本文關(guān)鍵詞：結(jié)核分枝桿菌早期分泌靶抗原和抗原85B融合蛋白的原核表達及其在血清學(xué)檢測中的初步應(yīng)用　出處：《中國病原生物學(xué)雜志》2015年05期 　論文類型：期刊論文

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【摘要】：目的原核表達結(jié)核分枝桿菌抗原早期分泌抗原靶6ku蛋白和抗原85B融合蛋白,建立融合抗原對結(jié)核病人快速診斷方法。方法從結(jié)核分枝桿菌H37Rv基因組中PCR擴增ag85B和Rv3875基因并構(gòu)建表達載體pGEX4T-1上,轉(zhuǎn)化BL21經(jīng)IPTG誘導(dǎo)表達GST-85B-ESTA-6融合蛋白,對包涵體進行變性和透析復(fù)性后進行GST親和層析純化,純化的可溶性目的蛋白用聚丙烯酰胺凝膠電泳和Western blot進行鑒定;以融合蛋白為抗原,采用ELISA檢測結(jié)核病人血清抗體。結(jié)果成功構(gòu)建了結(jié)核分枝桿菌ag85B和Rv3875融合基因原核表達載體,轉(zhuǎn)化大腸埃希菌BL21后經(jīng)誘導(dǎo)產(chǎn)生了高水平的GST-85B-ESTA-6,該蛋白存在于菌體沉淀中,以包涵體形式居多。包涵體經(jīng)變性、復(fù)性后用GST親和層析純化,純化蛋白仍能與結(jié)核病患者血清反應(yīng),即可用于病人血清抗體檢測。結(jié)論成功構(gòu)建了pGEX4T-1-ag85B-Rv3875重組質(zhì)粒,并誘導(dǎo)表達了含有GST-標(biāo)簽的ESAT-6-85B融合蛋白,為進一步研究結(jié)核菌的免疫機制奠定了基礎(chǔ)。
[Abstract]:Objective To construct a prokaryotic expression vector of GST - 85B - ESTA - 6 fusion protein by PCR from Mycobacterium tuberculosis H37Rv genome and to construct the fusion protein of GST - 85B - ESTA - 6 .

【作者單位】： 河南省疾病預(yù)防控制中心;
【基金】：十二五科技重大專項(No.2014ZX10003002)
【分類號】：R392
【正文快照】： *?**?肺結(jié)核是由結(jié)核分枝桿菌感染引起的嚴(yán)重危害人類健康的疾病,我國結(jié)核病年發(fā)病人數(shù)約為130萬,每年因結(jié)核病死亡人數(shù)達13萬。人口流動、細菌耐多藥和結(jié)核菌/艾滋病病毒雙重感染是結(jié)核病防治工作所面臨的新挑戰(zhàn)[1]。目前卡介苗(BCG)是唯一可用的結(jié)核病疫苗,從1921年至今已有

【共引文獻】

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2 孫麗娜;孫京濤;田永全;;結(jié)核桿菌特異性抗原對結(jié)核病診斷價值研究[J];中外醫(yī)療;2015年14期

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【二級參考文獻】

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本文編號：1365562