本文關(guān)鍵詞：脾細(xì)胞聯(lián)合抗CD154單抗的非清髓異基因骨髓移植誘導(dǎo)大鼠胰腺移植耐受　出處：《昆明醫(yī)學(xué)院》2008年博士論文　論文類(lèi)型：學(xué)位論文

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【摘要】： 目的建立異基因大鼠全胰十二指腸移植(WPDT)模型,并探討手術(shù)過(guò)程操作要點(diǎn),為研究術(shù)后排斥反應(yīng)提供實(shí)驗(yàn)手段。方法采用60 mg/Kg鏈尿佐菌素(STZ)一次性腹腔注射建立Wistar大鼠Ⅰ型糖尿病模型。在原有建模的經(jīng)驗(yàn)基礎(chǔ)之上改進(jìn)動(dòng)脈吻合方式,將供受體腹主動(dòng)脈端側(cè)吻合,供體門(mén)靜脈與受體左腎靜脈袖套吻合,供體十二指腸與受體小腸端側(cè)吻合,成功建立Lewis→Wistar糖尿病大鼠異基因WPDT模型。對(duì)移植成功的受鼠3次/周監(jiān)測(cè)血糖,并記錄存活時(shí)間(ST),術(shù)后第7天取材3只大鼠移植物行病理學(xué)檢查。結(jié)果STZ誘導(dǎo)糖尿病大鼠成模率為85.7%,酮癥酸中毒(DKA)發(fā)生率為5.6%,病死率7.4%。50只糖尿病大鼠行WPDT術(shù)式,44例移植成功,術(shù)后24h血糖由術(shù)前(22.83±4.37)mmol/L降至(6.36±2.18)mmol/L。其中有8例于術(shù)后3d內(nèi)死亡,其余36例受鼠存活時(shí)間為6～16d,平均為(10.45±3.3)d,術(shù)后4d、7d、10d、13d血糖水平呈進(jìn)行性升高,術(shù)后7～10d為死亡高峰,移植物病理改變呈典型的急性排斥反應(yīng)。結(jié)論STZ誘導(dǎo)糖尿病模型成功率高,對(duì)機(jī)體其它臟器毒性小,動(dòng)物模型穩(wěn)定。熟練操作技術(shù),重視細(xì)小環(huán)節(jié),是成功建立WPDT模型的關(guān)鍵因素。本法建立的WPDT模型可見(jiàn)到移植胰發(fā)揮內(nèi)分泌功能以及典型的急性排斥反應(yīng)病理改變,可用于排斥反應(yīng)的研究。 目的探討供體脾細(xì)胞門(mén)靜脈輸注聯(lián)合抗CD154單克隆抗體(anti CD154mAb)的非清髓性骨髓移植預(yù)處理方案在異基因大鼠胰十二指腸移植(PDT)免疫耐受誘導(dǎo)中的作用及可能機(jī)制。方法一次性腹腔推注鏈尿佐菌素60 mg/Kg建立Wistar(Rt1~u)大鼠Ⅰ型糖尿病模型。以L(fǎng)ewis(Rt1~1)大鼠為供體,糖尿病Wistar大鼠為受體,SD大鼠為無(wú)關(guān)第三品系。受體隨機(jī)分為3組,每組13只:移植組,行Lewis→Wistar PDT,移植術(shù)前、后不進(jìn)行任何處理;單抗組,PDT術(shù)后腹腔注射3mg anti CD154 mAb;耐受組,按耐受誘導(dǎo)方案進(jìn)行。方案為:第0天,經(jīng)受鼠門(mén)靜脈輸注供體來(lái)源的脾細(xì)胞2×10~8,2h后腹腔注射3mg anti CD154mAb;第3天,經(jīng)受鼠陰莖背靜脈輸注供體來(lái)源的骨髓細(xì)胞1×10~8;第20天,行PDT。術(shù)后第7天,各組隨機(jī)取6只行血糖水平測(cè)定,用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測(cè)血清IL-10和IFN-γ水平;取材移植物行病理檢查,TUNEL-POD法檢測(cè)原位細(xì)胞凋亡以及吲哚胺-2,3-雙加氧酶(IDO)免疫組化分析;流式細(xì)胞術(shù)對(duì)受鼠脾、胸腺Rt1~(1+)水平進(jìn)行嵌合體測(cè)定;同時(shí)行單向混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)(MLR),大鼠重組白細(xì)胞介素2(IL-2)逆轉(zhuǎn)實(shí)驗(yàn)和體內(nèi)過(guò)繼轉(zhuǎn)移實(shí)驗(yàn)。各組剩余的7只用于移植物功能存活時(shí)間觀察。結(jié)果PDT術(shù)后第7天,耐受組血清IL-10為(188.42±23.15)pg/mL,顯著高于移植組和單抗組;IFN-γ濃度為(202.46±24.07)pg/mL,顯著低于其余兩組;Th1/Th2細(xì)胞因子平衡向Th2偏移。病理學(xué)檢查發(fā)現(xiàn),移植組與單抗組移植物病變均呈典型的急性排斥反應(yīng),組織學(xué)評(píng)分分別為(4.67±0.52)分和(4.00±0.63)分,差異無(wú)顯著性(P=0.104);而耐受組移植物排斥反應(yīng)以Ⅱ～Ⅲ級(jí)為主,評(píng)分為(2.67±0.82)分,病變明顯輕于前兩組(P＜0.01);十二指腸排斥反應(yīng)程度與胰腺基本一致。術(shù)后三組移植物均可檢測(cè)到細(xì)胞凋亡,而耐受組細(xì)胞凋亡數(shù)顯著少于其余兩組(P＜0.01)。免疫組化結(jié)果提示,各組移植物IDO表達(dá)均無(wú)顯著性差異(P＞05),胰腺腺泡細(xì)胞、十二指腸黏膜上皮細(xì)胞及淋巴細(xì)胞均呈強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá),IDO表達(dá)部位為胞漿。嵌合體檢測(cè),只有耐受組大鼠的脾臟、胸腺內(nèi)可檢測(cè)到Rt1~(1+)嵌合細(xì)胞,嵌合水平分別為(31.56±6.57)%和(22.04±8.12)%。單向MLR實(shí)驗(yàn)中,耐受組對(duì)Lewis大鼠脾細(xì)胞的刺激指數(shù)百分率(SI%)為(26.41±5.16)%,顯著低于移植組和單抗組(P＜0.01);而單抗組對(duì)Lewis和SD供體脾細(xì)胞的刺激均有一定的抑制作用。外源性IL-2可完全或部分逆轉(zhuǎn)上述兩個(gè)MLR體系中的抑制效應(yīng)。體內(nèi)過(guò)繼轉(zhuǎn)移實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示耐受組大鼠體內(nèi)存在調(diào)節(jié)/抑制性T細(xì)胞。移植組和單抗組均不能延長(zhǎng)移植物功能平均存活時(shí)間(MIST),而耐受組可將MST延長(zhǎng)到(21.83±1.11)天。結(jié)論單獨(dú)使用anti CD154 mAb的單抗組不能有效建立嵌合體、誘導(dǎo)免疫耐受,在此基礎(chǔ)上聯(lián)合供體脾、骨髓細(xì)胞,可在糖尿病大鼠體內(nèi)建立異基因混合性嵌合體并在含有兩個(gè)高免疫原性器官的PDT中誘導(dǎo)機(jī)體特異性免疫耐受,減輕移植物排斥反應(yīng)程度,延長(zhǎng)移植物功能MST。誘導(dǎo)方案發(fā)揮致免疫耐受作用不依賴(lài)于IDO活性表達(dá),聯(lián)合兩種方法可能具有協(xié)同作用。免疫耐受形成的可能機(jī)制包括外周、中樞性嵌合體的建立、Th1/Th2細(xì)胞因子平衡偏離、通過(guò)抑制細(xì)胞過(guò)度凋亡參與T細(xì)胞克隆清除、克隆無(wú)能以及調(diào)節(jié)/抑制等外周耐受機(jī)制。
[Abstract]:Objective To establish a model of pancreatic duodenal transplantation ( WPDT ) in rats with allogene - induced diabetic rats . Objective To investigate the effects of donor spleen cell portal vein infusion combined with anti - CD154 monoclonal antibody ( anti - CD154 mAb ) on immune tolerance induced by pancreatic duodenal transplantation ( PDT ) in rats .

