本文關(guān)鍵詞：體外聯(lián)合誘導臍血單個核細胞向內(nèi)皮樣細胞分化的實驗研究　出處：《福建醫(yī)科大學》2008年碩士論文　論文類型：學位論文

  更多相關(guān)文章： 臍血單個核細胞 纖維連接蛋白 誘導分化 細胞因子 植物血球凝集素

【摘要】： 目的:探討細胞外基質(zhì)、植物血球凝集素(phytohemagglutinin ,PHA-M)、血管內(nèi)皮生長因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)和堿性成纖維生長因子(basic fibroblast growth factor,bFGF),聯(lián)合誘導人臍血單個核細胞(mononuclear cells,MNC)向內(nèi)皮樣細胞分化的可行性,及此體系中不同細胞外基質(zhì)(extracellular matrix ,ECM)對內(nèi)皮樣細胞誘導效率的影響。 方法:密度梯度離心法分離臍血單個核細胞,在含有PHA、VEGF、bFGF及ECM等具有誘導分化作用的因子的培養(yǎng)基中進行體外培養(yǎng)。倒置顯微鏡下觀察細胞形態(tài)及三維體系中血管的形成;應用免疫細胞化學,半定量RT-PCR、流式細胞學等方法檢測內(nèi)皮細胞標記Ⅷ因子、假性血友病因子(von Willebrand factor, vWF)和一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase,eNOS)及CD31的表達,并描繪細胞生長曲線,以鑒定誘導的細胞生物學特性及比較不同細胞外基質(zhì)對誘導效率的影響。 結(jié)果:①倒置顯微鏡下觀察結(jié)果:最初貼壁時細胞為小圓形,PHA刺激24小時后細胞聚集成團,誘導第5天集落周邊出現(xiàn)少量梭形細胞且數(shù)量逐漸增多;7天可見線狀排列,大量典型梭形貼壁細胞生成,在三維培養(yǎng)體系中形成血管樣結(jié)構(gòu)。②培養(yǎng)7天,貼壁細胞表達內(nèi)皮細胞標記FⅧ因子,eNOS、vWF和CD31。③FN組培養(yǎng)7天后eNOS(0.476±0.072)、vWF(0.729±0.114)表達均高于其它兩組(P0.05);其CD31的表達率由第7天(48.04±5.34%)到第14天(72.90±8.54%),均高于同一時間膠原組與對照組(P0.05)。 結(jié)論:①臍血中存在內(nèi)皮前體細胞,分離得到的單個核細胞能在體外定向誘導分化為內(nèi)皮樣細胞。②證實在不降低誘導效率的前提下,PHA與VEGF、bFGF聯(lián)合誘導可縮短臍血單個核細胞分化為內(nèi)皮樣細胞的時間,具有協(xié)同效應。③纖維連接蛋白較膠原可促進內(nèi)皮樣細胞的誘導。④臍血有望成為治療缺血性疾病的一種有效的干細胞來源。
[Abstract]:Objective: To investigate the effects of extracellular matrix, phytohemagglutinin (phytohemagglutinin, PHA-M), vascular endothelial growth factor (vascular endothelial, growth factor, VEGF) and basic fibroblast growth factor (basic fibroblast, growth factor, bFGF), induced by human umbilical blood mononuclear cells (mononuclear, cells, MNC) to the feasibility of endothelial like cells and this system, different extracellular matrix (extracellular matrix ECM) effect on endothelial cells induced by efficiency.
Methods: isolated umbilical cord blood mononuclear cells by density gradient centrifugation in VEGF medium containing PHA, bFGF, and ECM factor can induce the differentiation of cultured in vitro. Observation of cell morphology and angiogenesis in 3D system under the inverted microscope; using immunocytochemical, semi quantitative RT-PCR, flow cytometry etc. detection of endothelial cell marker von Willebrand factor, von Willebrand factor (von Willebrand, factor, vWF) and nitric oxide synthase (endothelial nitric oxide synthase, eNOS) and the expression of CD31, and describe the cell growth curve, and the comparison of different extracellular matrix cell characterization induced induction efficiency.
Results: the results were observed by inverted microscope: first adherent cells were round, 24 hours after the stimulation of PHA cells together, after fifth days the colony appeared around a small number of spindle cells and increased gradually; 7 days can be seen in the linear array, a large number of typical spindle shaped adherent cells to form vascular like structure in the three-dimensional culture system. The adherent cells were cultured for 7 days, the expression of endothelial cell markers F factor VIII, eNOS, vWF and CD31. in FN group after 7 days of culture eNOS (0.476 + 0.072), vWF (0.729 + 0.114) expression were higher than that of the other two groups (P0.05); the expression rate of CD31 by seventh days (48.04 + 5.34%) to fourteenth days (72.90 + 8.54%), were higher than the same time collagen group and the control group (P0.05).
Conclusion: endothelial progenitor cells of human umbilical cord blood, mononuclear cells isolated can differentiate into endothelial like cells in vitro. The confirmed in the premise of not reducing the efficiency of induction, PHA and VEGF, can shorten the time of umbilical cord blood mononuclear cells differentiation into endothelial like cells induced by the time bFGF, synergistic effect 3. Compared with collagen induced fibronectin can promote endothelial cells. The umbilical cord is expected to become an effective source of stem cells for the treatment of ischemic diseases.

【學位授予單位】：福建醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2008
【分類號】：R329

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