本文關(guān)鍵詞：HIV-1特異性優(yōu)勢肽段CTL應(yīng)答及HIV-1特異性Th細(xì)胞應(yīng)答研究　出處：《第四軍醫(yī)大學(xué)》2008年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

  更多相關(guān)文章： I型人類免疫缺陷病毒 獲得性免疫缺陷綜合征 細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞 輔助性T細(xì)胞 人類白細(xì)胞抗原 酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)法

【摘要】： 人類免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus, HIV)是近20年來獲得性免疫缺陷綜合征(acquired immunodeficiency syndrome, AIDS,簡稱為艾滋病)在全球大流行的根本原因,艾滋病已成為人類主要的致死性疾病之一。目前全球現(xiàn)存HIV感染者和艾滋病患者已達(dá)3320萬人,僅2007年新增感染者達(dá)250余萬,全球每天有6800人感染HIV,同時(shí)有5700人死于艾滋病。高效抗逆轉(zhuǎn)錄病毒療法(HAART)雖能降低部分患者病毒含量,重建部分免疫功能,延緩病情發(fā)展,改善癥狀,但是因藥物副作用大、費(fèi)用昂貴、依從性差和產(chǎn)生耐藥等問題不能為大多數(shù)患者完全接受,更為重要的是HAART不能徹底清除病毒。所以研發(fā)安全、有效、廉價(jià)的HIV-1疫苗是目前防治艾滋病病毒傳播流行的首要任務(wù)。大量研究證明細(xì)胞免疫特別是HIV特異性細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞(CTL)在控制HIV感染中發(fā)揮關(guān)鍵作用,然而對于絕大多數(shù)感染者而言,由于缺乏CD4+T細(xì)胞的輔助作用,大量的HIV-1特異性CTL細(xì)胞不能發(fā)揮作用,故而無法完全控制感染。由此可見CD4+T輔助細(xì)胞在中和抗體介導(dǎo)的有效的病毒清除中非常重要,在對HIV-1特異性CTL細(xì)胞進(jìn)行深入探討的同時(shí)不能忽視對HIV-1特異性CD4+T細(xì)胞的研究。而有效的HIV-1特異性CTL應(yīng)答不僅由抗原結(jié)構(gòu)決定,同時(shí)受HLA-I類等位基因限制,因此在篩選和鑒定具有強(qiáng)而廣泛作用的HIV-1特異性CTL表位時(shí),對表位HLA-I類分子限制性的研究是必不可少的。中國人群HLA-I類等位基因分布明顯不同于其他種族,而HIV-1病毒主要流行株與國外也存在差異,因此決定了中國人群HIV-1特異性CTL應(yīng)答模式的獨(dú)特性。目前對中國HIV-1感染者特異性CD4+T細(xì)胞應(yīng)答和免疫優(yōu)勢特異性CTL應(yīng)答的研究較少,所以在中國人群開展HIV-1特異性CD4+T細(xì)胞應(yīng)答和免疫優(yōu)勢CTL應(yīng)答的研究非常必要。 本研究以102例HIV-1感染者作為研究對象,檢測其HLA等位基因分型、病毒載量以及對覆蓋HIV-1B亞型全基因組序列的413條重疊肽段的特異性CTL應(yīng)答,闡明了中國HIV-1感染者特異性CTL應(yīng)答的免疫優(yōu)勢模式,評估了其優(yōu)勢肽段特異性CTL應(yīng)答同病毒載量的相關(guān)性;同時(shí)應(yīng)用ELISpot法檢測14名HIV-1感染者對覆蓋HIV-1B亞型Gag和Nef蛋白序列的94條重疊肽段特異性CD4+T細(xì)胞應(yīng)答,分析了中國人群HIV-1感染者HIV-1特異性CD4+T細(xì)胞應(yīng)答特征,確定免疫優(yōu)勢應(yīng)答區(qū)域,為研發(fā)針對中國人群的安全有效的HIV-1/AIDS疫苗提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 主要研究內(nèi)容和結(jié)果如下: 1.用PCR-SSP(系列特異性引物-PCR)技術(shù)鑒定納入研究的102例HIV-1感染者/AIDS患者的HLA-I類等位基因分型,發(fā)現(xiàn)10個(gè)HLA-I類基因A*02,A*24,A*11,B*13,B*46,B*15,Cw*03,Cw*01,Cw*07和Cw*06在研究人群分布頻率大于20%,而國外研究發(fā)現(xiàn)的同HIV疾病緩慢進(jìn)展相關(guān)的等位基因B*27和B*57在我們研究中分布頻率較低,均小于3%。上述結(jié)果同先前的研究一致,符合中國人群HLA-I類等位基因的分布規(guī)律。 2.應(yīng)用ELISpot法研究了102名HIV-1感染者對覆蓋HIV-1B亞型全基因組序列的413條重疊肽段的特異性CTL應(yīng)答,其中165條覆蓋了研究對象各自HLA-I類等位基因限制的CTL優(yōu)勢表位(依據(jù)Los Alamos National Laboratory公布表位),評估了HIV-1感染者HLA-I類等位基因的免疫優(yōu)勢模式。 3.比較了慢性感染者和艾滋病患者HLA-I類等位基因限制的優(yōu)勢肽段識(shí)別率的差異。HLA-A*2,-A*24,-B*07,-B*15和-B*58限制的優(yōu)勢肽段在慢性感染者中平均識(shí)別頻率較艾滋病患者中平均識(shí)別頻率高(P=0.017,P=0.041,P=0.004,P=0.005,P=0.042),而對于HLA-A*11限制的優(yōu)勢肽段在兩組中的識(shí)別頻率與上述結(jié)果相反(P=0.020)。慢性感染者HLA-A和-B等位基因限制的優(yōu)勢肽段特異性CTL應(yīng)答占總應(yīng)答的比例同病毒載量之間沒有發(fā)現(xiàn)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的關(guān)聯(lián)(r=0.014,P=0.923)。而艾滋病患者HLA-A和-B等位基因限制的優(yōu)勢肽段特異性CTL應(yīng)答占總應(yīng)答的比例同病毒載量之間存在著負(fù)相關(guān)(r= -0.321,P=0.026),上述數(shù)據(jù)表明HLA-I類等位基因限制的優(yōu)勢CTL應(yīng)答在終末期感染中發(fā)揮著控制病情進(jìn)展的重要作用。 4.通過ELISpot法檢測了14名HIV-1感染者針對Gag和Nef蛋白的特異性CD4+T細(xì)胞應(yīng)答的廣泛性和特異性。不論研究對象是否接受治療,處于不同疾病階段的對象都能對Gag p17,p24,p15和Nef蛋白產(chǎn)生HIV-1特異性CD4+T細(xì)胞應(yīng)答;CD4+T細(xì)胞應(yīng)答強(qiáng)度和應(yīng)答幅度同病毒載量之間均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的相關(guān)性(P0.05);確定了17個(gè)應(yīng)答頻率高于20%,標(biāo)準(zhǔn)化CD4+T細(xì)胞應(yīng)答大于50 SFC/106CD4+T細(xì)胞的免疫優(yōu)勢區(qū)。