本文關(guān)鍵詞：脂肪與骨髓來源的間充質(zhì)干細(xì)胞誘導(dǎo)分化為神經(jīng)細(xì)胞的比較　出處：《山西醫(yī)科大學(xué)》2010年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

  更多相關(guān)文章： 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞 脂肪干細(xì)胞 神經(jīng)元樣細(xì)胞 體外誘導(dǎo) 細(xì)胞分化

【摘要】： 目的：脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞(Adipose-derived stem cells, ADSCs)和骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(Bone marrowmesenchymal stem cells, BMSCs)均具有分化為神經(jīng)細(xì)胞的潛能。探討ADSCs與BMSCs的取材、原代及傳代培養(yǎng)、干細(xì)胞表型的鑒定,比較其分離,培養(yǎng)及擴增的不同點,比較ADSCs與BMSCs在分化中的最佳誘導(dǎo)時間,最佳誘導(dǎo)劑劑量,以及誘導(dǎo)陽性率的不同。探討脂肪干細(xì)胞和骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞在體外培養(yǎng)和誘導(dǎo)分化為神經(jīng)細(xì)胞方面的差異,選擇最優(yōu)的種子細(xì)胞,為中樞神經(jīng)統(tǒng)統(tǒng)疾病的治療提供前提和保障。 方法：ADSCs提取自山西醫(yī)科大學(xué)生理教研室提供的vista大鼠皮下脂肪組織,BMSCs提取自同一只大鼠四肢長骨骨髓,體外分離、培養(yǎng)、擴增。流式細(xì)胞儀法檢測干細(xì)胞表面CD34, CD45, CD90,CD105的表達(dá)。MTT法檢測兩種來源的干細(xì)胞生長情況,繪制生長曲線圖。使用5 mmol/LBME+2% DMSO,5ng/mL、20ng/mL、40ng/mLbFGF的無血清培養(yǎng)基對傳至3-5代的干細(xì)胞進(jìn)行誘導(dǎo)分化,無血清的DMEM培養(yǎng)基做空白對照,使用倒置顯微鏡動態(tài)觀察誘導(dǎo)前后及誘導(dǎo)過程中細(xì)胞的形態(tài)學(xué)變化。通過免疫細(xì)胞化學(xué)法檢測分化后細(xì)胞的NSE、MAP2表達(dá)情況,證明ADSCs分化的結(jié)果并計算陽性率。 結(jié)果：原代脂肪干細(xì)胞呈單細(xì)胞懸浮狀態(tài),3h后即開始貼壁,12-24h大量貼壁,24h第一次換液后貼壁細(xì)胞形態(tài)上和BMSCs類似,8-10d后可1：3傳代,此后每2-3天可長滿一代,傳代細(xì)胞逐漸表現(xiàn)為折光性較強的均一梭狀細(xì)胞并呈漩渦狀生長,ADSCs可傳20代次以上,增長非常迅速。原代骨髓干細(xì)胞接種后可見大量紅細(xì)胞,48h半量換液后可見少量細(xì)胞開始貼壁,72h貼壁細(xì)胞開始增多呈紡錘狀、圓形或橢圓形,折光性較強,5-6天左右全量換液可見散在的貼壁細(xì)胞呈集落狀生長,2周左右形成較大的集落,并開始相互融合,達(dá)到傳代要求,傳代細(xì)胞生長速度較傳代前加快,但仍遠(yuǎn)低于ADSCs,7-8代以后生長速度逐漸減慢,表現(xiàn)出衰老現(xiàn)象。細(xì)胞傳代接種后第3天左右進(jìn)入指數(shù)生長期,ADSCs第6天達(dá)到生長峰值,約7天后進(jìn)入平臺期。BMSCs第8天達(dá)到生長峰值,9天后進(jìn)入平臺期。流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞表面標(biāo)志CD90(+), CD105(+),CD34(-), CD45(-),低濃度bFGF誘導(dǎo)陽性率極低,中,高濃度組成熟神經(jīng)細(xì)胞表達(dá)的NSE, MAP2陽性。BMSCs最佳誘導(dǎo)濃度20ng/mL, ADSCs最佳誘導(dǎo)濃度40ng/mL, bFGF優(yōu)于化學(xué)誘導(dǎo)劑,ADSCs誘導(dǎo)陽性率高于BMSCs。 結(jié)論： 1、ADSCs與BMSCs都具有多向分化潛能且表達(dá)相似的表面標(biāo)志,他們都可以定向誘導(dǎo)分化為神經(jīng)細(xì)胞。 2、ADSCs比BMSCs來源廣泛,原代及傳代培養(yǎng)的時間短,增殖能力更強,并且更易培養(yǎng),不易衰老。 3、一定誘導(dǎo)條件下,ADSCs誘導(dǎo)陽性率高于BMSCs,脂肪組織是一種新的間充質(zhì)干細(xì)胞來源。
[Abstract]:Objective: adipose derived mesenchymal stem cells (Adipose-derived stem cells, ADSCs) and bone marrow mesenchymal stem cells (Bone marrowmesenchymal stem cells, BMSCs) have the potential to differentiate into nerve cells. ADSCs and BMSCs were discussed, and cultured in vitro, identification of stem cell phenotype, the separation, culture and different points of amplification, the best induction time between ADSCs and BMSCs in the differentiation of the optimal dose of inducer, and different induction rate. To investigate the adipose derived stem cells and bone marrow mesenchymal stem cells cultured in vitro and induced to differentiate into neural cells between the optimal selection of seed cells, to provide the premise and guarantee for the all the treatment of central nervous diseases.
