發(fā)布時間：2018-01-08 02:00

  本文關(guān)鍵詞：減毒鼠傷寒沙門氏菌為載體的人呼吸道合胞病毒DNA疫苗免疫保護(hù)作用研究　出處：《安徽醫(yī)科大學(xué)》2008年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

  更多相關(guān)文章： 人呼吸道合胞病毒 F蛋白 真核表達(dá)質(zhì)粒 減毒鼠傷寒沙門菌SL7207

【摘要】： 目的:人呼吸道合胞病毒(Human Respiratory Syncytial Virus,RSV)廣泛分布于世界各地,是導(dǎo)致嬰幼兒嚴(yán)重下呼吸道感染的最重要的病毒病原。目前尚無特異性防治方法,世界衛(wèi)生組織將發(fā)展RSV疫苗列為最優(yōu)先發(fā)展的疫苗項目之一。RSV的11種蛋白中,融合蛋白(Fusion Protein,F)是中和抗原,免疫動物后,可以產(chǎn)生具有免疫保護(hù)作用的中和抗體,為新型疫苗候選抗原。本實驗中我們用減毒鼠傷寒沙門菌(Salmonella typhimurium aroA strain SL7207,SL7207)為載體攜帶能夠表達(dá)F蛋白的DNA疫苗,經(jīng)黏膜途徑,開展體內(nèi)免疫效果和免疫保護(hù)作用研究,以期更好了解該候選疫苗免疫生物學(xué)特征。 方法:本研究中我們將能夠表達(dá)RSV F蛋白的真核表達(dá)載體pcDNA3.1/F轉(zhuǎn)化到SL7207,構(gòu)建重組的減毒鼠傷寒沙門菌疫苗SL7207/pcDNA3.1/F,同時用pcDNA3.1空載體做對照。分別于0、2、6周三次口服免疫小鼠,通過體液免疫(IgG)、黏膜免疫(sIgA)、細(xì)胞免疫(CTL、T淋巴細(xì)胞增殖實驗)等指標(biāo)分析免疫后小鼠RSV特異性免疫應(yīng)答產(chǎn)生情況。最后,利用RSV病毒經(jīng)鼻腔攻擊小鼠,并分別于攻毒后3、5和7天處死小鼠進(jìn)行肺組織病毒含量及肺組織病理學(xué)動態(tài)分析了解免疫保護(hù)作用的效果。 結(jié)果:取已轉(zhuǎn)化pcDNA3.1/F的SL7207并提取質(zhì)粒,經(jīng)限制性內(nèi)切酶分析與預(yù)期一致。經(jīng)口服免疫BALB/c小鼠,與對照組相比,實驗組小鼠血清及肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage,BAL)中分別產(chǎn)生了有效的血清IgG及sIgA(p0.01),血清中抗體亞類分析顯示IgG1和IgG2a的比值為0.96。實驗組CTL反應(yīng)(p0.01,效靶比值為100:1和50:1)和T淋巴細(xì)胞增殖實驗(p0.05)均明顯增強(qiáng)。攻毒實驗中,病毒攻擊后3天和5天的小鼠肺部病毒載量,實驗組比對照組明顯降低(p0.05),組織病理學(xué)分析結(jié)果也顯示在炎性細(xì)胞浸潤和肺泡壁厚度方面兩組有顯著性差異(p0.01)。 結(jié)論:獲得的重組減毒鼠傷寒沙門菌疫苗SL7207/pcDNA3.1/F,能夠刺激機(jī)體產(chǎn)生有效的體液免疫和細(xì)胞免疫及局部免疫,抗體亞類分析顯示誘導(dǎo)產(chǎn)生了Th1和Th2平衡的免疫應(yīng)答,沒有產(chǎn)生疾病增強(qiáng)作用,對RSV感染具有一定的免疫保護(hù)作用。因此我們認(rèn)為以減毒傷寒沙門菌為載體的口服DNA疫苗兼具黏膜免疫及DNA疫苗的雙重優(yōu)點,是RSV等通過黏膜途徑感染的病毒疫苗研究的重要方向,為今后RSV疫苗免疫策略等研究奠定了堅實基礎(chǔ)。
[Abstract]:Objective: human respiratory syncytial virus (Human Respiratory Syncytial Virus, RSV) is widely distributed in the world, is the leading cause of infant viral pathogens of severe lower respiratory tract infection is the most important. There is no specific treatment, the WHO will RSV vaccine development 11 protein as the priority development project of.RSV vaccine, fusion protein (Fusion Protein F) is a neutralizing antigen, immune animal, can induce neutralizing antibody immune protective effect, a new type of vaccine candidate antigen. In this experiment we used Salmonella typhimurium (Salmonella typhimurium aroA strain SL7207, SL7207) to carry the expression of F protein DNA vaccine as the carrier, by way of mucosa and carry out the protective immunity and its mechanism research, in order to better understand the biological characteristics of the immune vaccine candidate.
Methods: the eukaryotic expression vector pcDNA3.1/F was transformed into SL7207 in this study, we will be able to express RSV F protein, attenuated Salmonella typhimurium vaccine recombinant SL7207/pcDNA3.1/F reduction, at the same time with the pcDNA3.1 empty vector as control. 0,2,6 respectively in the three week oral immunization, the humoral immunity, mucosal immunity (IgG) (sIgA). Immune cells (CTL, T lymphocyte proliferation assay) index analysis of the formation of RSV specific immune responses in mice. Finally, using the RSV virus nasal attack mice, respectively after infection of 3,5 and mice were sacrificed 7 days to learn the dynamic analysis to understand the immune effect of lung tissue and lung tissue content of virus.
Results: pcDNA3.1/F and SL7207 have been transformed by extraction of plasmid, restriction endonuclease analysis is consistent with that expected. After oral immunization of BALB/c mice, compared with the control group, the serum and bronchoalveolar lavage fluid in the experimental group (bronchoalveolar lavage, BAL) respectively generate effective serum IgG and sIgA (P0.01), serum antibody subgroup analysis showed that the ratio of IgG1 and IgG2a as the experimental group 0.96. CTL reaction (P0.01, 100:1 and 50:1 ratio target) and T lymphocyte proliferation assay (P0.05) were significantly increased. The poison attack experiment, virus attack after 3 days and 5 days of small rat lung virus load, the experimental group was significantly lower than the control group (P0.05). The analysis results also show that the infiltration of inflammatory cells and alveolar wall thickness had significant difference between the two groups (P0.01). The pathological
Conclusion: the recombinant attenuated Salmonella typhimurium vaccine SL7207/pcDNA3.1/F can induce humoral and cellular immunity and effective local immunity, antibody subtype analysis showed that induced Th1 and Th2 balance of immune response, no disease has enhanced immune protective effect on RSV infection. Therefore we believe in attenuated Salmonella typhimurium as the carrier of the oral DNA vaccine has dual advantages of mucosal immunity and DNA vaccine, RSV vaccine research is an important direction through mucosal infection, laid a solid foundation for the future study of RSV vaccine immunization strategies.

【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2008
【分類號】：R392

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本文編號：1395124