本文關(guān)鍵詞：維持人胚胎干細(xì)胞不分化的鼠飼養(yǎng)層細(xì)胞標(biāo)準(zhǔn)化操作的建立與殘留的絲裂霉素C對(duì)人胚胎干細(xì)胞基因組穩(wěn)定性影響的研究　出處：《中南大學(xué)》2009年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】： 人胚胎干細(xì)胞(human embryonic stem cells,hES cells)是一種從人類早期胚胎的內(nèi)細(xì)胞團(tuán)中分離出來的多能性干細(xì)胞。一方面,它能在體外特定的環(huán)境下保持不分化的狀態(tài)并且無限擴(kuò)增。另一方面,在特殊的誘導(dǎo)條件下,它又能分化成特定的組織細(xì)胞,如神經(jīng)細(xì)胞,胰島素分泌細(xì)胞,心肌細(xì)胞和造血細(xì)胞等,成為神經(jīng)退行性疾病,糖尿病,心肌梗塞和血液疾病等疑難疾病的細(xì)胞替代治療的重要細(xì)胞來源。 上世紀(jì)60年代開始到90年代末,小鼠,靈長類等哺乳動(dòng)物的胚胎干細(xì)胞陸續(xù)建系成功。在此基礎(chǔ)上,1998年,美國Thomson等建立了第一個(gè)人胚胎干細(xì)胞系,于是,研究開發(fā)這種具有巨大臨床應(yīng)用前景的生物資源,立即成為生物醫(yī)學(xué)界最具吸引力的熱門領(lǐng)域。但是,由于人胚胎干細(xì)胞取自人類早期發(fā)育胚胎,因此受到倫理道德方面的質(zhì)疑,研究也一度受到限制,發(fā)展受到制約。2009年初,美國食品藥品監(jiān)督管理部門(Food and drug administration,FDA)批準(zhǔn)了第一例利用人胚胎干細(xì)胞治療脊髓損傷的臨床治療試驗(yàn),隨著這一臨床治療試驗(yàn)的獲批,人胚胎干細(xì)胞的研究將又一次成為生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域新的熱潮,而相應(yīng)的倫理規(guī)范也將進(jìn)一步完善,為胚胎干細(xì)胞的研究提供依據(jù)與支持。 本課題組所在的研究所從2001年開始人胚胎干細(xì)胞的建系和培養(yǎng)工作,并于2002年成功建立人胚胎干細(xì)胞系。但是在課題研究之初,維持人胚胎干細(xì)胞體外培養(yǎng)的環(huán)境是很不穩(wěn)定的,出現(xiàn)大量分化,甚至大量死亡的現(xiàn)象。人胚胎干細(xì)胞體外培養(yǎng)的體系較其它細(xì)胞嚴(yán)苛和復(fù)雜,需要事先制備一層有絲分裂滅活的飼養(yǎng)層細(xì)胞作為支持,然后才能進(jìn)行傳代。傳代后的培養(yǎng)需每天更換添加了各種因子的培養(yǎng)基,直到六天后下一個(gè)傳代日的到來再重復(fù)上述過程。一般來說,這一層有絲分裂滅活的飼養(yǎng)層細(xì)胞是鼠胚胎成纖維細(xì)胞,它取材比較方便,不存在倫理學(xué)爭(zhēng)議,但是操作步驟繁雜,而且這種細(xì)胞分裂次數(shù)有限,每個(gè)批次的細(xì)胞用完都必需重新制備。本課題的研究就是從標(biāo)準(zhǔn)化鼠源性飼養(yǎng)層細(xì)胞的制備入手,分析造成人胚胎干細(xì)胞體外培養(yǎng)環(huán)境不穩(wěn)定的因素,探討人胚胎干細(xì)胞體外培養(yǎng)的安全性問題,為人胚胎干細(xì)胞臨床應(yīng)用提供安全穩(wěn)定的種子細(xì)胞。本文共包括兩大部分: 第一部分:標(biāo)準(zhǔn)化鼠胚胎成纖維細(xì)胞(mouse embryonic fibroblasts,mEFs)作為飼養(yǎng)層細(xì)胞(feeder cells)的操作程序。利用Microsoft office中的Access軟件,建立小型管理數(shù)據(jù)庫。 第二部分:探討絲裂霉素C對(duì)人胚胎干細(xì)胞體外培養(yǎng)的毒性影響。試圖揭示人胚胎干細(xì)胞體外核型變化以及DNA損傷修復(fù)應(yīng)答缺陷的機(jī)制。
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【學(xué)位授予單位】：中南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2009
【分類號(hào)】：R329

【引證文獻(xiàn)】

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1 劉峰;小鼠胚胎干細(xì)胞定向誘導(dǎo)分化為胰島樣細(xì)胞過程中Kcnq1、Cdkn1c基因印記變化及其機(jī)理研究[D];中南大學(xué);2010年

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本文編號(hào)：1352197