Methods: ADSCs was extracted from Department of physiology of Shanxi Medical University Vista rats subcutaneous adipose tissue, BMSCs extraction from the same rat bone marrow in vitro, isolation, culture, amplification. Flow cytometry method for the detection of stem cell surface CD34, CD45, CD90, CD105 method to detect the expression of.MTT two sources of stem growth the cell growth curves, using 5 mmol/LBME+2%. DMSO, 5ng/mL, 20ng/mL, no radical on the passage to 3-5 induced differentiation of stem cells cultured in serum 40ng/mLbFGF, serum free DMEM medium as blank control, using the inverted microscope to observe morphological changes before and after induction and dynamic process of cells induced by NSE cells. The detection of differentiation by immunocytochemistry, the expression of MAP2, ADSCs proved differentiation results and calculated the positive rate.
Results: the primary adipose derived stem cells in single cell suspension, 3h is adhered to the wall, a lot of adherent 12-24h, 24h first medium change after adherent cells morphologically similar to BMSCs, 8-10d after 1:3 passages, then every 2-3 days can be covered with a generation of cells gradually showed homogeneous spindle cell refraction strong and swirl growth, ADSCs can spread over 20 times, grew very rapidly. The primary bone marrow stem cells after inoculation showed a large number of red blood cells, 48h was half changed after a small amount of cells adhered to the wall, 72h began to increase in adherent cells were fusiform, round or oval. The refractive index of strong, 5-6 days was all changed scattered in adherent cells showed colony like growth, about 2 weeks to form a larger colony, and fusion of the passage, the cells grow faster than before to speed up the passage, but still much lower than that of ADSCs, 7-8 in growth speed gradually Slow down, showing aging phenomenon. About third days after inoculation of cells entered exponential growth stage, ADSCs sixth days to reach the peak of growth, about 7 days into the plateau.BMSCs eighth days to reach the peak of growth, 9 days into the plateau. Flow cytometry to detect the surface markers of CD90 (+), CD105 (+), CD34 (-), CD45 (-), low concentration bFGF induced positive rate is extremely low, and the high concentration group of mature neural cells and expression of NSE, MAP2 positive.BMSCs optimal concentration of 20ng/mL, ADSCs 40ng/mL bFGF is better than the optimal concentration, chemical inducers, ADSCs induced positive rate higher than BMSCs.
Conclusion:
1, both ADSCs and BMSCs have multidirectional differentiation potential and express similar surface markers, and they can be directed to induce differentiation into neural cells.
2, ADSCs is more extensive than BMSCs. The primary and subculture time is short, the proliferation ability is stronger, and the culture is more easy to be cultivated, and it is not easy to senescence.
3, under certain induction conditions, the positive rate of ADSCs is higher than that of BMSCs, and adipose tissue is a new source of mesenchymal stem cells.

