本文關(guān)鍵詞：體外誘導(dǎo)人脂肪干細(xì)胞向內(nèi)皮細(xì)胞分化的實(shí)驗(yàn)研究　出處：《山西醫(yī)科大學(xué)》2009年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

  更多相關(guān)文章： 間充質(zhì)干細(xì)胞 脂肪組織 內(nèi)皮細(xì)胞

【摘要】： 第一部分人脂肪來源的間充質(zhì)干細(xì)胞的生物學(xué)特性觀察 目的觀察人脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞(human adipose-derived stem cells , hADSCs)的形態(tài)學(xué),生長動力學(xué)及細(xì)胞表面標(biāo)志抗原。 方法采用酶消化法分離培養(yǎng)脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞,倒置相差顯微鏡下觀察其生長和形態(tài)學(xué)變化;MTT比色法觀察細(xì)胞增殖活性;流式細(xì)胞技術(shù)分別檢測細(xì)胞周期和原代、第2代、第4代脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞表面抗原CD31、CD34、CD44、CD29的表達(dá)。 結(jié)果1.在脂肪組織中存在能不斷增殖的未成熟細(xì)胞,經(jīng)多次傳代后仍保留很強(qiáng)的增殖能力,倒置相差顯微鏡下觀察呈成纖維細(xì)胞樣。 2.MTT比色法證實(shí)其有很強(qiáng)的增殖活性,隨傳代降低不明顯。 3.流式細(xì)胞周期檢測顯示G1期細(xì)胞占絕大多數(shù),達(dá)到86.19%,S期為6.09%,表明大多數(shù)細(xì)胞處于靜止期,是一群處于未分化狀態(tài)的非定向細(xì)胞。 4.其形態(tài)學(xué)及表面標(biāo)記物與骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞類似,間充質(zhì)干細(xì)胞相關(guān)的表面抗原CD29、CD44隨著傳代表達(dá)水平逐漸增高,與原代細(xì)胞比較沒有顯著差異(p0.05),內(nèi)皮細(xì)胞標(biāo)志CD31陰性表達(dá)。造血干細(xì)胞標(biāo)志CD34隨細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)間延長表達(dá)水平明顯降低,與原代細(xì)胞比較有顯著差異(p0.05)。 第二部分體外誘導(dǎo)人脂肪干細(xì)胞向內(nèi)皮細(xì)胞的分化 目的體外誘導(dǎo)人脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞向內(nèi)皮細(xì)胞的分化,探索其誘導(dǎo)條件,為組織工程學(xué)種子細(xì)胞的來源及其臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。 方法酶消化法分離培養(yǎng)脂肪干細(xì)胞,當(dāng)傳至第3代時(shí)用內(nèi)皮細(xì)胞生長因子(VEGF)和堿性成纖維細(xì)胞生長因子(b-FGF)誘導(dǎo)其向內(nèi)皮細(xì)胞分化。實(shí)驗(yàn)分為VEGF 50ng/ml加b-FGF 10ng/ml和VEGF 20ng/ml加b-FGF 10ng/ml兩組,用流式細(xì)胞儀檢測其表面標(biāo)記物CD34、CD31的表達(dá);在熒光顯微鏡下觀察其吞噬乙�；兔芏戎鞍�(DiI-ac-LDL)和結(jié)合植物凝集素(FITC-Lectin)的能力;用細(xì)胞免疫熒光法檢測Ⅷ因子的表達(dá);用RT-PCR技術(shù)測定細(xì)胞中CD133mRNA和CD144mRNA的表達(dá)。 結(jié)果1.流式細(xì)胞儀檢測結(jié)果顯示CD31、CD34表達(dá)水平隨誘導(dǎo)時(shí)間的延長而逐漸增加,同一誘導(dǎo)時(shí)間的不同濃度組之間比較沒有顯著差異(p0.05),同一誘導(dǎo)濃度不同誘導(dǎo)時(shí)間組之間比較有顯著差異(p0.05)。 2.熒光顯微鏡下觀察到細(xì)胞吞噬DiI-ac-LDL顯紅色熒光,陽性率達(dá)94%以上;與Lectin結(jié)合顯綠色熒光,陽性率達(dá)95%;雙染色為橙色熒光,陽性率達(dá)90%以上。 3.熒光顯微鏡下可見大部分細(xì)胞胞漿內(nèi)呈現(xiàn)綠色熒光,即胞漿內(nèi)表達(dá)Ⅷ因子。 4.CD144mRNA表達(dá)水平隨誘導(dǎo)時(shí)間的延長而逐漸增加,與空白對照組比較有顯著差異(p0.05),CD133mRNA在誘導(dǎo)第4天有一定表達(dá),第8天時(shí)表達(dá)降低,與空白對照組比較均有顯著差異(p0.05)。 結(jié)論 1.通過酶消化法可從人脂肪組織中獲取間充質(zhì)干細(xì)胞,其與骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞相似,具有很強(qiáng)的增殖分化能力,通過流式細(xì)胞技術(shù)檢測到其表達(dá)間充質(zhì)干細(xì)胞相關(guān)表面標(biāo)志。 2. VEGF、b-FGF可誘導(dǎo)脂肪干細(xì)胞成內(nèi)皮樣細(xì)胞,且對VEGF濃度有很大的依賴性,隨著誘導(dǎo)時(shí)間的延長其表面標(biāo)志物由內(nèi)皮祖細(xì)胞向成熟內(nèi)皮細(xì)胞轉(zhuǎn)變。其較內(nèi)皮祖細(xì)胞容易獲得,成為組織工程學(xué)種子細(xì)胞的選擇之一。
[Abstract]:The biological characteristics of mesenchymal stem cells from the first part of human fat
Objective To observe the morphology, growth kinetics and surface marker antigen of human adipose-derived stem cells (hADSCs).
Methods by using enzyme digestion method cultured adipose derived mesenchymal stem cells, inverted to observe the growth and morphological changes under the microscope to observe cell proliferation; MTT colorimetric assay; flow cytometry was used to detect the cell cycle and the original generation, second generation, fourth generation of adipose derived mesenchymal stem cell surface antigen CD31, CD34. CD44, the expression of CD29.
Results 1., there were immature cells that could proliferate in adipose tissue. After repeated passage, they still had strong proliferative ability.
2.MTT colorimetric assay showed that it had strong proliferative activity and was not obvious with the decrease of passage.
