本文關(guān)鍵詞：雞抗人IgG1卵黃抗體的制備、純化和分析鑒定　出處：《天津大學(xué)》2009年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

  更多相關(guān)文章： IgY 卵黃抗體 親和常數(shù) 人IgG1 人胰島素受體細(xì)胞外部分(HIR-ECD)

【摘要】： 抗體通常是從免疫動(dòng)物血液中獲得的,卵黃抗體(IgY)指從免疫禽蛋中提取出的針對(duì)特定抗原的抗體。利用免疫雞將特異性抗體穩(wěn)定持續(xù)地傳至卵黃中,制備特異性多克隆抗體,成本低且產(chǎn)量高,有望成為規(guī)模制備特異性抗體的有效手段。 本課題主要內(nèi)容是建立制備和純化卵黃抗體的方法,并對(duì)制備出的卵黃抗體的濃度、純度、抗原親和力和抗原特異性進(jìn)行檢測(cè)。首先,建立了以水稀釋硫酸銨鹽析的方法純化卵黃抗體的純化方案,該方案不僅具有簡(jiǎn)單、經(jīng)濟(jì)和利于大規(guī)模生產(chǎn)的特點(diǎn),且純化出的卵黃抗體具有純度高、活性好等優(yōu)點(diǎn)。其次,選用卵黃中非特異性抗體濃度極低的無特定病原菌(SPF)雞,有利于制備特異性卵黃抗體。以人IgG1肌肉和皮下免疫母雞,血清檢測(cè)證實(shí)免疫方案的成功。在整個(gè)34周的免疫周期內(nèi),檢測(cè)了每周血清和卵黃中抗體的濃度,并計(jì)算出了卵黃抗體的理論總收率為4.695 g。間接ELISA結(jié)果表明,抗人IgG1卵黃抗體對(duì)其抗原(人IgG1)親和常數(shù)高于3.0×108 L/M。Western blotting圖表明,抗人IgG1卵黃抗體對(duì)其抗原(人IgG1)具有非常高的特異性。 按照已經(jīng)建立卵黃抗體的制備和純化方案,再次制備出抗HIR-ECD卵黃抗體。血清檢測(cè)的結(jié)果表明血液中產(chǎn)生了特異性抗體。間接ELISA結(jié)果表明,抗人HIR-ECD卵黃抗體對(duì)其抗原(HIR-ECD)親和常數(shù)為3.4×108 L/M。
[Abstract]:Antibodies are usually obtained from the blood of immunized animals. Egg yolk antibody (IgY) refers to the specific antigen-specific antibodies extracted from the immune eggs. The specific antibodies are transmitted steadily and continuously to the yolk using the immunized chicken. The preparation of specific polyclonal antibodies, with low cost and high yield, is expected to be an effective method for the preparation of specific antibodies on a large scale. The main content of this paper is to establish a method to prepare and purify yolk antibody, and to detect the concentration, purity, antigen affinity and antigen specificity of the yolk antibody. The purification scheme of yolk antibody by water dilution ammonium sulfate saltout method was established. The method is not only simple, economical and convenient for mass production, but also has high purity of purified yolk antibody. Secondly, the selection of egg yolk non-specific antibody concentration is extremely low, no specific pathogen in the preparation of specific egg yolk antibody. Human IgG1 muscle and subcutaneous immunization hens. Serum tests confirmed the success of the immunization program. Weekly serum and yolk antibody concentrations were measured throughout the 34-week cycle. The theoretical total yield of yolk antibody was 4.695 g. The indirect ELISA results showed that the total yield of yolk antibody was 4.695 g. The affinity constant of anti-human IgG1 yolk antibody to its antigen (human IgG1) was higher than 3.0 脳 10 ~ (8) L / M. Western blotting. Anti-human IgG1 yolk antibody is highly specific to its antigen (human IgG 1). The preparation and purification of yolk antibody have been established. The antibody against HIR-ECD yolk was prepared again. The results of serum detection showed that specific antibodies were produced in the blood and indirect ELISA showed that. The affinity constant of anti-human HIR-ECD yolk antibody to its antigen HIR-ECD was 3.4 脳 108L / M.
【學(xué)位授予單位】：天津大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2009
【分類號(hào)】：R392

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