本文關(guān)鍵詞：T淋巴細(xì)胞活化相關(guān)的microRNA的篩選、靶分子的預(yù)測、構(gòu)建和鑒定　出處：《細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志》2009年08期 　論文類型：期刊論文

  更多相關(guān)文章： microRNA(miRNA) 實(shí)時(shí)定量PCR T細(xì)胞活化 靶分子 雙熒光素酶實(shí)驗(yàn)

【摘要】：目的:篩選T細(xì)胞活化相關(guān)的microRNA并預(yù)測其靶分子,通過雙熒光素酶實(shí)驗(yàn)鑒定這些microRNA的靶分子。方法:利用ExiqonmiRNA基因表達(dá)譜芯片,以活化的Jurkat細(xì)胞(用CD3抗體和CD28抗體雙信號活化)為實(shí)驗(yàn)組,未活化Jurkat細(xì)胞為對照組,分析了二者miRNA表達(dá)譜的差異,找出表達(dá)水平顯著改變的miRNA,并通過實(shí)時(shí)定量PCR的方法對芯片結(jié)果進(jìn)行驗(yàn)證;構(gòu)建miRNA的真核表達(dá)載體;利用生物信息學(xué)方法預(yù)測miRNA的靶分子,構(gòu)建含靶分子3′UTR的熒光素酶報(bào)告基因質(zhì)粒;分別將miRNA基因真核表達(dá)質(zhì)粒與含有靶分子的熒光素酶報(bào)告基因質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染HEK293細(xì)胞,進(jìn)行熒光素酶實(shí)驗(yàn)來鑒定miRNA的靶分子。結(jié)果:ExiqonmiRNA基因表達(dá)譜芯片顯示:Jurkat細(xì)胞活化后,miR-202*、miR-33b、miR-568和miR-576的表達(dá)明顯下調(diào);實(shí)時(shí)定量PCR驗(yàn)證結(jié)果與芯片結(jié)果一致;酶切鑒定與序列測定證實(shí)miR-568的真核表達(dá)載體構(gòu)建成功;利用miRanda軟件預(yù)測miR-568的靶分子,篩選出與T細(xì)胞活化密切相關(guān)的分子;雙熒光素酶實(shí)驗(yàn)顯示miR-568對NFAT5有比較明顯的抑制作用。結(jié)論:T細(xì)胞活化后,miR-202*、miR-33b、miR-568和miR-576表達(dá)明顯下調(diào);NFAT5可能是miR-568作用的一個(gè)靶分子。
[Abstract]:Objective : To screen the expression profiles of miR - 202 * , miR - 33b , miR - 568 and miR - 576 by means of real - time quantitative PCR . The results showed that miR - 202 * , miR - 33b , miR - 568 and miR - 576 were significantly downregulated by using the miRanda software . Results : The expression profiles of miR - 202 * , miR - 33b , miR - 568 and miR - 576 were significantly downregulated by using miRanda software .

【作者單位】： 第四軍醫(yī)大學(xué)免疫學(xué)教研室;
【基金】：國家重點(diǎn)基礎(chǔ)研究發(fā)展計(jì)劃(973)資助項(xiàng)目(2004CB518805) 教育部“長江學(xué)者和創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)發(fā)展計(jì)劃”資助項(xiàng)目(IRT0459)
【分類號】：Q78
【正文快照】： microRNA簡稱miRNA,是一種21～25個(gè)堿基的非編碼小分子RNA,它廣泛存在于真核生物中。miRNA基因的初級轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物(pri-miRNA)在細(xì)胞核中被RNaseⅢDrosha切割成為前體miRNA(pre-miRNA),pre-miRNA在轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白5的作用下由核內(nèi)轉(zhuǎn)到胞質(zhì)中,然后由另一種RNaseⅢDicer進(jìn)一步切割產(chǎn)生成熟

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 趙玉華;王加啟;;利用實(shí)時(shí)定量PCR對瘤胃甲酸甲烷桿菌定量方法的建立與應(yīng)用[J];中國農(nóng)業(yè)科學(xué);2006年01期

2 羅焱杰;張成桂;劉元東;吳學(xué)玲;管昊;廖荷歡;羅海浪;劉學(xué)端;邱冠周;;氧化亞鐵硫桿菌中銅代謝相關(guān)兩個(gè)基因的差異(英文)[J];生物技術(shù);2009年02期

3 周瑞雪;蒙濤;孟海波;陳敦學(xué);賓石玉;成嘉;符貴紅;褚武英;張建社;;鱖魚基因表達(dá)轉(zhuǎn)錄分析中的內(nèi)參選擇比較(英文)[J];動物學(xué)研究;2010年02期

