本文關鍵詞：兔AMSCs與BMSCs成骨分化比較及OGP對AMSCs成骨分化干預的實驗研究　出處：《昆明醫(yī)學院》2009年碩士論文　論文類型：學位論文

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【摘要】： 第一部分兔脂肪間充質干細胞與兔骨髓間充質干細胞增殖及成骨分化對比實驗研究 【目的】分離兔骨髓間充質干細胞和脂肪間充質干細胞,比較兩種細胞的體外增殖及成骨分化能力,為脂肪間充質干細胞替代骨髓間充質干細胞做為骨組織工程種子細胞提供依據。 【方法】無菌條件下切取兔雙側腹股溝脂肪墊和抽取髂骨骨髓,利用細胞貼壁性對骨髓間充質干細胞和脂肪間充質干細胞進行分離,比較兩種細胞的情況,包括(1)細胞形態(tài)、(2)細胞貼壁率、(3)細胞生長動力學、(4)細胞表面標記、(5)堿性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)、Von kossa染色鑒定向成骨方向分化的能力(6)堿性磷酸酶及游離鈣含量定量測定。并對數(shù)據進行統(tǒng)計學分析。 【結果】(1)兩種細胞形態(tài)均為條索樣,呈成纖維細胞樣形態(tài)。(2)對兩種細胞貼壁率進行重復測量方差分析,F=2.905,P＞0.05,無顯著統(tǒng)計學差異,即可以認為不同時間點兩種細胞貼壁率相似。(3)脂肪間充質干細胞的增殖能力與骨髓間充質干細胞相當,消化后的第2、5代細胞經歷24-48小時的潛伏期后,進入6-9天的對數(shù)生長期,然后過渡到平臺期。(4)通過免疫細胞化學檢測顯示,骨髓間充質干細胞和脂肪間充質干細胞表面均陽性表達CD44。(5)兩種細胞堿性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)染色、Von kossa染色均為陽性。(6)兩種細胞成骨誘導后堿性磷酸酶定量測定,對于兩組不同來源的細胞誘導后的ALP值進行重復測量方差分析,F=3.067,P＞0.05,無統(tǒng)計學差異,即可認為不同時間點兩種細胞ALP值相當。(7)游離鈣含量測定,對于兩組不同來源的細胞誘導后的鈣含量進行重復測量方差分析,F=7.564,P＞0.05,無統(tǒng)計學差異,即可認為不同時間點兩種細胞ALP值相當。 【結論】(1)自兔脂肪中可提取出與骨髓間充質干細胞生物學特性類似的脂肪間充質干細胞。(2)相同條件下脂肪間充質干細胞與骨髓間充質干細胞成骨能力無顯著性差異。(3)脂肪間充質干細胞可以作為骨組織工程種子細胞。 第二部分OGP對兔脂肪間充質干細胞增殖與成骨分化干預的實驗研究 【目的】觀察成骨生長肽(OGP)對兔脂肪間充質干細胞增殖及成骨分化的影響。 【方法】貼壁法分離獲得兔脂肪間充質干細胞,通過換液和傳代純化細胞。用傳二代細胞做MTT試驗,以此確定OGP對脂肪間充質干細胞增殖作用的最佳活性濃度。將傳3代脂肪間充質干細胞以10~5/孔的密度接種于6孔板中,以確定促進AMSCs成骨分化最佳OGP活性濃度。以及最佳活性濃度OGP、10~(-8)mol/L地塞米松及二者聯(lián)合應用時對AMSCs成骨分化比較。 【結果】當OGP濃度處于一定范圍內(10~(-11)-10~(-7)mol/L)時能明顯促進兔脂肪間充質干細胞的增殖活性,其最佳作用濃度為10~(-11)mol/L。不同濃度OGP對AMSCs成骨分化與對照組相比均具有明顯促進作用(P＜0.05),且最佳濃度為10~(-9)mol/L(P＜0.05)。10~(-9)mol/LOGP與10~(-8)mol/L地塞米松具有相當?shù)某晒切?P＞0.05)。10~(-9)mol/LOGP與10~(-8)mol/L地塞米松聯(lián)合應用具有正協(xié)同效應,高于其他組效應(P＜0.05)。 【結論】在兔脂肪間充質干細胞的體外培養(yǎng)中,OGP對脂肪干細胞的增殖及成骨分化有明顯促進作用,說明OGP在骨組織工程中有廣闊的應用前景。
[Abstract]:Comparative Experimental Study on the Proliferation of Bone Marrow Mesenchymal Stem Cells and Rabbit Bone Marrow Mesenchymal Stem Cells and Osteogenic Differentiation of Rabbit Bone Marrow Mesenchymal Stem Cells Objective To isolate the rabbit bone marrow mesenchymal stem cells ( MSCs ) and adipose - derived mesenchymal stem cells ( MSCs ) , compare the in vitro proliferation and osteogenic differentiation ability of the two kinds of cells , and provide the basis for the replacement of bone marrow mesenchymal stem cells ( MSCs ) as the seed cells of bone tissue engineering . Methods The bone marrow of rabbit ' s bilateral inguinal fat pad was cut off under aseptic conditions . The cells were isolated by cell adhesion , including ( 1 ) cell morphology , ( 2 ) cell adherent rate , ( 3 ) cell growth kinetics , ( 4 ) cell surface marker , ( 5 ) alkaline phosphatase ( ALP ) and Von kossa staining . ( 4 ) The ALP values of the two groups were similar . ( 4 ) The ALP values of the two groups were similar . ( 4 ) The ALP values of the bone marrow mesenchymal stem cells and the adipose - mesenchymal stem cells were measured after 24 - 48 hours . Conclusion : ( 1 ) There is no significant difference between fat - derived mesenchymal stem cells and bone marrow mesenchymal stem cells from rabbit fat . ( 3 ) Adipose mesenchymal stem cells can be used as seed cells of bone tissue engineering . Effect of the second part of OGP on the proliferation and osteogenic differentiation of rabbit adipose - derived mesenchymal stem cells Objective To observe the effect of bone growth peptide ( OGP ) on the proliferation and osteogenic differentiation of rabbit fat mesenchymal stem cells . The optimal concentration of OGP on the proliferation of adipose - derived mesenchymal stem cells was determined by MTT assay . RESULTS : When OGP concentration was within a certain range ( 10 ~ ( -11 ) -10 ~ ( -7 ) mol / L ) , the optimal concentration of OGP was 10 ~ ( -11 ) mol / L . The optimal concentration was 10 ~ ( -9 ) mol / L ( P < 0 . 05 ) . 10 ~ ( -9 ) mol / LOGP and 10 ~ ( -8 ) mol / L dexamethasone have positive synergistic effect , which is higher than that of other group ( P < 0.05 ) . Conclusion : In vitro culture of rabbit adipose - derived mesenchymal stem cells , OGP can promote the proliferation and osteogenic differentiation of adipose - derived stem cells , suggesting that OGP has a wide application prospect in bone tissue engineering .

【學位授予單位】：昆明醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2009
【分類號】：R329

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