3. flow cytometry showed that the majority of G1 cells were 86.19% and S 6.09%, indicating that most cells were at a quiescent stage, and they were a group of undirected cells.
4. the morphology and surface markers of bone marrow mesenchymal stem cells, mesenchymal stem cell associated surface antigens CD29, CD44 increased gradually with the passage of the level, and the primary cells showed no significant difference (P0.05), endothelial cell marker CD31 negative expression cells CD34 with cell culture. The extension of time. Significantly lower levels of stem, there was significant difference compared with the primary cells (P0.05).
Differentiation of human adipose stem cells into endothelial cells in vitro in the second part
Objective to induce the differentiation of human adipose derived mesenchymal stem cells into endothelial cells in vitro, and explore the induction conditions, so as to provide experimental basis for the source and clinical application of tissue engineering seed cells.
Isolation and culture of adipose derived stem cells by enzyme digestion method, when passed third generations with endothelial cell growth factor (VEGF) and basic fibroblast growth factor (b-FGF) induced to differentiate into endothelial cells. The experiment was divided into VEGF 50ng/ml and b-FGF 10ng/ml and VEGF 20ng/ml and b-FGF 10ng/ml in the two groups, with the detection of surface markers CD34 flow cytometry, the expression of CD31; observe the phagocytosis of acetylated low density lipoprotein under fluorescent microscope (DiI-ac-LDL) and binding lectin (FITC-Lectin) expression ability; immunofluorescence assay of factor VIII; Determination of the expression of CD133mRNA and CD144mRNA cells by using RT-PCR technology.
The test results of 1. flow cytometry showed that CD31 expression level of CD34, with the prolonged induction time gradually increased, there was no significant difference between different concentration groups at the same time (P0.05), induced by the same concentration induced by different induction time had significant difference between groups (P0.05).
2. under fluorescence microscope, phagocytosis of DiI-ac-LDL showed red fluorescence. The positive rate was over 94%. The positive rate of green fluorescence with Lectin was 95%, and the double staining was orange fluorescence, the positive rate was over 90%.
3. under the fluorescence microscope in the cytoplasm of most cells showed green fluorescence expression of factor VIII in the cytoplasm.
The expression level of 4.CD144mRNA increased with the prolongation of induction time. There was a significant difference between the expression level of P0.05 and the blank control group (CD133mRNA). There was a certain expression of CD133mRNA on the fourth day of induction, and the expression decreased on the eighth day, which was significantly different from that in the blank control group (P0.05).
conclusion
1., through enzyme digestion, mesenchymal stem cells can be obtained from human adipose tissue. It is similar to bone marrow mesenchymal stem cells, and has strong proliferation and differentiation ability. The related surface markers of mesenchymal stem cells can be detected by flow cytometry.
2. VEGF, b-FGF can induce adipose derived stem cells into endothelial like cells, and have a great dependence on the concentration of VEGF, with the extension of time the transformation induced by surface markers by endothelial progenitor cells into mature endothelial cells. The endothelial progenitor cells are easy to obtain, become one of the seed cells for tissue engineering.