將9名研究對象的Gag和Nef蛋白特異性CTL應(yīng)答同CD4+T細(xì)胞應(yīng)答比較發(fā)現(xiàn)77.78%(7/9)對象的CD4+T細(xì)胞應(yīng)答強(qiáng)度和幅度要高于其CTL應(yīng)答。 綜上所述,本研究總結(jié)了中國HIV-1感染者的HLA-I類等位基因分布規(guī)律,評估了HIV-1特異性CTL應(yīng)答的免疫優(yōu)勢模式,比較了特異性HLA-I類等位基因同HIV-1疾病進(jìn)展的關(guān)系,表明即使在感染終末期,HLA-A和-B類等位基因限制的優(yōu)勢CTL應(yīng)答依然發(fā)揮了重要的延緩疾病進(jìn)展的作用;中國人群HIV-1感染者特異性CD4+T細(xì)胞應(yīng)答模式同國外人群特異性CD4+T細(xì)胞應(yīng)答模式之間存在明顯差異,確定了17個(gè)免疫優(yōu)勢應(yīng)答區(qū)域,為闡明HIV-1特異性CD4+T細(xì)胞對CD8+T的輔助作用提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù),對于研發(fā)針對中國人群的安全、有效的HIV疫苗,控制艾滋病的蔓延具有重要的意義。
[Abstract]:Human immunodeficiency virus ( HIV ) is one of the main causes of HIV infection in China . In this study , 102 HIV - 1 infected individuals were tested for HLA allele typing , viral load and specific CTL responses to 413 overlapping peptide segments covering the whole genome sequence of HIV - 1 infection . The main research contents and results are as follows : 1 . HLA - I alleles were identified by PCR - SSP ( serial - specific primer - PCR ) in 102 patients with HIV - 1 infected with HIV - 1 , and found that 10 HLA - I genes A * 02 , A * 24 , A * 11 , B * 13 , B * 46 , B * 15 , A * 11 , B * 13 , B * 46 , B * 15 , CW * 03 , CW * 01 , CW * 07 and CW * 06 were distributed more frequently in the study population than 3 % . The results were consistent with previous studies and were consistent with the distribution of HLA - I alleles in Chinese population . 2 . The specific CTL responses of 102 HIV - 1 - infected individuals to 413 overlapping peptide segments covering the whole genome sequence of HIV - 1B subtype were studied by the method . 165 of them covered the HLA - I allele - limited CTL epitopes of the subjects ( according to Los Alamos National Laboratory ) , and the immunodominant patterns of HLA - I alleles in HIV - 1 infected individuals were assessed . 3 . The difference between HLA - A * 2 , - A * 24 , - B * 07 , - B * 15 and - B * 58 in patients with chronic infection were compared . The average frequency of HLA - A * 2 , - A * 24 , - B * 07 , - B * 15 and - B * 58 were higher in the patients with chronic infection ( P = 0 . 017 , P = 0.041 , P = 0.004 , P = 0.005 , P = 0.042 ) . HLA - A and HLA - B alleles were negatively correlated with viral load ( r = - 0.321 , P = 0.026 ) and HLA - A and HLA - B alleles were negatively correlated with viral load ( r = - 0.321 , P = 0.026 ) . 4 . There was no significant correlation between CD4 + T cell response intensity and response amplitude and viral load in 14 HIV - 1 infected individuals . The response intensity and response amplitude of CD4 + T cells were higher than 20 % , and CD4 + T cell responses were greater than 50 SFC / 106CD4 + T cells . In conclusion , this study summarizes the distribution of HLA - I alleles in HIV - 1 infected individuals in China , evaluates the immune superiority pattern of HIV - 1 specific CTL responses , and compares the relationship between HLA - 1 specific CD4 + T cell response patterns and HIV - 1 disease progression .

【學(xué)位授予單位】：第四軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2008
【分類號(hào)】：R512.91;R392

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 ;關(guān)于我國艾滋病疫苗研發(fā)策略的建議[J];中國科學(xué)院院刊;2006年05期

，

本文編號(hào)：1361464