本文關(guān)鍵詞：Wnt信號途徑對破骨細(xì)胞分化成熟的直接調(diào)控　出處：《重慶醫(yī)科大學(xué)》2013年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

  更多相關(guān)文章： β-catenin Sost Wnt3a Raw264.7 RANKL

【摘要】：目的明確Wnt信號通路是不是可以通過不依賴成骨細(xì)胞的作用直接調(diào)節(jié)破骨細(xì)胞的分化與成熟。從而可以全面的了解Wnt信號通路在骨態(tài)發(fā)育中的作用。為我們以后利用Wnt抑制劑抗體治療骨質(zhì)疏松打下堅實可靠地基礎(chǔ)。并在這個基礎(chǔ)上明確參與直接調(diào)節(jié)破骨細(xì)胞分化與成熟的具體Wnt信號通路。 方法通過用濃度梯度的方法去誘導(dǎo)Raw264.7的分化與成熟并確定其最適誘導(dǎo)濃度，再用最佳濃度去篩選與破骨細(xì)胞分化可能相關(guān)的Wnt蛋白。根據(jù)前期實驗得出的結(jié)果構(gòu)建相關(guān)腺病毒及干擾病毒，再以Wnt蛋白腺病毒和干擾腺病毒去處理破骨前體細(xì)胞株Raw264.7后，檢測這些Wnt通路對破骨細(xì)胞分化成熟的調(diào)控。實驗時Raw264.7細(xì)胞分成四組分別為：空Raw264.7（陰性對照組）、Ad-GFP or Ad-RFP(實驗對照組)、Ad-Wnt3a,Ad-β-catenin,Ad-Sost(實驗組)和50ng/mLRANKL誘導(dǎo)Raw264.7(陽性對照組)檢測它對Raw264.7分化成熟的影響。 結(jié)果確定RANKL誘導(dǎo)Raw264.7的最佳濃度為50ng/mL，用50ng/mL的RANKL篩選相關(guān)蛋白。選出Wnt3、Wnt3a、Wnt5b、Wnt7a、Wnt7b、β-catenin、Sost可能與Raw264.7的分化成熟有關(guān)，并構(gòu)建了這幾種腺病毒（由美國芝加哥大學(xué)腫瘤研究中心何通川教授實驗室贈送并保存）分別用這些腺病毒感染Raw64.7細(xì)胞并按空白組、實驗對照組、實驗組和陽性對照組共四組。分析結(jié)果得：β-catenin誘導(dǎo)的Raw264.7對比空白組對照組都呈單核細(xì)胞；Wnt3a誘導(dǎo)的Raw264.7對比空白組和對照組也呈單核細(xì)胞；而Sost誘導(dǎo)的Raw264.7對比空白組和對照組呈多核細(xì)胞。 結(jié)論Wnt信號通路可以不通過成骨細(xì)胞間接地調(diào)節(jié)破骨細(xì)胞分化成熟，，并且直接參與其調(diào)控。并且β-catenin可以抑制Raw264.7細(xì)胞分化成熟；Wnt3a也可以抑制Raw264.7分化成成熟的破骨細(xì)胞；而Sost則可以促進(jìn)Raw264.7的分化成熟。
[Abstract]:Objective to clarify the Wnt signaling pathway is not available through does not depend on the role of osteoblastic cells directly regulate osteoclast differentiation and maturation. Thus a comprehensive understanding of the Wnt signaling pathway in bone development in state. For our future use of a Wnt inhibitor antibodies for the treatment of osteoporosis and lay a solid foundation. Reliable and clearly involved in this based on the direct regulation of osteoclast differentiation and maturation of the Wnt signaling pathway.
By using the method of concentration gradient to induce Raw264.7 differentiation and maturation and determine the optimal induction concentration, and the optimal concentration to screening and differentiation of osteoclast may be related to Wnt protein. According to the preliminary experimental results to construct adeno-associated virus and virus interference, and then to Wnt protein of adenovirus and adenovirus to deal with interference the osteoclast precursor cell line Raw264.7, detect the Wnt pathway on the differentiation of osteoclast regulation. The Raw264.7 cells were divided into four groups respectively: Raw264.7 (negative control group), Ad-GFP or Ad-RFP (experimental group), Ad-Wnt3a, Ad- beta -catenin, Ad-Sost (experimental group) and 50ng/mLRANKL induced by Raw264.7 (positive control group) to detect its effect on Raw264.7 differentiation and maturation.
The optimal concentration of RANKL induced by Raw264.7 50ng/mL, 50ng/mL RANKL related protein screening. The selected Wnt3, Wnt3a, Wnt5b, Wnt7a, Wnt7b, beta -catenin, Sost and Raw264.7 could be differentiated mature, and constructed the several adenovirus (presented by the University of Chicago cancer research center Professor He Tongchuan laboratory and preservation) respectively. The adenovirus infected Raw64.7 cells in blank control group, experimental control group, experimental group and positive control group of four groups. Results: -catenin beta induced Raw264.7 compared with blank control group showed mononuclear cells induced by Wnt3a Raw264.7; compared with the blank group and the control group also showed mononuclear cells; Sost by contrast Raw264.7 blank group and control group were multinucleated cells.
Conclusion Wnt signaling pathway may not by osteoblasts indirectly regulate osteoclast differentiation and maturation, and directly involved in the regulation of beta. And -catenin can inhibit the differentiation of Raw264.7 cells; Wnt3a can also inhibit Raw264.7 differentiation into mature osteoclasts; while Sost can promote the differentiation of Raw264.7 into maturity.

【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R329.2

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