本文關(guān)鍵詞：糖皮質(zhì)激素—聚乙烯亞胺作為新型基因給藥系統(tǒng)的研究　出處：《浙江大學(xué)》2010年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】： 本研究旨在利用糖皮質(zhì)激素(GC)與細(xì)胞質(zhì)中糖皮質(zhì)激素受體(GR)特異性結(jié)合后轉(zhuǎn)移入細(xì)胞核的能力,合成一種具有細(xì)胞核靶向能力,低毒、高效的新型陽離子非病毒基因給藥載體,并考察了其體內(nèi)體外的轉(zhuǎn)染效果。采用了效價(potency)和LogP評價GC結(jié)構(gòu)與轉(zhuǎn)染結(jié)果的關(guān)系。 利用Traut's試劑將5種糖皮質(zhì)激素:倍他米松(BEX),地塞米松(DEX),甲基潑尼松龍(MPL)、潑尼松龍(PNL)和氫化可的松(HC)接枝到PEI 1800,得到了5種GC-PEIs,取代度都在1左右。 通過瓊脂糖凝膠電泳,緩沖能力擦拭,DLS粒徑測定和Zeta電位測定實驗檢測了GC-PEIs/pDNA的理化性質(zhì),五種GC-PEIs與pDNA的復(fù)合物理化性質(zhì)相似。然而,體外HEK 293和HepG2兩種細(xì)胞系上的細(xì)胞毒性和轉(zhuǎn)染效率測定結(jié)果都證實了GC的修飾顯著提高了PEI 1800的轉(zhuǎn)染效率,但是五種GC之間有明顯差異。針對GC的結(jié)構(gòu)與轉(zhuǎn)染效果的關(guān)系考察,采用了分子模擬對接程序考察了5種GC和GR的結(jié)合情況,并比較了用效價和LogP值來評價轉(zhuǎn)染效果的可行性。 同時,采用激光共聚焦顯微鏡對載體在細(xì)胞內(nèi)進(jìn)行定位,發(fā)現(xiàn)BET-PEI基本實現(xiàn)了細(xì)胞核靶向的目的。小鼠體內(nèi)肝門靜脈注射BET-PEI包載pEGFP-N1復(fù)合物,倒置熒光顯微成像和流式細(xì)胞術(shù)FCM測定都再一次證明了BET-PEI能顯著提高轉(zhuǎn)染效率,并超過PEI 25k的水平。
[Abstract]:The purpose of this study is to use Glucocorticoid (GC) and glucocorticoid receptor in the cytoplasm (GR) specific binding capacity after the transfer into the nucleus, with synthesis of a nuclear targeting ability, low toxicity, a new cationic efficient non viral gene delivery vectors, and investigated its in vitro and in vivo transfection effect. The titer of the relationship between LogP (potency) and evaluation of GC structure and transfection results.
Using Traut's reagent 5 glucocorticoid betamethasone (BEX), dexamethasone (DEX), methyl (MPL), P Nixonn Ron P Nixonn Ron (PNL) and hydrocortisone (HC) grafted to PEI 1800, we got 5 kinds of GC-PEIs, the degree of substitution are 1.
By agarose gel electrophoresis, buffer capacity wipe, DLS particle size and Zeta potential were measured to detect the physicochemical properties of GC-PEIs/pDNA composite, physical and chemical properties of five kinds of GC-PEIs is similar with pDNA. However, in vitro determination of HEK 293 and HepG2 two cell lines on the cytotoxicity and transfection efficiency are confirmed by the results of the modification of GC significantly improve the transfection efficiency of PEI 1800, but there is significant difference between the five kinds of GC. The influences of relationship between the structure and the transfection efficiency of GC, using the molecular docking program was investigated with 5 kinds of GC and GR, and the feasibility to evaluate the transfection efficiency value with titer and LogP.
At the same time, the location within the cell carrier by laser scanning confocal microscope, BET-PEI found the basic realization of the purpose of nuclear targeting. Mice hepatic portal vein injection of BET-PEI loaded pEGFP-N1 composite inverted fluorescence microscopy and flow cytometry determination of FCM have once again proved that BET-PEI can significantly improve the transfection efficiency, and more than the PEI 25K level.

【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類號】：R346

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本文編號：1356825