本文關(guān)鍵詞：大鼠Neurogenesin-1基因真核表達(dá)載體的構(gòu)建及在cos-7細(xì)胞中的表達(dá)　出處：《安徽醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)》2009年04期 　論文類(lèi)型：期刊論文

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【摘要】：目的克隆大鼠海馬中Neurogenesin-1(Ng1)基因片段,構(gòu)建pSecTag2/HygroB-Ng1真核表達(dá)載體,并檢測(cè)其在cos-7細(xì)胞中的表達(dá),為進(jìn)一步研究該基因?qū)顾枭窠?jīng)干細(xì)胞分化的影響提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法在無(wú)RNA酶污染的條件下提取出大鼠海馬總RNA。利用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)擴(kuò)增出Ng1基因片段。將該基因片段連接到真核表達(dá)載體pSecTag2/HygroB,聚合酶鏈反應(yīng)初步篩選,雙酶切鑒定后送測(cè)序。將構(gòu)建成功的重組真核表達(dá)載體轉(zhuǎn)染入cos-7細(xì)胞,Westernblot鑒定重組Ng1蛋白的表達(dá)。結(jié)果逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)成功獲得大鼠Ng1cDNA。隨機(jī)挑選10個(gè)重組真核表達(dá)載體的克隆,聚合酶鏈反應(yīng)篩選出陽(yáng)性克隆2個(gè),經(jīng)雙酶切鑒定、測(cè)序及Blast分析鑒定重組質(zhì)粒構(gòu)建成功。脂質(zhì)體介導(dǎo)轉(zhuǎn)染cos-7細(xì)胞48h后,Westernblot鑒定重組Ng1蛋白在cos-7細(xì)胞中的表達(dá),在46ku處出現(xiàn)陽(yáng)性條帶。結(jié)論大鼠海馬Ng1基因的真核表達(dá)載體pSecTag2/HygroB-Ng1構(gòu)建成功,轉(zhuǎn)染cos-7細(xì)胞后能夠表達(dá)重組Ng1蛋白。
[Abstract]:Objective to clone the neurogenesin-1 ng1) gene fragment from rat hippocampus and construct the eukaryotic expression vector of pSecTag2/HygroB-Ng1. Its expression in cos-7 cells was detected. Methods Total rat hippocampal RNA was extracted without RNA enzyme contamination and N was amplified by reverse transcriptase polymerase chain reaction (RT-PCR) in order to further study the effect of the gene on the differentiation of neural stem cells in spinal cord. The gene fragment was inserted into eukaryotic expression vector pSecTag2/HygroB. The recombinant eukaryotic expression vector was constructed and transfected into cos-7 cells. Results reverse transcriptase polymerase chain reaction (RT-PCR) was used to obtain rat Ng1cDNA. 10 recombinant eukaryotic expression vectors were randomly selected. Two positive clones were screened by polymerase chain reaction. The recombinant plasmid was identified by double enzyme digestion, sequencing and Blast analysis. The recombinant plasmid was transfected with liposome for 48 h. The expression of recombinant Ng1 protein in cos-7 cells was identified by Westernblot. Conclusion the eukaryotic expression vector pSecTag2/HygroB-Ng1 of rat hippocampal Ng1 gene was successfully constructed. The recombinant Ng1 protein was expressed after transfection of cos-7 cells.
【作者單位】： 安徽醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院骨科;安徽醫(yī)科大學(xué)分子生物學(xué)教研室;
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(編號(hào):30772201)
【分類(lèi)號(hào)】：R651.2;R346
【正文快照】： 近年來(lái),應(yīng)用內(nèi)源性神經(jīng)干細(xì)胞治療脊髓損傷越來(lái)越受到人們的關(guān)注。實(shí)驗(yàn)證明,成體動(dòng)物脊髓實(shí)質(zhì)中存在大量的神經(jīng)干細(xì)胞,但這種細(xì)胞通常處于靜止?fàn)顟B(tài),只有在脊髓損傷后才活躍增生。然而,這種細(xì)胞大部分向星形膠質(zhì)細(xì)胞的方向分化,參與局部的膠質(zhì)瘢痕形成。如何通過(guò)有效的刺激使

【參考文獻(xiàn)】

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【共引文獻(xiàn)】

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【二級(jí)參考文獻(xiàn)】

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【相似文獻(xiàn)】

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