本文關鍵詞：干擾素-α對神經細胞中p11表達的影響　出處：《新鄉(xiāng)醫(yī)學院》2013年碩士論文　論文類型：學位論文

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【摘要】：背景 IFN-α在臨床上應用廣泛,如抗病毒、抗腫瘤。但是其中的一個不良反應,就是長期應用會出現精神抑郁,而且發(fā)病率比較高,這就大大限制了IFN-α的臨床應用。目前,IFN-α引起抑郁的機制還有得進一步研究。研究報道腦內特定區(qū)域p11蛋白表達的降低與抑郁癥有著密切的關系,并且p11能夠轉運5-羥色胺受體1B(5HTR1B)、5-羥色胺受體4(5HTR4)到細胞膜,影響兩者在細胞膜上的表達。目的探討IFN-a對人神經細胞中p11表達的影響。 方法 1.p11-cmv-flag表達基因的構建：提取SH-SY5Y細胞總的RNA,逆轉錄成cDNA,根據已知人的p11基因表達序列設計兩端引物,以cDNA為模板進行擴增,獲得的產物含p11表達基因的全長。HindⅢ和EcoRI雙酶切p11cDNA擴增產物和Flag-cmv載體,雙酶切后分別將兩者進行連接反應即獲得p11-cmv-flag質粒。 2.p11蛋白表達的檢測：將p11-cmv-flag表達質粒和Pcmv-flag空質粒利用脂質體分別轉入SH-SY5Y細胞中,檢測p11-flag表達的情況。 3. IFN-α對p11mRNA表達的影響：分別用不同濃度(0、50、500、1000、2000、3000IU/ml)的IFN-α刺激SH-SY5Y細胞18小時后,提取細胞總的RNA,逆轉錄,Real Time PCR檢測p11mRNA的表達變化。每組設兩個復孔,實驗重復三次。 4. IFN-α對p11蛋白表達的影響：分別用不同濃度(0、50、500、1000、2000、3000IU/ml)的IFN-α刺激SH-SY5Y細胞24小時后,提取細胞總的蛋白,westernblot法檢測P11蛋白的表達變化；用1000IU/ml的IFN-α分別刺激細胞Oh、6h、12h、24h、36h、48h后,提取細胞總的蛋白,westemblot法檢測p11蛋白表達變化。實驗重復三次。 5. IFN-α對p11蛋白在胞內分布的影響：培養(yǎng)SH-SY5Y細胞,分別用不同濃度(0、500,3000IU/ml)的IFN-α刺激SH-SY5Y細胞24小時后,通過固定、封閉、一抗、二抗反應后,在免疫熒光共聚焦顯微鏡下觀察p11蛋白的表達。 6.統(tǒng)計學分析：應用SPSS17.0統(tǒng)計軟件進行數據處理和分析,實驗結果以均數±標準差(x±s)表示,采用單因素方差分析,兩組均數比較用t檢驗,P0.05為差異有統(tǒng)計學意義。 結果 1.成功構建p11-cmv-flag表達質粒,質粒測序結果與NCBI提供序列完全匹配。 2. Western Blot結果顯示p11-cmv-flag表達質粒能夠在SH-SY5Y細胞中成功表達。 3.IFN-α能夠降低SH-SY5Y細胞p11mRNA的表達水平。 4.IFN-α能夠降低SH-SY5Y細胞p11蛋白的表達水平。 5.免疫熒光共聚焦檢測,SH-SY5Y細胞實驗組p11蛋白處理組平均綠色熒光強度顯著低于對照組,IFN-α能夠抑制p11在SH-SY5Y細胞胞膜內表面的聚集。 結論IFN-α能誘導人神經細胞中p11表達量的減少。
[Abstract]:Background IFN- 偽 is widely used in clinical practice, such as antiviral, anti-tumor. But one of the adverse reactions is long-term use of mental depression, and the incidence is relatively high. This greatly limits the clinical application of IFN- 偽. The mechanism of depression induced by IFN- 偽 has been further studied. It is reported that the decrease of p11 protein expression in specific regions of brain is closely related to depression. Moreover, p11 can transport 5-hydroxytryptamine receptor (5HTR4) to the cell membrane. Objective to investigate the effect of IFN-a on the expression of p11 in human nerve cells. Method 1. Construction of p11-cmv-flag expression gene: total RNAs of SH-SY5Y cells were extracted and reverse transcripted into cDNA. According to the known expression sequence of human p11 gene, the primers were designed and amplified using cDNA as template. The obtained product contains the full-length. Hind 鈪，

本文編號：1390303