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T淋巴細(xì)胞活化相關(guān)的microRNA的篩

發(fā)布時(shí)間:2018-01-02 11:52

  本文關(guān)鍵詞:T淋巴細(xì)胞活化相關(guān)的microRNA的篩選、靶分子的預(yù)測、構(gòu)建和鑒定 出處:《細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志》2009年08期  論文類型:期刊論文


  更多相關(guān)文章: microRNA(miRNA) 實(shí)時(shí)定量PCR T細(xì)胞活化 靶分子 雙熒光素酶實(shí)驗(yàn)


【摘要】:目的:篩選T細(xì)胞活化相關(guān)的microRNA并預(yù)測其靶分子,通過雙熒光素酶實(shí)驗(yàn)鑒定這些microRNA的靶分子。方法:利用ExiqonmiRNA基因表達(dá)譜芯片,以活化的Jurkat細(xì)胞(用CD3抗體和CD28抗體雙信號活化)為實(shí)驗(yàn)組,未活化Jurkat細(xì)胞為對照組,分析了二者miRNA表達(dá)譜的差異,找出表達(dá)水平顯著改變的miRNA,并通過實(shí)時(shí)定量PCR的方法對芯片結(jié)果進(jìn)行驗(yàn)證;構(gòu)建miRNA的真核表達(dá)載體;利用生物信息學(xué)方法預(yù)測miRNA的靶分子,構(gòu)建含靶分子3′UTR的熒光素酶報(bào)告基因質(zhì)粒;分別將miRNA基因真核表達(dá)質(zhì)粒與含有靶分子的熒光素酶報(bào)告基因質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染HEK293細(xì)胞,進(jìn)行熒光素酶實(shí)驗(yàn)來鑒定miRNA的靶分子。結(jié)果:ExiqonmiRNA基因表達(dá)譜芯片顯示:Jurkat細(xì)胞活化后,miR-202*、miR-33b、miR-568和miR-576的表達(dá)明顯下調(diào);實(shí)時(shí)定量PCR驗(yàn)證結(jié)果與芯片結(jié)果一致;酶切鑒定與序列測定證實(shí)miR-568的真核表達(dá)載體構(gòu)建成功;利用miRanda軟件預(yù)測miR-568的靶分子,篩選出與T細(xì)胞活化密切相關(guān)的分子;雙熒光素酶實(shí)驗(yàn)顯示miR-568對NFAT5有比較明顯的抑制作用。結(jié)論:T細(xì)胞活化后,miR-202*、miR-33b、miR-568和miR-576表達(dá)明顯下調(diào);NFAT5可能是miR-568作用的一個(gè)靶分子。
[Abstract]:Objective : To screen the expression profiles of miR - 202 * , miR - 33b , miR - 568 and miR - 576 by means of real - time quantitative PCR . The results showed that miR - 202 * , miR - 33b , miR - 568 and miR - 576 were significantly downregulated by using the miRanda software . Results : The expression profiles of miR - 202 * , miR - 33b , miR - 568 and miR - 576 were significantly downregulated by using miRanda software .

【作者單位】: 第四軍醫(yī)大學(xué)免疫學(xué)教研室;
【基金】:國家重點(diǎn)基礎(chǔ)研究發(fā)展計(jì)劃(973)資助項(xiàng)目(2004CB518805) 教育部“長江學(xué)者和創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)發(fā)展計(jì)劃”資助項(xiàng)目(IRT0459)
【分類號】:Q78
【正文快照】: microRNA簡稱miRNA,是一種21~25個(gè)堿基的非編碼小分子RNA,它廣泛存在于真核生物中。miRNA基因的初級轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物(pri-miRNA)在細(xì)胞核中被RNaseⅢDrosha切割成為前體miRNA(pre-miRNA),pre-miRNA在轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白5的作用下由核內(nèi)轉(zhuǎn)到胞質(zhì)中,然后由另一種RNaseⅢDicer進(jìn)一步切割產(chǎn)生成熟

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本文編號:1369091

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