論文

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【摘要】：目的構(gòu)建云南豬株旋毛蟲43ku抗原基因原核表達載體,誘導(dǎo)其表達目的蛋白,為研究其功能奠定基礎(chǔ)。方法收集云南株旋毛蟲成蟲,提取總RNA,采用RT-PCR獲得43ku抗原基因。將PCR產(chǎn)物插入克隆載體pMD18-T中,重組質(zhì)粒經(jīng)酶切、PCR及測序鑒定正確后,將目的片段插入原核表達載體pET20b中并轉(zhuǎn)化大腸埃希菌BL21,通過IPTG誘導(dǎo)表達目的蛋白,經(jīng)鎳柱親和層析純化后進行SDS-PAGE鑒定。結(jié)果 RT-PCR擴增出云南豬株旋毛蟲43ku抗原基因,其基因序列全長1 134bp,與GenBank中注冊的序列同源性最高為98.8%。重組表達質(zhì)粒pET20b-Ts43經(jīng)雙酶切得到1 000bp和3 700bp左右兩條片段,與預(yù)期結(jié)果相符。表達產(chǎn)物經(jīng)SDS-PAGE鑒定,其分子質(zhì)量單位為43ku。純化蛋白經(jīng)SDS-PAGE分析為單一43ku蛋白帶。結(jié)論成功構(gòu)建了云南豬株旋毛蟲43ku抗原基因的原核表達載體,表達并純化了43ku蛋白,為其功能研究奠定了基礎(chǔ)。
[Abstract]:Objective to construct the prokaryotic expression vector of 43 ku antigen gene of Trichinella spiralis in Yunnan and induce it to express the target protein. The 43 ku antigen gene was obtained by RT-PCR. The PCR product was inserted into the cloned vector pMD18-T. The recombinant plasmid was confirmed by restriction endonuclease digestion and sequencing. The target fragment was inserted into prokaryotic expression vector pET20b and transformed into Escherichia coli BL21. The target protein was induced by IPTG. Results the 43 ku antigen gene of Trichinella yunnanensis was amplified by RT-PCR and its gene sequence was 1134 BP. The highest homology with the registered sequence in GenBank was 98.8. The recombinant expression plasmid pET20b-Ts43 was digested with two enzymes to obtain 1 000 BP and 3 BP. About 700bp two fragments. The expressed product was identified by SDS-PAGE. The purified protein was identified as a single 43 ku protein band by SDS-PAGE. Conclusion the prokaryotic expression vector of 43 ku antigen gene of Trichinella spiralis in Yunnan was successfully constructed. The 43 ku protein was expressed and purified, which laid a foundation for the study of its function.
【作者單位】： 承德醫(yī)學(xué)院病原生物學(xué)實驗中心;
【基金】：河北省高等學(xué)校科學(xué)技術(shù)研究重點項目(No.ZH2011125)
【分類號】：R383.15
【正文快照】： 旋毛蟲病(trichinellosis)是由旋毛蟲(Trichinellaspiralis)引起的一種嚴(yán)重的人獸共患寄生蟲病,其臨床表現(xiàn)復(fù)雜多樣,在診斷及治療方面仍面臨著諸多問題。肌肉活檢查見囊包或幼蟲是旋毛蟲病最準(zhǔn)確的診斷方法,但在早期或輕度感染者往往容易漏診,而因取材的局限性晚期患者活檢陽

【參考文獻】

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本文編號：1421881