本文關(guān)鍵詞：腸道病毒71型H6株在Vero細胞上的傳代適應(yīng)　出處：《河南師范大學(xué)》2010年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：腸道病毒71型(EV71)感染可引起手足口病、皰疹性咽峽炎、無菌性腦膜炎、脊髓灰質(zhì)炎樣麻痹、腦干腦炎、肺水腫等多種疾病。近年來,引起嚴(yán)重神經(jīng)系統(tǒng)疾病的EV71大爆發(fā)在亞太地區(qū)頻繁出現(xiàn),包括1997年的馬來西亞、1999年的澳大利亞、2000年的新加坡、1997年和2000年的日本,1998年的中國臺灣,及2008年和2009年的中國大陸等。在過去的10年里,由EV71引起的神經(jīng)系統(tǒng)綜合癥不斷增多。隨著EV71在全世界范圍的蔓延,如何有效治療和控制該病毒的傳播一直是人們關(guān)注的焦點。由于目前尚無針對EV71的特效藥和疫苗,因此,研發(fā)一種能有效控制EV71流行的疫苗已勢在必行。本課題研究了EV71 H6株在Vero細胞中的傳代適應(yīng),為以后制備疫苗提供大量抗原。 本課題以EV71 H6株病毒為研究材料,建立其在Vero細胞上的適應(yīng)株。首先將EV71 H6株病毒在RD細胞上進行分離,并在Vero細胞上通過蝕斑篩選和適應(yīng)性傳代,然后開展生物學(xué)、免疫學(xué)及理化學(xué)特性的研究。 用常規(guī)方法處理來自臨床確診為手足口病患兒的糞便標(biāo)本。將標(biāo)本接種于RD細胞,盲傳3代后即可出現(xiàn)明顯的細胞病變,然后在Vero細胞上進行蝕斑篩選和連續(xù)傳代培養(yǎng)。結(jié)果顯示,各代病毒蝕斑直徑大小沒有變化,傳至第5代時,CPE明顯增多,病毒滴度從4.75 LogCCID50/ml提高到8.13 LogCCID50/ml,繼續(xù)傳代,病毒滴度穩(wěn)定在8.00 LogCCID50/ml以上。EV71 H6株病毒的最佳培養(yǎng)條件試驗表明,制備毒種的適宜MOI為0.01;在96小時左右收獲的病毒滴度最高;在-80℃環(huán)境下能夠穩(wěn)定保存。理化學(xué)研究試驗結(jié)果表明,EV71核酸類型為RNA,不具有耐熱性,但可耐受乙醚、酸的作用。經(jīng)傳代后的穩(wěn)定性試驗研究表明,EV71 H6適應(yīng)株可被特異抗EV71血清中和,證明該病毒確為EV71型。用EV71 H6適應(yīng)株病毒免疫家兔,以RD細胞為基質(zhì)進行中和試驗,其免疫原性研究結(jié)果顯示,中和抗體效價有了逐步提高,最高可達1:1024,顯示了良好的免疫原性。 初步試驗結(jié)果表明,EV71 H6株在Vero細胞中能進行適應(yīng)性傳代,并保持穩(wěn)定的生物學(xué)性狀。該結(jié)果為EV71疫苗的進一步研究提供了很有價值的參考數(shù)據(jù)。
[Abstract]:Enterovirus 71 ( EV71 ) infection can cause a variety of diseases such as hand - foot oral disease , herpes angina , aseptic meningitis , poliomyelitis - like paralysis , encephalitis , pulmonary edema , etc . In recent years , EV71 caused by severe nervous system diseases has been increasing frequently in the Asia - Pacific region . In this study , the EV71 H6 strain was used as the research material to establish its adaptive strain on Vero cells . The EV71 H6 strain was first isolated on RD cells , and the Vero cells were screened by plaque screening and adaptive passage . Then , the biological , immunological and chemical properties of EV71 H6 strain were studied . The results showed that EV71 H6 strain could be used as an EV71 type . The results showed that EV71 H6 strain could be used as an EV71 type . The results showed that EV71 H6 strain could be used as an EV71 type . The results showed that EV71 H6 strain could be used as substrate for neutralization test . The results showed that EV71 H6 strain can be used in Vero cells for adaptive passage and stable biological characters . The results provide valuable reference data for further research of EV71 vaccine .

【學(xué)位授予單位】：河南師范大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類號】：R346

【參考文獻】

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本文編號：1378474