【學(xué)位授予單位】：山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類號】：R329

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 林麗敏;邱學(xué)榮;邱曉燕;唐秋靈;王鴻武;林曉波;謝麗春;羅梅娟;馬桂霞;林廣裕;史雪川;馬廉;;人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞、人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞源男性生殖細(xì)胞樣細(xì)胞的免疫學(xué)特性[J];實用兒科臨床雜志;2011年17期

2 馮德鵬;李雪莉;范炎;;臍血間充質(zhì)干細(xì)胞的研究進(jìn)展[J];國際老年醫(yī)學(xué)雜志;2010年05期

3 ;本期專題:臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞的生物學(xué)特性[J];中國組織工程研究與臨床康復(fù);2011年32期

4 李霞云;侯玲玲;馬月輝;李向臣;王開功;關(guān)偉軍;;牛胎肺間充質(zhì)干細(xì)胞體外培養(yǎng)及生物學(xué)特性研究[J];安徽農(nóng)業(yè)科學(xué);2011年17期

5 魏開鵬;陳海鶯;潘興南;何金秋;;人骨髓來源間充質(zhì)干細(xì)胞的體外分離方法及鑒定[J];醫(yī)藥論壇雜志;2011年12期

6 江波;廖毅;童庭輝;;脂肪來源干細(xì)胞誘導(dǎo)表皮細(xì)胞化的研究現(xiàn)狀與進(jìn)展[J];中國組織工程研究與臨床康復(fù);2011年27期

7 吳玉卓;陳紅;;臍血間充質(zhì)干細(xì)胞體外誘導(dǎo)成肝細(xì)胞的研究進(jìn)展[J];中國肝臟病雜志(電子版);2008年02期

8 管英華;謝揚虎;魏曉巍;李玉云;;臍帶源性和臍血源性間充質(zhì)干細(xì)胞分離培養(yǎng)方法的比較[J];中華全科醫(yī)學(xué);2011年09期

9 王宏;胡江;吳永華;李凌松;李麗英;洪天配;;胎兒胰腺巢蛋白陽性細(xì)胞具有間充質(zhì)表型特征[J];中國糖尿病雜志;2007年03期

10 隆玄;吳曉丹;施勁東;李善群;;間充質(zhì)干細(xì)胞在急性肺損傷中的應(yīng)用進(jìn)展[J];中國臨床醫(yī)學(xué);2011年03期

相關(guān)會議論文 前10條

1 楊少光;池穎;戎麗娟;邢文;盧士紅;趙欽軍;馬鳳霞;韓忠朝;;不同來源間充質(zhì)干細(xì)胞誘導(dǎo)分化成血管內(nèi)皮細(xì)胞的比較[A];第13屆全國實驗血液學(xué)會議論文摘要[C];2011年

2 姜廷帥;蔡莉;惠延年;閆峰;;大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞體外誘導(dǎo)分化為角膜上皮細(xì)胞的實驗研究[A];中國眼底病論壇·全國眼底病專題學(xué)術(shù)研討會論文匯編[C];2008年

3 白春雨;李方華;龐全海;關(guān)偉軍;馬月輝;;北京油雞臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞分離培養(yǎng)及誘導(dǎo)分化的研究[A];中國動物遺傳育種研究進(jìn)展——第十五次全國動物遺傳育種學(xué)術(shù)討論會論文集[C];2009年

4 陳增海;馬萬里;陳鵬;高春正;任鵬;;RA對臍血間充質(zhì)干細(xì)胞體外向神經(jīng)元樣細(xì)胞誘導(dǎo)分化的影響[A];第二屆華東地區(qū)骨科學(xué)術(shù)大會暨山東省第九次骨科學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2007年

5 洪玉;徐國興;;體外間充質(zhì)干細(xì)胞誘導(dǎo)分化為光感受器樣細(xì)胞實驗研究[A];第十屆全國中西醫(yī)結(jié)合眼科學(xué)術(shù)會議暨第五屆海峽眼科學(xué)術(shù)交流會論文匯編[C];2011年

6 洪玉;徐國興;;體外間充質(zhì)干細(xì)胞誘導(dǎo)分化為光感受器樣細(xì)胞的蛋白質(zhì)組學(xué)研究[A];第十屆全國中西醫(yī)結(jié)合眼科學(xué)術(shù)會議暨第五屆海峽眼科學(xué)術(shù)交流會論文匯編[C];2011年

7 朱恒;江小霞;劉元林;張毅;毛寧;;間充質(zhì)干細(xì)胞選擇性調(diào)節(jié)破骨細(xì)胞發(fā)育和功能[A];第13屆全國實驗血液學(xué)會議論文摘要[C];2011年

8 馬曉榮;張勝利;吳齊全;高同斌;周君梅;謝華;陳方;;應(yīng)用5-雜氮脫氧胞苷誘導(dǎo)人羊水來源間充質(zhì)干細(xì)胞向成肌細(xì)胞樣細(xì)胞分化的體外實驗研究[A];中華醫(yī)學(xué)會第八次全國小兒外科學(xué)術(shù)會論文集[C];2010年

9 張東輝;許永華;許琴;李建瑛;是文輝;李佳佳;盧開伯;邢彥超;于良寬;龍志新;;“三階段法”分離培養(yǎng)與鑒定人臍血間充質(zhì)干細(xì)胞[A];第九屆中國實驗動物科學(xué)年會（2010新疆）論文集[C];2010年

10 李力;王海燕;杜娟;賴潔娟;劉慶;黃蘇娜;蔣建新;;直流電刺激對人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞物理特性的影響實驗研究[A];第七屆全國創(chuàng)傷學(xué)術(shù)會議暨2009海峽兩岸創(chuàng)傷醫(yī)學(xué)論壇論文匯編[C];2009年