【學(xué)位授予單位】：昆明醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2008
【分類(lèi)號(hào)】：R392.4

【參考文獻(xiàn)】

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1 郝潔;劉家望;高翔;袁國(guó)紅;謝蜀生;;抗T細(xì)胞受體αβ單抗和抗CD80單抗聯(lián)合供體骨髓移植誘導(dǎo)小鼠皮膚移植耐受[J];北京大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2006年04期

2 刁暢,程若川,魏曉崗;胰腺移植現(xiàn)狀分析[J];臨床外科雜志;2004年02期

3 張召輝,李璽,路逵陽(yáng),鞏新建,陳復(fù)興;大鼠胰十二指腸移植模型的建立[J];徐州醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2003年03期

4 王翔,趙鴻,張?jiān)?丁強(qiáng),瞿連喜,吳忠,孫正達(dá),古濤;未成熟樹(shù)突狀細(xì)胞誘導(dǎo)大鼠免疫低反應(yīng)性[J];中華器官移植雜志;2005年04期

5 刁暢,程若川,魏曉崗,馮曜宇,李恩全;大鼠胰十二指腸移植缺血-再灌注損傷模型的建立[J];中華實(shí)驗(yàn)外科雜志;2003年10期

6 程若川,刁暢,魏曉崗,錢(qián)軍,羅華友,馮曜宇;奧曲肽對(duì)大鼠胰腺移植缺血再灌注損傷的保護(hù)機(jī)制[J];中華實(shí)驗(yàn)外科雜志;2004年08期

7 于平,熊思東,何球藻,儲(chǔ)以微,鄭秀娟;未成熟樹(shù)突狀細(xì)胞誘導(dǎo)異基因嵌合體的形成[J];中國(guó)免疫學(xué)雜志;2002年04期

8 王為忠,劉小南,李開(kāi)宗,陳彩平,陳冬利,羅蘭;大鼠單純胰腺移植手術(shù)技術(shù)[J];中國(guó)普外基礎(chǔ)與臨床雜志;2005年02期

9 胡偉明;韓方海;張肇達(dá);周詳;孟令祥;;豬同種異體胰十二指腸移植門(mén)靜脈回流腸內(nèi)引流模型的實(shí)驗(yàn)研究[J];中國(guó)普外基礎(chǔ)與臨床雜志;2007年02期

10 劉忠,關(guān)鳳林,沈忠義,陳海龍,倪曉光,呂申,侯力;異基因大鼠全胰十二指腸移植急性排斥反應(yīng)的病理變化[J];中國(guó)普通外科雜志;2002年03期

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本文編號(hào)：1383464