本文關(guān)鍵詞：對白血病化療藥物左旋天冬酰胺酶II的熱穩(wěn)定性改造以及微小殘留白血病DNA疫苗的構(gòu)建、純化和免疫效果研究　出處：《中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué)》2008年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】： 在治療急性淋巴細胞白血病的臨床實踐中有兩個長期困擾人們的難題:一個是化療藥物的副作用問題;另一個是導(dǎo)致白血病完全緩解后又不斷復(fù)發(fā)的腫瘤細胞微小殘留問題。本課題針對這兩個問題進行了初步的探索。 在急性淋巴細胞白血病的化療方案中,左旋大腸桿菌天冬酰胺酶Ⅱ是重要的藥物組成部分。但是該酶具有較大的副作用,同時由于其相對較短的半衰期和熱不穩(wěn)定性,使得該藥在實際治療中需要進行頻繁地注射,結(jié)果使病人產(chǎn)生了更大的痛苦。因此在本研究課題中對如何提高該酶的熱穩(wěn)定性以便進一步提高其半衰期進行了初步研究:通過生物信息學(xué)分析手段確定了天冬酰胺酶蛋白質(zhì)二級結(jié)構(gòu)中一個與熱穩(wěn)定性關(guān)系密切的β-轉(zhuǎn)角,并用定點突變的方法將該轉(zhuǎn)角上的第178位的天冬氨酸突變?yōu)楦彼�。實驗結(jié)果顯示:與野生型酶相比,突變體酶在不同溫度條件下的熱穩(wěn)定性得到了提高;從能量角度上看,改造后的酶在保持動力學(xué)性質(zhì)(K_m和K_(cat))基本不變的同時活化能得到了增加。這說明筆者對左旋天冬酰胺酶的改造在不影響酶活性的前提下提高了其熱穩(wěn)定性。 對于化療和骨髓移植不能徹底解決的白血病細胞微小殘留問題,本課題對相應(yīng)的免疫學(xué)解決方案進行了探索。雖然腫瘤細胞疫苗在目前來說是一種較有前景的免疫治療形式,但出于對其安全性方面考慮,筆者決定嘗試用另外一種相對安全的免疫形式——DNA疫苗,來治療微小殘留白血病,并對其免疫效果進行了初步研究。本課題采用雙質(zhì)粒系統(tǒng),其中一個質(zhì)粒表達經(jīng)過改造滅活的腫瘤細胞特異性超表達抗原生存素(survivin)和能特異性引起Th1細胞免疫反應(yīng)的發(fā)夾狀單鏈RNA(ssRNA);另一個質(zhì)粒表達細胞因子GM-CSF和共刺激分子CD80。結(jié)果證明用該DNA疫苗系統(tǒng)免疫BalB/C小鼠能引起較強的細胞免疫應(yīng)答,誘導(dǎo)較強的T細胞增殖和對腫瘤細胞的CTL殺傷活力。這些結(jié)果為進一步研究DNA疫苗對微小殘留白血病的實際治療提供了前期實驗室數(shù)據(jù)基礎(chǔ)。 DNA疫苗大規(guī)模純化技術(shù)的研發(fā)是DNA疫苗走向?qū)嶋H臨床應(yīng)用和工業(yè)化生產(chǎn)的必不可少的環(huán)節(jié)。本課題重點對利用排阻層析純化質(zhì)粒的技術(shù)進行了研究。筆者對不同種類及不同濃度鹽緩沖液存在時,各種核酸分子排阻層析行為的變化進行了觀察比較。結(jié)果顯示:在高濃度中性鹽存在情況下,不僅是RNA,其它的核酸分子包括宿主基因組DNA和各種質(zhì)粒同分異構(gòu)體的層析分辨率都得到了較大提高。進一步探討深層機制,筆者認(rèn)為在這一高鹽排阻層析純化過程中同時存在兩種分離模式:1、超螺旋質(zhì)粒DNA主要受到壓縮效應(yīng)的影響以排阻模式被洗脫;2、RNA和宿主基因組DNA則主要受疏水效應(yīng)的影響從而以相互作用模式被洗脫。我們的實驗結(jié)果證明使用高濃度(2 M)的中性鹽(硫酸銨)將提高排阻層析純化DNA疫苗的效率。
[Abstract]:In the clinical practice of the treatment of acute lymphoblastic leukemia, there are two problems that have puzzled people for a long time: one is the side effect of chemotherapeutic drugs; The other is the microresidual of tumor cells which leads to complete remission of leukemia and recurrence. Levo-Escherichia coli asparaginase 鈪，

本文編號：1421759