本文關(guān)鍵詞：肺炎衣原體外膜蛋白Omp85的重組表達(dá)及其復(fù)性條件研究　出處：《藥物生物技術(shù)》2015年05期 　論文類型：期刊論文

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【摘要】：肺炎衣原體(Chlamydia pneumoniae,CPn)可致人急性呼吸道疾病,是引起社區(qū)獲得性肺炎(Community acquired pneumonia,CAP)的主要病原體之一。Omp85蛋白是CPn上一個(gè)重要的、與其粘附和入侵宿主相關(guān)的表面蛋白,也是肺炎衣原體肺炎病的候選診斷分子和候選亞單位疫苗,因此成功表達(dá)與純化復(fù)性的重組Omp85蛋白對(duì)揭示CPn致病機(jī)制,研發(fā)肺炎衣原體肺炎診斷試劑及疫苗具有重要的意義。該研究通過生物信息學(xué)方法分析并選取Omp85表位富集區(qū),優(yōu)化并化學(xué)合成其核苷酸序列,構(gòu)建重組載體并轉(zhuǎn)化大腸桿菌,使用SDS-PAGE方法篩選高表達(dá)工程菌并分析其表達(dá)形式,結(jié)果發(fā)現(xiàn)目的蛋白主要以包涵體形式表達(dá)。使用鎳柱親和層析復(fù)性、葡聚糖凝膠層析復(fù)性、稀釋復(fù)性和透析復(fù)性4種方法對(duì)目的蛋白進(jìn)行復(fù)性,均獲得復(fù)性蛋白,葡聚糖凝膠層析復(fù)性方法對(duì)Omp85的復(fù)性效果優(yōu)于其它3種。該研究為進(jìn)一步揭示CPn致病機(jī)制以及研發(fā)肺炎衣原體肺炎的診斷試劑和疫苗奠定了基礎(chǔ)。
[Abstract]:Chlamydia pneumoniae (Chlamydia pneumoniae, CPn) can cause acute respiratory disease, is caused by community-acquired pneumonia (Community acquired, pneumonia, CAP) of the main pathogens of.Omp85 CPn protein is an important protein and its surface, adhesion and invasion of host related, and chlamydia pneumonia disease candidate molecular diagnosis and candidate subunit the vaccine, therefore successful expression and purification of refolded recombinant Omp85 protein to reveal the pathogenic mechanism of CPn, has important significance to the development of Chlamydia pneumoniae pneumonia diagnosis reagent and vaccine. The study by bioinformatic analysis and selection of Omp85 epitope rich region, and optimization of chemical synthesis of the nucleotide sequence, the recombinant plasmid was transformed into Escherichia coli and use the SDS-PAGE method to screen high expression engineering bacteria and analysis of their expression, results showed that target protein mainly expressed in the form of inclusion bodies. Refolding by nickel affinity chromatography, Sephadex gel chromatography renaturation, 4 methods of dilution refolding and dialysis refolding renaturation of proteins, were refolded protein, Sephadex gel chromatography renaturation method for the refolding of Omp85 is better than the other 3. This study lays a foundation for further revealing the pathogenesis of CPn and the mechanism of Chlamydia pneumonia in research and development of diagnostic reagent and vaccine.

【作者單位】： 南京軍區(qū)軍事醫(yī)學(xué)研究所;中國藥科大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院;南京醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院;
【基金】：國家傳染病重大專項(xiàng)(No.2013ZX10004804-003) 全軍十二五重大項(xiàng)目(No.AWS11C001)的資助
【分類號(hào)】：R375.2;R392
【正文快照】： 肺炎衣原體(Chlamydia pneumoniae,CPn)是一類致人急性呼吸道疾病的細(xì)胞內(nèi)寄生的病原體[1],是繼肺炎鏈球菌和流感嗜血桿菌之后引起社區(qū)獲得性肺炎(Communityacquired pneumonia,CAP)的主要病原體,大約7%~10%的CAP是由CPn引起的,此外CPn還與動(dòng)脈粥樣硬化和心血管疾病相關(guān)[2-6],

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本文編號(hào)：1396051