【學(xué)位授予單位】：山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2009
【分類號】：R329

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 吳玉卓;陳紅;;臍血間充質(zhì)干細(xì)胞體外誘導(dǎo)成肝細(xì)胞的研究進(jìn)展[J];中國肝臟病雜志(電子版);2008年02期

2 周秀娟;閆醒軍;何延政;劉勇;施森;江雋;;人外周血、臍血、脂肪組織來源的內(nèi)皮祖細(xì)胞部分生物學(xué)特性比較[J];中國動脈硬化雜志;2011年08期

3 隆玄;吳曉丹;施勁東;李善群;;間充質(zhì)干細(xì)胞在急性肺損傷中的應(yīng)用進(jìn)展[J];中國臨床醫(yī)學(xué);2011年03期

4 楊光忠;陳文明;;間充質(zhì)干細(xì)胞的免疫調(diào)節(jié)功能[J];臨床合理用藥雜志;2011年31期

5 王燕茹;張育;;間充質(zhì)干細(xì)胞與類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎[J];實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志;2011年16期

6 馮德鵬;李雪莉;范炎;;臍血間充質(zhì)干細(xì)胞的研究進(jìn)展[J];國際老年醫(yī)學(xué)雜志;2010年05期

7 程慶;白志明;;間充質(zhì)干細(xì)胞歸巢的研究進(jìn)展[J];中國現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志;2011年09期

8 傅強(qiáng);;他達(dá)拉非可對干細(xì)胞產(chǎn)生持久而穩(wěn)定的保護(hù)作用[J];中華男科學(xué)雜志;2011年08期

9 羅大木;;尷尬的脂肪:我不是敵人你不要太瘦[J];女性天地;2011年07期

10 瞿海龍;麻曉靜;張冰;梁璐;;基因修飾的間充質(zhì)干細(xì)胞在急性心肌梗死中的應(yīng)用前景[J];中西醫(yī)結(jié)合心腦血管病雜志;2011年07期

相關(guān)會議論文 前10條

1 李大鵬;王季石;;小鼠脂肪成體干細(xì)胞的體外培養(yǎng)[A];貴州省2008年血液學(xué)年會論文匯編[C];2008年

2 郭勇;張西正;魏嚴(yán);郭春;徐曉瑩;李瑞欣;張永紅;;大鼠脂肪組織源性間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)及誘導(dǎo)分化[A];中國細(xì)胞生物學(xué)學(xué)會第九次會員代表大會暨青年學(xué)術(shù)大會論文摘要集[C];2007年