4 孫桂金;潘杰;劉可春;王雪;王思鋒;;斑馬魚不同發(fā)育時(shí)期血管內(nèi)皮生長因子受體2基因表達(dá)的實(shí)時(shí)定量PCR分析[J];安徽農(nóng)業(yè)科學(xué);2010年16期

5 王曉建;楊旭;宋曉東;張禪那;劉繼斌;邸冉;張連峰;惠汝太;;實(shí)時(shí)熒光定量PCR法檢測轉(zhuǎn)基因小鼠拷貝數(shù)[J];中國實(shí)驗(yàn)動物學(xué)報(bào);2007年03期

6 陳裕充;潘煒華;溫海;廖萬清;陳江漢;顧菊林;徐紅;;巨噬細(xì)胞對新生隱球菌主要毒性基因表達(dá)的影響[J];中國真菌學(xué)雜志;2008年06期

7 劉新星;武海艷;劉文斌;李壽朋;;氧化亞鐵硫桿菌中磁小體形成相關(guān)基因在不同亞鐵濃度刺激下的差異表達(dá)[J];生物工程學(xué)報(bào);2009年01期

8 梁婧;黃樸;傅文宇;徐立紅;;微囊藻毒素LR對人FL和HL7702細(xì)胞PP2A各亞基轉(zhuǎn)錄水平的影響[J];癌變.畸變.突變;2009年06期

9 趙麗;崔保安;陳紅英;趙玉叢;郭宏偉;;豬偽狂犬病病毒SYBR-GreenⅠ實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測方法的建立[J];中國獸醫(yī)學(xué)報(bào);2010年09期

10 尹靜;任春林;詹亞光;滕文華;陳秀福;王玉成;孫紅冉;;可用于實(shí)時(shí)熒光定量PCR標(biāo)準(zhǔn)化的白樺內(nèi)參基因[J];植物生理學(xué)通訊;2010年10期

相關(guān)會議論文 前10條

1 李一;閆立安;于春雷;;NF-κB誘導(dǎo)激酶(NIK)在TCR/CD3受體交聯(lián)的T細(xì)胞活化中的作用[A];中國免疫學(xué)會第四屆學(xué)術(shù)大會會議議程及論文摘要集[C];2002年

2 唐吉軍;郭磊;申睿;余濤;徐華;劉合珠;馬小溪;謝劍煒;;基于適配體的實(shí)時(shí)定量PCR檢測尿液中的人促紅細(xì)胞生成素[A];中國化學(xué)會第27屆學(xué)術(shù)年會第09分會場摘要集[C];2010年

3 劉洋;王u&民;郭艷鈴;;熒光實(shí)時(shí)定量PCR在耐多藥結(jié)核病檢測中的應(yīng)用[A];2004年中國防癆協(xié)會臨床基礎(chǔ)專業(yè)委員會學(xué)術(shù)會議論文集[C];2004年

4 侯春燕;王冬梅;;鈣調(diào)素參與小麥抵抗葉銹菌侵染的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)過程的研究[A];中國植物生理學(xué)會第十次會員代表大會暨全國學(xué)術(shù)年會論文摘要匯編[C];2009年

5 毛光宇;周雪琴;楊炯;陳宏斌;;過敏性哮喘患者樹突狀細(xì)胞對原始T細(xì)胞活化的影響[A];2005急診醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)研討會暨《中華急診醫(yī)學(xué)雜志》第四屆組稿會論文匯編[C];2005年

6 楊玲;黃辰;宋土生;左O;;LCM聯(lián)合實(shí)時(shí)定量PCR檢測基因擴(kuò)增的方法研究[A];中國細(xì)胞生物學(xué)學(xué)會醫(yī)學(xué)細(xì)胞生物學(xué)學(xué)術(shù)大會論文集[C];2006年

7 唐博;李淑鳳;錫林高娃;曹貴方;;蒙古綿羊β-防御素(sBD-1)mRNA相對表達(dá)水平的SYBR Green Ⅰ實(shí)時(shí)定量PCR方法的建立[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會動物解剖學(xué)及組織胚胎學(xué)分會第十五次學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2008年

8 班巧英;劉桂豐;王玉成;張大偉;蔣麗麗;;一個(gè)新的二色補(bǔ)血草金屬硫蛋白基因LbMT2的克隆及其表達(dá)分析[A];第六屆全國林木遺傳育種大會論文集[C];2008年

9 趙宗勝;曹體婷;班謙;;雌激素受體等基因在雞、鵪鶉及其屬間雜交種早期胚胎中的表達(dá)分析[A];中國動物遺傳育種研究進(jìn)展——第十五次全國動物遺傳育種學(xué)術(shù)討論會論文集[C];2009年

10 孫艷梅;張楠楠;李寶珍;劉景輝;袁紅莉;陳文新;;苜蓿與老芒麥間作及間作接種根瘤菌對根際土壤微生態(tài)環(huán)境的影響[A];土壤資源持續(xù)利用和生態(tài)環(huán)境安全——中國土壤學(xué)會第十一屆二次理事擴(kuò)大會議暨學(xué)術(shù)會議論文集[C];2009年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前8條