相關(guān)重要報紙文章 前10條

1 王秋月　王琳;空軍總醫(yī)院采用間充質(zhì)干細(xì)胞救治小腦萎縮[N];科技日報;2009年

2 記者 李素鋒;我市首例間充質(zhì)干細(xì)胞移植手術(shù)取得成功[N];臨汾日報;2009年

3 通訊員 王根華　記者 陳青;誘導(dǎo)分化 讓癌細(xì)胞“改邪歸正”[N];文匯報;2008年

4 ;誘導(dǎo)分化讓癌細(xì)胞有了“克星”[N];上�？萍紙�;2008年

5 記者 王丹　通訊員 艾素;異染性腦白質(zhì)營養(yǎng)不良治療獲突破[N];健康報;2010年

6 胡德榮;低氧環(huán)境誘導(dǎo)急粒白血病細(xì)胞系分化[N];健康報;2006年

7 本報記者 徐瑞哲　實習(xí)生 馮瑤;王振義：500萬這樣分,心平[N];解放日報;2011年

8 白毅　顧偉民;黑暗中的一盞明燈[N];中國醫(yī)藥報;2011年

9 段恩奎;人造精子用于臨床不能過于樂觀[N];科技日報;2006年

10 記者 白毅;間充質(zhì)干細(xì)胞可促進(jìn)成熟樹突狀細(xì)胞增殖分化[N];中國醫(yī)藥報;2009年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 李東杰;人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞促進(jìn)創(chuàng)面愈合及體外誘導(dǎo)分化為表皮樣細(xì)胞的實驗研究[D];中國人民解放軍軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院;2011年

2 熊卉;轉(zhuǎn)化生長因子β1基因體外轉(zhuǎn)染兔顳下頜關(guān)節(jié)滑膜間充質(zhì)干細(xì)胞向纖維軟骨轉(zhuǎn)化實驗研究[D];武漢大學(xué);2010年

3 彭飛;620nm非相干紅光對大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的光生物調(diào)節(jié)作用[D];華中科技大學(xué);2011年

4 于美嬌;系統(tǒng)歸巢的間充質(zhì)干細(xì)胞在牙周組織修復(fù)再生過程中的作用研究[D];山東大學(xué);2011年

5 李寶軍;脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞體外誘導(dǎo)及復(fù)合PLGA體內(nèi)異位成軟骨的實驗研究[D];中南大學(xué);2007年

6 朱雅姝;Flk-1~+間充質(zhì)干細(xì)胞對腫瘤細(xì)胞增殖的抑制作用及其分子機制研究[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2008年

7 吳桂珠;脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞治療壓力性尿失禁的實驗研究[D];福建醫(yī)科大學(xué);2010年

8 苗宗寧;胎盤間充質(zhì)干細(xì)胞與絲素蛋白/羥基磷灰石材料在骨創(chuàng)傷修復(fù)中的實驗研究[D];蘇州大學(xué);2010年

9 張展;鹿茸肽促進(jìn)人脂肪來源間充質(zhì)干細(xì)胞增殖及成軟骨分化的研究[D];吉林大學(xué);2011年

10 梁偉;人骨髓Flk-1~+間充質(zhì)干細(xì)胞抗DNA損傷物質(zhì)影響作用研究[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2008年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 李麗;人胎盤來源的間充質(zhì)干細(xì)胞向血管內(nèi)皮細(xì)胞分化潛能的研究[D];中國醫(yī)科大學(xué);2010年

2 張鈺;體外誘導(dǎo)人胎盤間充質(zhì)干細(xì)胞分化為軟骨細(xì)胞的實驗研究[D];中國醫(yī)科大學(xué);2008年

3 馬嵐;人間充質(zhì)干細(xì)胞向神經(jīng)細(xì)胞誘導(dǎo)過程中表面標(biāo)記的變化[D];鄭州大學(xué);2005年

4 黃偉;臍血源間充質(zhì)干細(xì)胞生物學(xué)特性及其向神經(jīng)樣細(xì)胞分化的實驗研究[D];蘇州大學(xué);2005年

5 汲晶;脂肪與骨髓來源的間充質(zhì)干細(xì)胞誘導(dǎo)分化為神經(jīng)細(xì)胞的比較[D];山西醫(yī)科大學(xué);2010年

6 王利霞;5-氮胞苷體外誘導(dǎo)人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向心肌樣細(xì)胞分化的實驗研究[D];鄭州大學(xué);2005年

7 石丹;骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞體外誘導(dǎo)分化為胰島樣細(xì)胞的研究[D];吉林大學(xué);2007年

8 馬萬里;RA對臍血干細(xì)胞體外向神經(jīng)元樣細(xì)胞誘導(dǎo)分化的影響[D];山東大學(xué);2006年

9 唐子濱;納米級膠原基骨材料復(fù)合自體脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞用于兔后外側(cè)脊柱融合的實驗研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2010年

10 陳義;臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)及體外重建角膜后板層的初步研究[D];暨南大學(xué);2010年

，

本文編號：1383801