3 王玉紅;陳光輝;;地黃低聚糖對人脂肪組織源性間充質(zhì)干細(xì)胞分泌肝細(xì)胞生長因子的影響[A];2010全國中西醫(yī)結(jié)合危重病、急救醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2010年

4 王巧稚;韓藝;趙宏賢;余鴻;劉廣益;;當(dāng)歸誘導(dǎo)人脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞向神經(jīng)細(xì)胞分化和毒性檢測的研究[A];中國解剖學(xué)會第十一屆全國組織學(xué)與胚胎學(xué)青年學(xué)術(shù)研討會論文匯編[C];2009年

5 郭勇;張西正;郭春;魏嚴(yán);李瑞欣;徐曉瑩;張永紅;;脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞向心肌細(xì)胞分化中心肌發(fā)育相關(guān)基因的表達(dá)[A];天津市生物醫(yī)學(xué)工程學(xué)會2008年年會暨首屆生物醫(yī)學(xué)工程與臨床論壇論文集[C];2008年

6 黃金龍;董運(yùn)海;魏翠;徐妍;王影;魯彥瑋;王志軍;郝晨光;;復(fù)合水凝膠負(fù)載人脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞在體內(nèi)分化的研究[A];第二屆全國醫(yī)療美容技術(shù)交流大會暨高新技術(shù)精品手術(shù)演示會論文匯編[C];2010年

7 肖宏濤;劉毅;陳克明;;凍存復(fù)蘇人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞體外擴(kuò)增和向脂肪細(xì)胞分化的研究[A];中華醫(yī)學(xué)會燒傷外科學(xué)分會2009年學(xué)術(shù)年會論文匯編[C];2009年

8 杜鳳移;王皓;楊樹龍;趙繪存;楊英;楊軍;;納米纖維支架對大鼠間充質(zhì)干細(xì)胞向肝細(xì)胞分化的影響[A];天津市生物醫(yī)學(xué)工程學(xué)會第29屆學(xué)術(shù)年會暨首屆生物醫(yī)學(xué)工程前沿科學(xué)研討會論文集[C];2009年

9 朱恒;江小霞;劉元林;張毅;毛寧;;間充質(zhì)干細(xì)胞選擇性調(diào)節(jié)破骨細(xì)胞發(fā)育和功能[A];第13屆全國實(shí)驗(yàn)血液學(xué)會議論文摘要[C];2011年

10 張顥;陶艷玲;邱林;張伯龍;馬軍;陳志哲;劉擁軍;韓忠朝;;一種具有免疫負(fù)調(diào)節(jié)功能的人臍帶源間充質(zhì)干細(xì)胞[A];第12屆全國實(shí)驗(yàn)血液學(xué)會議論文摘要[C];2009年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前10條

1 魏開敏;脂肪組織不單是個(gè)能量儲存器[N];農(nóng)村醫(yī)藥報(bào)（漢）;2009年

2 王秋月　王琳;空軍總醫(yī)院采用間充質(zhì)干細(xì)胞救治小腦萎縮[N];科技日報(bào);2009年

3 江西 孫慶偉　(教授);脂肪組織也有內(nèi)分泌功能[N];家庭醫(yī)生報(bào);2009年

4 記者 李素鋒;我市首例間充質(zhì)干細(xì)胞移植手術(shù)取得成功[N];臨汾日報(bào);2009年

5 北京軍區(qū)總醫(yī)院八一兒童醫(yī)院名譽(yù)院長 丁宗一;脂肪組織記性好[N];健康報(bào);2009年

6 實(shí)習(xí)生 石北燕;脂肪不全是累贅[N];科技日報(bào);2007年

7 記者 王丹　通訊員 艾素;異染性腦白質(zhì)營養(yǎng)不良治療獲突破[N];健康報(bào);2010年

8 記者 李學(xué)梅;脂肪組織或能生成免疫細(xì)胞[N];新華每日電訊;2010年

9 ;我們看不見的脂肪[N];科技日報(bào);2006年

10 本報(bào)特約記者 錢勇;穿裙裝護(hù)腿有選擇[N];健康時(shí)報(bào);2004年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 李寶軍;脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞體外誘導(dǎo)及復(fù)合PLGA體內(nèi)異位成軟骨的實(shí)驗(yàn)研究[D];中南大學(xué);2007年

