發(fā)布時(shí)間：2017-12-30 05:18

  本文關(guān)鍵詞：轉(zhuǎn)染cxcr4基因?qū)撬栝g充質(zhì)干細(xì)胞向SDF-1趨化能力的影響　出處：《福建醫(yī)科大學(xué)》2009年碩士論文　論文類(lèi)型：學(xué)位論文

  更多相關(guān)文章： 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞 腺病毒載體 定向趨化 cxcr4 SDF-1

【摘要】： 目的:(1)構(gòu)建攜帶cxcr4基因的重組腺病毒載體;(2)將重組腺病毒轉(zhuǎn)染骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(Bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs),并驗(yàn)證轉(zhuǎn)染后BMSCs表達(dá)CXCR4增加;(3)檢測(cè)轉(zhuǎn)染cxcr4基因后的BMSCs向基質(zhì)細(xì)胞衍生因子1(stromal cell-derivedfactor-1,SDF-1)的定向趨化能力。 方法:(1)分離培養(yǎng)C57BL/6小鼠BMSCs,并通過(guò)利用流式細(xì)胞儀檢測(cè)其細(xì)胞表面標(biāo)志物CD44和CD34的表達(dá)進(jìn)行鑒定;(2)通過(guò)RT-PCR獲取cxcr4基因,亞克隆入pAdTrack-CMV穿梭質(zhì)粒,線(xiàn)性化后與骨架質(zhì)粒pAdeasy-1在BJ5183菌中完成同源重組,篩選并提取重組正確的腺病毒質(zhì)粒,脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染293細(xì)胞包裝出成熟的具有感染活力的腺病毒顆粒,利用穿梭質(zhì)粒中所帶綠色熒光蛋白(Green fluorescence protein,GFP)報(bào)告基因進(jìn)行病毒滴度和感染活力測(cè)定;(3)將攜帶cxcr4基因的重組腺病毒載體轉(zhuǎn)染BMSCs,分別從熒光表達(dá)、蛋白表達(dá)來(lái)驗(yàn)證轉(zhuǎn)染成功;(4)并通過(guò)Transwell趨化實(shí)驗(yàn)來(lái)驗(yàn)證經(jīng)cxcr4基因轉(zhuǎn)染的BMSCs向SDF-1趨化能力強(qiáng)于未轉(zhuǎn)染的BMSCs,并觀(guān)察抗CXCR4中和抗體的干預(yù)作用。 結(jié)果:(1)成功分離培養(yǎng)及鑒定C57BL/6小鼠BMSCs;(2)成功構(gòu)建重組腺病毒載體pAdEasy-1-cxcr4,測(cè)序結(jié)果正確,病毒滴度5.3×10~(10)U/ml;(3)轉(zhuǎn)染cxcr4基因前,BMSCs表達(dá)CXCR4水平較低,轉(zhuǎn)染后表達(dá)CXCR4水平明顯升高;(4)Transwell趨化實(shí)驗(yàn)表明轉(zhuǎn)染cxcr4基因后的BMSCs針對(duì)SDF-1的趨化能力比未轉(zhuǎn)染的BMSCs明顯升高(p＜0.05)。 結(jié)論:通過(guò)腺病毒載體轉(zhuǎn)染cxcr4基因能夠使BMSCs表達(dá)CXCR4增加,并能明顯提高基因轉(zhuǎn)染后的BMSCs向SDF-1定向趨化的能力。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：福建醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2009
【分類(lèi)號(hào)】：R346

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