本文關(guān)鍵詞：血紅素加氧酶-1在間充質(zhì)干細(xì)胞中的作用研究　出處：《蘭州大學(xué)》2009年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】： 目的:建立人骨髓MSCs培養(yǎng)、擴(kuò)增、鑒定及外周血T淋巴細(xì)胞分離、純化、鑒定的方法;檢測(cè)MSCs中HO-1的表達(dá)及HO-1對(duì)MSCs凋亡的影響;探討免疫活性細(xì)胞和免疫調(diào)節(jié)因子對(duì)間充質(zhì)干細(xì)胞及MSCs中HO-1的影響。HO-1對(duì)MSCs免疫抑制效應(yīng)的影響。 方法:密度梯度離心法分離單個(gè)核細(xì)胞,細(xì)胞貼壁法培養(yǎng)并擴(kuò)增MSCs,倒置相差顯微鏡下觀察MSC細(xì)胞形態(tài),流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)MSCs表面抗原;尼龍棉柱法從外周血分選出T淋巴細(xì)胞,流式細(xì)胞術(shù)進(jìn)行鑒定;RT-PCR方法檢測(cè)MSCs中HO-1mRNA的表達(dá)。形態(tài)學(xué)觀察、流式細(xì)胞術(shù)Annexin V檢測(cè)細(xì)胞凋亡及凋亡細(xì)胞DNA含量測(cè)定。在IFN-γ及PHA活化的T細(xì)胞刺激下,應(yīng)用RT-PCR方法檢測(cè)HO-1 mRNA的表達(dá),應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)分析細(xì)胞凋亡情況。外周血T淋巴細(xì)胞用植物血凝素(PHA)刺激后,將其與MSCs共孵育,再加入HO-1特異性抑制劑Znpp-IX,MTT法測(cè)定T細(xì)胞的增殖并計(jì)算增殖轉(zhuǎn)化抑制率。 結(jié)果:MSCs形態(tài)均一,流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果顯示CD44、CD71高表達(dá)。RT-PCR結(jié)果顯示正常骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞有血紅素加氧酶-1mRNA的表達(dá),加入HO-1異性抑制劑(Znpp-IX)可明顯促進(jìn)細(xì)胞凋亡,同時(shí)DNA含量分布圖上可見明顯的凋亡細(xì)胞峰。在IFN-γ及活化的T細(xì)胞刺激后HO-1mRNA表達(dá)下調(diào)。流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果表明,IFN-γ及Znpp-IX的加入使間充質(zhì)干細(xì)胞凋亡增加,而兩者同時(shí)加入使細(xì)胞凋亡更加明顯。MSCs可使異體T細(xì)胞增殖轉(zhuǎn)化受抑,加入Znpp-IX可使MSCs對(duì)T淋巴細(xì)胞免疫抑制效應(yīng)減弱。 結(jié)論:正常骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞有HO-1mRNA的表達(dá),HO-1在人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞中具有抗凋亡作用。HO-1在MSCs對(duì)T淋巴細(xì)胞的免疫抑制效應(yīng)中可能發(fā)揮重要的作用。免疫活性細(xì)胞及免疫調(diào)節(jié)因子使骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞中H0-1mRNA表達(dá)下調(diào),進(jìn)而引起細(xì)胞凋亡增加。這一實(shí)驗(yàn)結(jié)果為再生障礙性貧血發(fā)病機(jī)制的研究提供了新的理論依據(jù)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：蘭州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2009
【分類號(hào)】：R329

【引證文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1354057