2 彭飛;620nm非相干紅光對大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的光生物調(diào)節(jié)作用[D];華中科技大學(xué);2011年

3 于美嬌;系統(tǒng)歸巢的間充質(zhì)干細(xì)胞在牙周組織修復(fù)再生過程中的作用研究[D];山東大學(xué);2011年

4 李東杰;人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞促進(jìn)創(chuàng)面愈合及體外誘導(dǎo)分化為表皮樣細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)研究[D];中國人民解放軍軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院;2011年

5 朱雅姝;Flk-1~+間充質(zhì)干細(xì)胞對腫瘤細(xì)胞增殖的抑制作用及其分子機(jī)制研究[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2008年

6 吳桂珠;脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞治療壓力性尿失禁的實(shí)驗(yàn)研究[D];福建醫(yī)科大學(xué);2010年

7 熊卉;轉(zhuǎn)化生長因子β1基因體外轉(zhuǎn)染兔顳下頜關(guān)節(jié)滑膜間充質(zhì)干細(xì)胞向纖維軟骨轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)研究[D];武漢大學(xué);2010年

8 田X;P38 MAPK參與調(diào)節(jié)人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞對人白血病腫瘤細(xì)胞的生長抑制[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2011年

9 苗宗寧;胎盤間充質(zhì)干細(xì)胞與絲素蛋白/羥基磷灰石材料在骨創(chuàng)傷修復(fù)中的實(shí)驗(yàn)研究[D];蘇州大學(xué);2010年

10 梁偉;人骨髓Flk-1~+間充質(zhì)干細(xì)胞抗DNA損傷物質(zhì)影響作用研究[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2008年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 章守琴;人羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞支持造血的體外研究[D];昆明醫(yī)學(xué)院;2010年

2 陳芳;臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞修復(fù)化療所致卵巢顆粒細(xì)胞損傷的體外實(shí)驗(yàn)[D];暨南大學(xué);2010年

3 陳嘉;脂肪來源的間充質(zhì)干細(xì)胞體外轉(zhuǎn)分化內(nèi)皮細(xì)胞及褪黑素調(diào)控研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2011年

4 薛君;體外誘導(dǎo)人脂肪干細(xì)胞向內(nèi)皮細(xì)胞分化的實(shí)驗(yàn)研究[D];山西醫(yī)科大學(xué);2009年

5 張茜真;人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞的分離、鑒定以及干細(xì)胞特異性轉(zhuǎn)錄因子誘導(dǎo)其重編程的研究[D];浙江理工大學(xué);2010年

6 衛(wèi)佳;干細(xì)胞因子修飾的臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞對造血干細(xì)胞的作用[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2011年

7 陳義;臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)及體外重建角膜后板層的初步研究[D];暨南大學(xué);2010年

8 汲晶;脂肪與骨髓來源的間充質(zhì)干細(xì)胞誘導(dǎo)分化為神經(jīng)細(xì)胞的比較[D];山西醫(yī)科大學(xué);2010年

9 唐子濱;納米級膠原基骨材料復(fù)合自體脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞用于兔后外側(cè)脊柱融合的實(shí)驗(yàn)研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2010年

10 齊凱;人臍帶來源間充質(zhì)干細(xì)胞分離培養(yǎng)方法的優(yōu)化初探[D];山西醫(yī)科大學(xué);2011年

，

本文編號：1408412