1 劉永銘;T淋巴細(xì)胞加重動脈粥樣硬化[N];中國中醫(yī)藥報(bào);2003年

2 中原;CARMA1可控制免疫系統(tǒng)[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2002年

3 羅剛;移植耐受——器官移植患者的希望[N];健康報(bào);2003年

4 ;治療類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎有新法[N];科技日報(bào);2002年

5 羅剛;治糖尿病辟蹊徑免疫耐受重建成靶點(diǎn)[N];健康報(bào);2004年

6 楊華;熒光定量PCR技術(shù)[N];中國食品質(zhì)量報(bào);2003年

7 海怡;生物藥物CTLA4lg可治療類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎[N];中國高新技術(shù)產(chǎn)業(yè)導(dǎo)報(bào);2002年

8 朱水芳;轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品向我們走來[N];中國國門時(shí)報(bào)(中國出入境檢驗(yàn)疫報(bào));2000年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 應(yīng)可凈;肺癌活檢組織中PLK1 mRNA表達(dá)的研究[D];浙江大學(xué);2004年

2 郭宇飛;鴨病毒性腸炎病毒CH強(qiáng)毒株部分生物學(xué)特性的研究及熒光實(shí)時(shí)定量PCR檢測方法的建立和應(yīng)用[D];四川農(nóng)業(yè)大學(xué);2005年

3 王玉飛;IV型分泌系統(tǒng)調(diào)控布魯氏菌胞內(nèi)生存的分子機(jī)制研究[D];中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2008年

4 楊燕麗;實(shí)時(shí)定量PCR法研究嗜鉻細(xì)胞瘤的基因表達(dá)[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2008年

5 燕海潮;應(yīng)用基因表達(dá)譜芯片篩選胰腺癌病人外周血單個(gè)核細(xì)胞的腫瘤相關(guān)基因[D];浙江大學(xué);2006年

6 倪多嬌;櫛孔扇貝抗氧化酶基因的克隆與表達(dá)分析[D];中國科學(xué)院研究生院（海洋研究所）;2007年

7 龐愛梅;痹清飲對類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎活動期T細(xì)胞免疫調(diào)控機(jī)理研究[D];山東中醫(yī)藥大學(xué);2008年

8 袁秀芳;馬傳染性貧血病驢白細(xì)胞弱毒感染性分子克隆及其衍生毒的生物學(xué)和分子生物學(xué)特性分析[D];中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2004年

9 徐泱;噬菌體文庫體內(nèi)展示篩選肝癌腫瘤血管特異性靶向分子[D];復(fù)旦大學(xué);2004年

10 楊洪平;Ezrin siRNA對骨肉瘤細(xì)胞株SaOS-2 ezrin表達(dá)及生物學(xué)行為的影響[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2005年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 李偉;T淋巴細(xì)胞活化相關(guān)的microRNA的篩選、靶分子的預(yù)測、構(gòu)建和鑒定[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2009年

2 李峰;應(yīng)用基因表達(dá)譜芯片篩選IgA腎病患者腎穿組織相關(guān)基因的研究[D];福建醫(yī)科大學(xué);2007年

3 武海艷;氧化亞鐵硫桿菌中磁小體形成相關(guān)基因的研究[D];中南大學(xué);2008年

4 劉維青;海灣扇貝金屬硫蛋白cDNA序列克隆及其在鎘和鰻弧菌誘導(dǎo)下的表達(dá)研究[D];中國海洋大學(xué);2005年

5 肖艱;實(shí)時(shí)定量PCR監(jiān)測CML患者伊馬替尼治療后BCR-ABL融合基因變化及耐藥機(jī)制的初步探討[D];四川大學(xué);2007年

6 溫娜;細(xì)胞因子信號轉(zhuǎn)導(dǎo)抑制分子3與子癇前期關(guān)系的研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2008年

7 丁士華;實(shí)時(shí)定量PCR檢測PML/RARα mRNA技術(shù)平臺的建立及其在急性早幼粒細(xì)胞白血病中的應(yīng)用[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2009年

8 章雪蓮;HMGB1mRNA和蛋白在宮頸鱗癌組織中的表達(dá)及臨床意義研究[D];中南大學(xué);2008年

9 趙偉;實(shí)時(shí)定量PCR技術(shù)在油菜菌核病菌對多菌靈抗藥性監(jiān)測中的應(yīng)用研究[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2005年

10 王婷玉;實(shí)時(shí)定量PCR監(jiān)測CML患者造血干細(xì)胞移植后bcr-abl融合基因變化[D];四川大學(xué);2006年

，

本文編號：1369091