本文關(guān)鍵詞：LAMP快速檢測日本血吸蟲感染性釘螺、卡氏肺孢子蟲及惡性瘧原蟲的研究　出處：《南華大學(xué)》2009年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：目的利用環(huán)介導(dǎo)等溫擴(kuò)增技術(shù)(loop-mediated isothermal amplification.LAMP)快速檢測日本血吸蟲( Schistosoma japonicum)感染性釘螺、卡氏肺孢子蟲(Pneumocystis carinii)、惡性瘧原蟲(Plasmodium falciparum)的研究。 方法以日本血吸蟲、卡氏肺孢子蟲、惡性瘧原蟲的特異基因為靶序列,利用PrimerExplorer V3軟件分別設(shè)計擴(kuò)增靶基因的4條LAMP引物,酚氯仿法分別提取三種病原體的DNA,取適量模板DNA加入配制并優(yōu)化好的LAMP反應(yīng)體系,65℃下60 min,完成對靶病原體基因的擴(kuò)增,通過肉眼觀察、SYBR Green I染色及電泳來判定擴(kuò)增結(jié)果。LAMP擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)酶切進(jìn)一步鑒定;設(shè)立對照組評價特異性;10倍系列稀釋模板檢測LAMP敏感性。 結(jié)果模板經(jīng)LAMP擴(kuò)增后,肉眼、SYBR Green I染色和電泳均能觀察到LAMP擴(kuò)增產(chǎn)物的出現(xiàn),電泳后呈LAMP特征性梯狀條帶,對照組均無擴(kuò)增產(chǎn)物;三種病原體LAMP擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)相應(yīng)限制性內(nèi)切酶酶切鑒定正確;結(jié)果顯示三種病原體LAMP檢測方法特異;LAMP可檢測到日本血吸蟲、卡氏肺孢子蟲、惡性瘧原蟲的敏感性分別是1pgDNA/μL,1pgDNA/μl,1.5個瘧原蟲/107RBC ,高于或與PCR敏感性相當(dāng)。 結(jié)論建立了日本血吸蟲、卡氏肺孢子蟲、惡性瘧原蟲特異、敏感和快速的LAMP檢測方法。
[Abstract]:Objective to detect Schistosoma japonicum (Schistosoma japonicum) by loop-mediated isothermal amplification. Schistosoma japonicum infected Oncomelania hupensis. Pneumocystis carinii, Plasmodium falciparum. Methods the specific bases of Schistosoma japonicum, Pneumocystis carinii and Plasmodium falciparum were used as target sequences. Four LAMP primers were designed to amplify the target gene by PrimerExplorer V3 software, and the DNA of three pathogens were extracted by phenol chloroform method. Appropriate amount of template DNA was added to the prepared and optimized LAMP reaction system for 60 min at 65 鈩，

本文編號：1408583